食管鱗狀細胞癌組織中POKemon和P14ARF蛋白的表達

榮愛梅，郭長青

鄭州大學第一附屬醫院消化內科鄭州450052

(2010-11-24收稿 責任編輯 王 曼)

POKemon基因即POK紅系髓性致癌因子，是POK轉錄抑制物家族成員，能特異性抑制抑癌基因ARF，促進腫瘤的發生發展［1］。該基因在肝癌、非小細胞肺癌、鼻咽癌、乳癌及惡性膠質細胞瘤等多種腫瘤組織中表達明顯增高［2-6］。P14ARF是細胞周期依賴性激酶4抑制因子家族中的一員，通過細胞周期的調控發揮抑癌作用［7］。作者通過檢測POKemon和P14ARF蛋白在食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)及正常組織中的表達，探討POKemon和P14ARF與ESCC發生發展的關系及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選用鄭州大學第一附屬醫院病理科2009年1月至2010年3月經病理證實的ESCC患者的病理組織蠟塊88例及部分相應的正常食管黏膜組織蠟塊28例，均為胸外科手術切除標本?；颊咝g前均未接受過放化療及免疫治療，男65例，女23例，年齡45～74歲;高分化23例，中分化40例，低分化25例;TNM分期Ⅰ、Ⅱ期49例，Ⅲ、Ⅳ期39例;有淋巴結轉移32例，無淋巴結轉移56例。

1.2 POKemon及P14ARF蛋白的免疫組化染色POKemon、P14ARF兔抗人多克隆抗體均購自北京博奧森生物技術有限公司，抗體工作濃度分別為1∶100和1∶200。SP-9001免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司，采用SP三步法，按試劑盒說明操作，DAB顯色，蘇木素復染，鹽酸乙醇分色。以PBS替代一抗作為空白對照，用已知陽性片作陽性對照。

1.3 結果判定 POKemon和P14ARF蛋白陽性表現為胞膜及胞質出現棕黃色染色。每張切片取5個400倍視野，首先按染色強度計分:無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;然后計數陽性細胞:陽性細胞百分數＜5%為0分，5% ～為1分，25% ～為2分，≥50%為3分;兩項積分之和≤3分為陰性(－)，＞3分為陽性(+)。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0進行分析。正常食管黏膜和ESCC組織中2種蛋白陽性表達率的比較應用配對χ2檢驗，不同臨床病理特征的ESCC組織中2種蛋白陽性表達率的比較應用χ2檢驗，以列聯系數評估ESCC組織中2種蛋白表達的關系，檢驗水準 α=0.05。

2 結果

2.1 正常食管黏膜和ESCC組織中P14ARF和POKemon的表達 見圖1、表1。

圖1 正常食管黏膜及ESCC組織中POKemon和P14ARF免疫組化染色(SP，×400)A，B:分別為ESCC及正常食管黏膜組織中POKemon蛋白的表達;C，D:分別為正常食管黏膜及ESCC組織中P14ARF蛋白的表達。

表1 正常食管黏膜及ESCC組織中POKemon和P14ARF蛋白的表達 例

2.2 ESCC組織中POKemon和P14ARF蛋白表達與臨床病理特征的關系 見表2。

2.3 ESCC組織中POKemon和P14ARF蛋白表達的關聯性分析 見表3。

表2 POKemon和P14ARF蛋白的表達與ESCC臨床病理特征的關系

表3 ESCC組織中POKemon和P14ARF蛋白表達的關聯性 例

3 討論

癌基因POKemon是近年發現的轉錄抑制因子，廣泛存在于人類成熟組織的細胞系中。Stogios等［8］研究表明POKemon的POZ結構域是一個轉錄調節器，POKemon抑制多種重要基因的轉錄，包括ARF、c-fos和 c-myc等。Maeda等［1］研究發現，POKemon過表達無論在轉基因鼠的體內還是體外都導致了明顯的致癌性細胞轉化，說明POKemon與腫瘤有著密切的關系。該研究結果表明，POKemon在ESCC癌組織中高表達，而在正常組織中低表達，POKemon的表達與ESCC的TNM分期和淋巴結轉移有關，而與性別、年齡及分化程度無關。說明POKemon在ESCC的發生及浸潤轉移中起重要作用。

抑癌基因P14ARF位于INK4a/ARF基因位點，此基因位點在人染色體9p21上，可編碼 P16和P14ARF 2種蛋白。P14ARF對細胞周期有顯著的負性調控作用，多種研究［9-10］表明其抑癌機制為通過P14ARF的N端與MDM2的C端結合，抑制MDM2在胞核與胞質中穿梭，促使其降解，從而抑制P53的降解，將細胞周期阻斷在G1期和G2/M轉換期或促進凋亡，抑制腫瘤發生。也有研究［11］認為P14ARF可以通過非依賴p53途徑發揮抑癌作用。Cheng等［12］研究表明在人ESCC組織中P53的表達與MDM2、P14ARF有關，并且P14ARF常見于P53和MDM2都表達陽性的標本。由以上研究可以推斷ESCC的發生可能是通過下調ARF→上調MDM2→下調p53→腫瘤發生。該研究結果顯示P14ARF在ESCC中低表達，P14ARF的表達與ESCC組織的分化程度有關，而與性別、年齡、TNM分期和淋巴結轉移均無關。

該研究結果還顯示，ESCC中 POKemon與P14ARF表達呈負相關，兩者表達失衡可能導致腫瘤的發生。POKemon與P14ARF在多種腫瘤組織(乳癌［13］、非小細胞肺癌［3］等)中的表達具有相關性，并且POKemon是P53途徑的一個重要的控制器［14］。POKemon致癌機制可能為POKemon的過表達特異性抑制 P14ARF的轉錄活性，通過 ARFMDM2-P53途徑促使腫瘤發生。

綜上所述，POKemon與P14ARF在ESCC發生發展中發揮著重要作用，有望成為ESCC診斷、基因治療的新靶點和預后判斷的重要指標。

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