納洛酮對大鼠腎臟缺血－再灌注損傷的保護作用

黃黎芳

(四川省自貢市第四人民醫院藥劑科，四川 自貢 643000)

納洛酮是一種特異性阿片受體拮抗劑，對心肌缺血－再灌注損傷有一定的保護作用[1－2]，但對腎臟的缺血－再灌注損傷是否有保護作用目前尚未見報道。本研究利用大鼠腎臟缺血－再灌注損傷模型，觀察納洛酮對腎臟缺血－再灌注后血液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及腎組織中Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶變化的影響，觀察組織病理學變化，探討納洛酮對腎臟缺血－再灌注損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

UV－2101PC型紫外分光光度計(日本島津公司)。鹽酸納洛酮注射液(軍事醫學科學院毒物藥物研究所研制，北京四環制藥廠生產，批號為950525);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及ATP酶試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，批號為960726。Wistar大鼠60只，雌雄不拘，體重為210～270 g，平均(239±19)g，購自山東醫科大學實驗動物中心。

1.2 分組與試驗方法

將Wisfar大鼠隨機分為5組，即正常對照組(假手術組，A組)、腎缺血60 min組(B組)、腎缺血60 min再灌注20 min組(C組)、納洛酮低劑量組和高劑量組(D1組和D2組)，D1組和D2組分別于術前1 h腹腔注射納洛酮2 mg/kg與4 mg/kg，每組12只。大鼠肌肉注射30%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉，腹部正中切開后，切除右側腎臟，以無損傷動脈夾夾閉左腎動脈，制成腎缺血模型。手術結束后從下腔靜脈取血，用以測定MDA及SOD。切取左腎，用冷生理鹽水沖洗除去血液，濾紙拭干稱重(稱取0.5 g)，用玻璃勻漿器制成2%的組織勻漿，按試劑盒說明測定Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力，同時做蛋白定量測定[3]。留取部分腎組織，用甲醛溶液固定，制成石蠟切片，HE染色，光鏡檢查。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 對血中MDA含量和SOD活力的影響

B組與A組血漿MDA含量及全血SOD活力均無顯著性差異(P＜0.05);C組MDA的含量明顯升高，SOD活力顯著降低，與A組和 B 組比較有顯著性差異(P ＜0.01，P ＜0.05)。D1組和 D2組與C組比較，MDA含量明顯下降，SOD活力明顯升高，與B組及A組無顯著差異。結果見表1。

表1 各組觀察指標比較(±s，n=12)

表1 各組觀察指標比較(±s，n=12)

注:與 A 組比較，＊P＜0.01;與 C 組比較，△P ＜0.05，▲P＜0.01。

組別A組B組C組D1組D2組MDA(μmol/L)4.8 ± 1.0 5.3 ± 2.0 12.5 ± 3.5＊8.9 ± 1.5＊△5.7 ± 1.0▲SOD(NU/mL)142±37 120±16 92±35＊136 ±24＊△143±16▲Na+－K+－ATP酶[μmolPi/(mg·pr·h)]3.6 ± 0.7 3.1 ± 1.2 2.1 ± 0.5＊2.8 ± 1.0 2.9 ± 0.6▲Ca+－ATP酶[μmolPi/(mg·pr·h)]3.9 ± 0.7 3.1 ± 1.3 2.1 ± 0.4＊2.6 ± 0.5＊△3.3 ± 0.6▲

2.2 對腎組織中Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力的影響

B組Na+－K+－ATP酶和Ca2+－ATP酶活力與A組間無顯著性差異(P＜0.05);C組酶活力明顯下降，與上述兩組相比有顯著性差異(P＜0.01)。D1組中 Na+－K+－ATP酶活力有所升高，但與C組相比無顯著性差異(P＜0.05);D2組與C組相比有顯著性差異(P＜0.1)。各組 Ca2+－ATP酶的變化與 Na+－K+－ATP酶的變化基本相同。結果見表1。

2.3 腎臟組織病理學檢查結果

缺血60 min后，大鼠腎臟變為暗紅色，明顯水腫;再灌注20 min后，腎臟外觀與缺血組(B組)比較無明顯變化，預先給予納洛酮的大鼠腎臟缺血－再灌注后外觀明顯好轉，顏色接近正常，僅有小范圍的暗紅色區域。光鏡下見缺血組(B組)部分腎小管上皮水樣變性，并見蛋白管型，腎間質局部出血伴水腫;再灌注組(C組)腎小管上皮細胞明顯水樣變性，腎間質局部出血伴水腫，并見蛋白管型;納洛酮低劑量組(D1組)腎小管上皮輕度水樣變性，腎間質輕度水腫，偶見管型;高劑量組(D2組)僅見部分腎小管上皮輕度水樣變性。各組腎小球均無明顯變化。

3 討論

許多研究表明，腎臟缺血－再灌注造成腎組織損傷的主要機制是:缺血時血管內皮細胞的黃嘌呤脫氫酶轉變為黃嘌呤氧化酶，再灌注時催化ATP降解產物次黃嘌呤氧化生成尿酸，這個過程可產生大量氧自由基，可導致脂肪損傷，產生脂質過氧化物，破壞生物膜的結構，使細胞變性、壞死[4]。本研究發現，單純腎缺血60 min時MDA無明顯改變，再灌往20 min后其值明顯升高;而SOD在缺血時變化不明顯，再灌注時顯著下降，這與文獻報道結果一致[5]。應用納洛酮后MDA下降，SOD升高，表明納洛酮能抑制脂質過氧化物升高，增強清除自由基的能力，高劑量比低劑量作用更明顯。

腎小管細胞的基側膜內有Na+－K+－ATP酶，在離子轉運過程中起重要作用。該酶的主要功能是泵出細胞內Na+，泵入細胞外K+，維持機體內環境的穩定。Na+－K+－ATP酶減少，將導致細胞內Na+蓄積和K+丟失，同時Ca2+濃度升高，從而導致線粒體腫脹，氧化一磷酸化脫偶聯，進而引起腎組織的一系列損傷[6]。本研究結果表明，納洛酮能防止腎臟缺血－再灌注損傷時組織中Na+－K+－ATP酶活力的降低。

有研究表明，腎缺血后腎組織中Ca2+－ATP酶活力降低，細胞內Ca2+濃度升高。高度Ca2+可激活細胞內Ca2+依賴性蛋白酶和磷酸脂酶，引起蛋白、磷脂水解，游離脂肪酸釋放，細胞膜結構和骨架破壞。本研究發現，腎缺血時Ca2+－ATP酶活力較對照組降低，但無統計學意義，再灌注時Ca2+－ATP酶活力明顯降低，應用納洛酮后可使此酶活力明顯升高。

綜上所述，納洛酮對大鼠腎臟缺血－再灌注損傷有一定的保護作用。

[1]Caldwell RW，Nagarijan R，Chryssanthis A，et al.Action of the opioid antagonists，Nalosxne and congeners on reperfustion cardiac arrythmias and regional left coronary bolld flow[J].Pharmacology，1990，41(3):61－63.

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[3]鄭軍華，魏 武，閔志廉.器官保存領域的新進展[J].國外醫學·泌尿系統分冊，1995，15(65):216 －218.

[4]王 鳳，邵國興，秦榮良，等.氧自由基及其清除劑VitE、輔酶Q10在腎缺血中作用的實驗研究[J].中華器官移植雜志，1994，15(1):28－30.

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[6]Cohen JJ，Harrington JT，Madias NE，et al.Mechanisms of ischemic acute renal failure[J].Kidney Lnt，1993，43:1 160.