卵巢癌組織中胃泌素釋放肽及其受體的表達*

樊冬梅，史惠蓉，陳志敏，劉惠娜，張瑞濤

1)鄭州大學第一附屬醫院婦產科 鄭州450052 2)河南科技大學第一附屬醫院婦科 洛陽471003

(2010-10-12收稿 責任編輯 趙秋民)

作為婦科三大惡性腫瘤之一，卵巢癌的病死率高居婦科惡性腫瘤之首［1］。因為卵巢解剖位置隱匿，早期病變常缺乏臨床癥狀，患者就診時往往已屬晚期，且5 a生存率不足20%［2-3］。近年來，國內外研究［4-8］發現胃泌素釋放肽(gastrin-releasing peptide，GRP)及其受體(GRPR)在許多惡性腫瘤的發生中起重要作用。作者應用免疫組化方法檢測卵巢癌組織中GRP和GRPR的表達情況，并分析二者與卵巢癌患者的臨床病理特征的關系，探討GRP和GRPR在卵巢癌發生發展中的作用及意義。

1 材料與方法

1.1 材料來源 選擇2001年1月至2009年1月就診于鄭州大學第一附屬醫院的病歷資料完整的卵巢癌患者［58例，年齡39～60(51.3±8.7)歲;有家族史11例;根據2000年FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期41例;高分化20例，中-低分化38例;漿液性癌29例，黏液性癌16例，子宮內膜樣癌8例，其他類型5例;有腹水45例;有淋巴結轉移30例;術前均未接受過放化療及免疫治療］、良性卵巢上皮性腫瘤［49例，其中漿液性29例，黏液性20例;年齡31～66(48.9±6.5)歲］和同期就診于該院的因子宮脫垂行子宮切除術要求切除一側或雙側正常卵巢［37例，年齡40～70(55.1±9.3)歲］的卵巢組織存檔蠟塊。均經病理確診，行5μm厚連續切片，室溫存放待用。

1.2 不同卵巢組織中GRP和GRPR蛋白的檢測抗GRP蛋白多克隆抗體(美國R＆D公司，產品編號MAB35841)、抗GRPR蛋白多克隆抗體(英國Abcam公司，產品編號ab39963)、鏈霉卵白素-過氧化物酶試劑盒和DAB底物試劑盒購自上海越研生物公司。采用免疫組化SP法檢測GRP和GRPR蛋白的表達，實驗嚴格按照試劑盒說明書進行。以胞質內出現黃色顆粒為陽性，均采用已知的胃癌陽性石蠟切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。結果判斷標準［9］:光鏡下選取20個高倍視野，每個視野計數100個細胞。①根據陽性細胞的比例計分:未見陽性細胞計0分，陽性細胞＜1/3計1分，1/3～2/3計2分，＞2/3計3分。②根據陽性細胞染色強度計分:細胞無著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分。2項積分之積＞1分為陽性。

1.3 統計學處理 采用SPSS 12.0進行分析，應用χ2檢驗比較不同卵巢組織中GRP和GRPR蛋白陽性表達率的差異及其與臨床病理特征的關系，計算列聯系數分析卵巢癌組織中GRP和GRPR表達的關聯性，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同卵巢組織中GRP和GRPR蛋白的表達見圖1和表1。

2.2 GRP和GRPR蛋白的表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系 見表2。

圖1 不同卵巢組織中GRP(A)和GRPR(B)蛋白的表達(SP，×400)1:正常卵巢組織;2:良性卵巢上皮性腫瘤組織;3:卵巢癌組織。

表2 GRP和GRPR蛋白的表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系

2.3 卵巢癌組織中GRP和GRPR蛋白表達的關聯性分析 見表3。

表3 卵巢癌組織中GRP和GRPR蛋白表達的關聯性 例

3 討論

正常情況下，GRP是消化道內的一種P細胞產生的分泌性細胞因子，在局部以旁分泌或自分泌的方式調節胃腸激素的分泌和膽囊的收縮，在一些神經系統疾病中還具有傳遞神經沖動的作用［10］。Qiao等［6］發現，在上游基因PI3K信號通路的作用下，GRP能夠顯著增強神經母細胞瘤細胞的增殖，使其進入活躍的細胞周期，提示GRP參與細胞的癌變。作者發現卵巢癌組織中GRP和GRPR呈高表達，提示二者可能參與了卵巢癌的發生。惡性腫瘤的發生早期與細胞異常活躍的增殖分裂密切相關，因此，參與惡性腫瘤早期變化的分泌性細胞因子有可能被釋放到內環境或血液中，成為腫瘤早期診斷的高度特異性指標，從這一角度來看，GRP亦有可能成為卵巢癌早期診斷的一個有潛力的指標。

該研究還發現，GRP和GRPR均與卵巢癌的分化程度有關，分化程度越低，二者的表達就越高，由此可推測，細胞的分化程度越偏離正常，其分泌GRP的活性也越高，并且GRPR的表達也越高，過高的GRP和高表達的GRPR結合后，又發揮更強的促分裂作用，導致低分化的卵巢癌病情進展加速。

除了促細胞有絲分裂外，Taglia等［11］還發現GRP與GRPR結合后可通過粘著斑激酶(FAK)作用于細胞間黏附因子-1，引起結腸癌細胞的黏附性增加，從而引起腫瘤的侵襲轉移。該組資料顯示，GRPR還與卵巢癌的FIGO分期和腹水形成有關，說明GRPR不僅參與了卵巢癌變，還可能進一步參與了卵巢癌的侵襲轉移。但該研究發現GRP與提示卵巢癌轉移的臨床指標之間無明顯關聯，且GRP和GRPR在卵巢癌組織中的表達無關聯性。作者認為這可能是由于惡性腫瘤的發生和發展是多個基因共同作用的結果，在進展期卵巢癌中可能還存在另外一些調控GRP表達和分泌的基因，或者卵巢癌發生中的另外一些基因也參與了上調GRPR表達的過程。

作者的研究結果提示GRP和GRPR不僅參與了卵巢癌的發生，同時GRPR與腫瘤分化、腹水等臨床病理特征結合，極有可能成為一個判斷卵巢癌預后的有潛力的靶標。在下一步的研究中進行卵巢癌患者的組織和血清中GRP的檢測，并比對其一致性，將有助于探討GRP作為卵巢癌的早期診斷指標的價值。

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［2］王英芳.上皮性卵巢癌組織中P53和Survivin蛋白的表達［J］.鄭州大學學報:醫學版，2007，42(5):935

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［11］Taglia L，Matusiak D，Matkowskyj KA，et al.Gastrin-releasing peptide mediates its morphogenic properties in human colon cancer by upregulating intracellular adhesion protein-1(ICAM-1)via focal adhesion kinase［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2007，292(1):G182