麻口皮子藥總黃酮的提取及含量測定

陳 興，張志國

(1.湖南省岳陽市一人民醫(yī)院，湖南 岳陽 414000; 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007)

麻口皮子藥總黃酮的提取及含量測定

陳 興1，張志國2

(1.湖南省岳陽市一人民醫(yī)院，湖南 岳陽 414000; 2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007)

目的 比較麻口皮子藥中總黃酮的不同提取方法并進(jìn)行含量測定，為地方藥材資源的合理開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法 以510 nm為檢測波長測定吸光度，比較回流法提取、超聲提取和浸漬法提取所得總黃酮的量。結(jié)果 回流法提取所得總黃酮量較多，對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度在 0.42 ～4.2 μg/mL 范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好，回歸方程 A=0.264 7 C+0.032，r=0.999 0(n=6);平均回收率為 97.53% ，RSD=1.85%(n=6)。結(jié)論 紫外分光光度法可用于麻口皮子藥的質(zhì)量控制。

紫外分光光度法;麻口皮子藥;總黃酮;含量測定

麻口皮子藥為蕓香科植物柄果花椒 Zanthoxylum simulans Hance var.podocarpum(Hemsl.)Huang 的干燥干皮及枝皮，味辛、澀，性溫，入肺、肝、脾三經(jīng)，具有祛風(fēng)散寒、活血止痛的功效，臨床用于風(fēng)寒濕痹、跌打損傷、蛇咬傷等，效果良好[1]。所含黃酮類化合物具多種生物活性，有抗?jié)儭⒖惯^敏、抗菌、抗炎、抗氧化、抗衰老、降血脂、治療心腦血管疾病等作用。因麻口皮子藥為地方藥材，目前對(duì)其研究甚少[2－3]。筆者比較了3種方法提取麻口皮子藥中總黃酮類化合物的優(yōu)劣，并建立了含量測定方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

UV－2501 PC型紫外可見分光光度計(jì)(日本島津);HH－S8型數(shù)顯恒溫水浴鍋;電子分析天平;超聲波清洗器。蘆丁對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所);麻口皮子藥(湖南振興中藥飲片有限公司);60%乙醇。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱取干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品4.2 mg，置10 mL量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品貯備液;精密吸取對(duì)照品貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度，即得含蘆丁42 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液制備[4]

2.2.1 回流法提取

精密稱取樣品1 g，加入6倍量的60%乙醇，回流提取2次，每次60 min，合并所得溶液，定容至100 mL，重復(fù)試驗(yàn)3次。

2.2.2 超聲提取

精密稱取樣品1 g，加入6倍量的60%乙醇，超聲提取2次，每次60 min，合并所得溶液，定容至100 mL，重復(fù)試驗(yàn)3次。

2.2.3 浸漬法提取

精密稱取樣品1 g，加入6倍量的60%乙醇，冷浸提取4次，每次60 min，合并所得溶液，定容至100 mL。重復(fù)試驗(yàn)3次。

2.3 吸收波長選擇

取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5 mL，進(jìn)行全波長掃描，對(duì)照品溶液和供試品溶液在510 nm波長處均有最大吸收，因此選擇510 nm作為檢測波長。

2.4 統(tǒng)計(jì)分析

以SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用最小顯著差數(shù)法對(duì)3種提取方法所得數(shù)據(jù)進(jìn)行完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果見表1和表2。表中結(jié)果表明，回流法提取所得總黃酮較多，3組數(shù)據(jù)多個(gè)樣本均數(shù)兩兩比較，差異均有顯著性意義(P＜0.05)。

表1 3種提取方法提取總黃酮的結(jié)果

表2 3種方法提取總黃酮方差分析結(jié)果

2.5 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品溶液 0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL，置 10 mL 容量瓶中，以乙醇為空白，于 510 nm 波長處測定吸光度。以質(zhì)量濃度 C(g/mL)為橫坐標(biāo)、吸光度值 A為縱坐標(biāo)作圖。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度在0.42～4.2 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好，回歸方程 A=0.264 7 C+0.032，r=0.999 0(n=6)。

精密度試驗(yàn):吸取同一質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液，連續(xù)測定6次，以吸光度值計(jì)算精密度。結(jié)果 RSD=1.46%(n=6)。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品6份，按回流提取法制備溶液，測得總黃酮含量(以蘆丁計(jì))的 RSD為1.79%(n=6)，表明方法重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):按回流提取法制備供試品溶液，精密吸取同一供試品溶液，于 0，4，8，12，24，48 h 時(shí)測定吸光度，RSD=1.51%(n=6)，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量(總黃酮含量為0.973 6%)的藥材粉末6份，每份約0.1 g，精密稱定，分別精密加入質(zhì)量濃度為42 μg/mL的對(duì)照品溶液20，25，30 mL，按回流提取法操作，定容至100 mL，精密量取1 mL，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加水至刻度，作為供試品溶液，測定吸光度，計(jì)算回收率。結(jié)果見表3。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.6 樣品含量測定

取3批樣品，每批3份，每份約1 g。按回流提取法制備溶液，測定其含量，結(jié)果批號(hào)為090612，090915，091106的3批樣品中，總黃酮平均含量分別為 1.004 6% ，1.071 3% ，0.973 6% ，RSD 分別為 1.26%，1.73%，1.84%(n=3)。

3 討論

曾考察了不同濃度(30%，40%，50%，60%，70%，80%)的乙醇，結(jié)果用60%乙醇提取的總黃酮量較多，且溶液雜質(zhì)較少，故采用 60%乙醇提取;還比較了不同提取時(shí)間(30，45，60，90 min)，結(jié)果提取60 min所得總黃酮量比提取30 min和45 min多，與提取90 min相差不大，從節(jié)省時(shí)間考慮，選擇60 min作為提取時(shí)間。而回流提取、超聲提取、浸漬法提取3種方法中，回流法提取所得總黃酮量較多，為1.124 2%。

[1]湖南省衛(wèi)生廳.湖南中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M].長沙:湖南科學(xué)技術(shù)出版社，1993:304－307.

[2]陳 興，張志國，黃開顏.麻口皮子藥總黃酮醇提工藝研究[J].中南藥學(xué)，2008，6(4):434－436.

[3]符明進(jìn)，張紹梅.酸麻膏治療嬰幼兒濕疹臨床觀察[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，25(1):40－48.

[4]馬合木提·買買提明，海力茜·陶爾大洪，瑪依拉，等.紫外分光光度法測定維藥鷹嘴豆中總黃酮的含量[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18(4):889.

Extraction and Content Determination of Total Flavonoids in Cortex Zanthoxyli

Chen Xing1，Zhang Zhiguo2
(1.The First People’s Hospital of Yueyang，Yueyang，Hunan，China 414000;2.The First Affiliated Hospital， Hunan University of Traditional Chinese Medicine， Changsha， Hunan， China 410007)

Objective To compare different extraction and content determination methods of total flavonoids in Cortex Zanthoxyli，in order to provide experimental evidence for the rational application of local medicine resources.Methods The detection wavelength was 510 nm.To compare the volumes of total flavonoids extracted by using reflux extraction，ultrasonic extraction and impregnation extraction methods.Results The volume of total flavonoids extracted by reflux extraction was more than the others.The linear detection concentration range of total flavonoids was 0.42－4.2 μg/mL，and the regression equation was A=0.264 7 C+0.032， r=0.999 0(n=6).Conclusion The method can be used for the quality control of Cortex Zanthoxyli.

UV－spectrophotometry;Cortex Zanthoxyli;total flavonoids;content determination

TQ461;R284.1;R282.71

A

1006－4931(2011)05－0038－02

2010－04－07;

2010－09－02)

陳興，男，碩士研究生，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作，(電子信箱)chenxing19770812@163.com。