姜的溫中功效物質(zhì)研究

崔瑛，紀(jì)彬，馮志毅，王君明

姜，是姜科zingiberaceae姜屬植物Zingiber officinale Rosc的根莖。作為中藥使用，分別為生姜、干姜和炮姜。生姜始載于《名醫(yī)別錄》，性味辛，溫。歸肺、胃、脾經(jīng)。功效解表散寒，溫中止嘔，化痰止咳。主治風(fēng)寒感冒，嘔吐，肺寒咳嗽[1]。干姜始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，性味辛，熱。歸脾、胃、腎、心、肺經(jīng)。功效溫中散寒，回陽(yáng)通脈，溫肺化飲。主治中焦寒證脘腹冷痛、嘔吐、泄瀉，亡陽(yáng)厥逆，寒飲咳喘[1]。炮姜始載于《珍珠囊》，性味苦、澀，溫。歸脾、肝經(jīng)。功效溫經(jīng)止血，溫中止痛。主治虛寒性吐血、便血、崩漏、脘腹疼痛，泄瀉[1]。姜的三個(gè)炮制品種雖然有生姜微溫、辛散力強(qiáng)；干姜性熱，溫陽(yáng)、散寒力強(qiáng)；炮姜味苦而澀，善止耗散等不同。但也均具有溫性、歸脾胃經(jīng)、溫中等共同特征。

姜的主要成分為揮發(fā)油、烷基酚類、長(zhǎng)鏈不飽和脂肪酸酯苷類等[2]，但生姜、干姜、炮姜三者在成分構(gòu)成上有一定差異[3,4]。藥理研究表明，姜具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥、興奮心臟、增強(qiáng)心肌收縮力、抗缺氧、抗?jié)儭⒅雇隆⒋龠M(jìn)胃酸分泌、保肝利膽、抑制血小板聚集、抗氧化、抗病原微生物等作用[5]。可見(jiàn)，目前對(duì)姜化學(xué)成分和藥理作用已有廣泛、深入的研究，但對(duì)于姜溫中功效的物質(zhì)基礎(chǔ)，在認(rèn)識(shí)上還存在空白。針對(duì)這一現(xiàn)實(shí)，本實(shí)驗(yàn)采用“病證―效應(yīng)―血清藥物化學(xué)分析”結(jié)合的研究方法，在中醫(yī)脾胃虛寒病證模型上，觀察姜的溫中作用，同時(shí)對(duì)含藥血清進(jìn)行化學(xué)分析，以此獲得對(duì)姜的溫中功效物質(zhì)的認(rèn)識(shí)。

1 材料

1.1 藥材與試劑

生姜，購(gòu)于鄭州，產(chǎn)地山東濰坊。經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院陳隨清教授鑒定為姜科zingiberaceae姜屬植物Zingiber off i cinale Rosc的根莖。干姜、炮姜均由實(shí)驗(yàn)室按《中國(guó)藥典》2010版自制。

食醋：江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20100126，總酸度4g100mL-1。胃泌素試劑盒：解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所，批號(hào)：20101120。胃動(dòng)素試劑盒：解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所，批號(hào)：20101120。6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品：河南中醫(yī)藥研究院惠贈(zèng)。甲醇、乙腈（色譜純），迪馬科技有限公司。

1.2 儀器

Waters2695高效液相色譜儀，美國(guó)Waters公司；Waters2996二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)Waters公司；Empower色譜工作站，美國(guó)Waters公司；3-18K高速冷凍離心機(jī)，Sigma公司；AE240電子分析天平，瑞士梅特勒儀器有限公司；榨汁機(jī)，佛山市順德區(qū)嘉豪實(shí)業(yè)有限公司。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)wistar大鼠，體重280±10g，雄性，購(gòu)自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)：豫2010-0001。

2 方法

2.1 藥物配制

將鮮姜切碎后以家用榨汁機(jī)榨取鮮姜汁，每500g生姜可榨取200mL左右姜汁。相當(dāng)于原藥材2.5 gmL-1，備用。

取生姜、干姜、炮姜適量，分別以10倍量和8倍量水回流提取30min，合并水煎液濃縮至適當(dāng)?shù)臐舛取?/p>

2.2 分組與給藥

將160只大鼠隨機(jī)分為10組，每組16只。即正常組，模型組，生姜汁高劑量組，生姜汁低劑量組、生姜水煎液高劑量組、生姜水煎液低劑量組、干姜水煎液高劑量組、干姜水煎液低劑量組、炮姜水煎液高劑量組和炮姜水煎液低劑量組。不限食水適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，室溫保持在20℃左右，喂飼為標(biāo)準(zhǔn)全價(jià)飼料。然后禁食過(guò)夜，稱重，標(biāo)記。每天上午造模，模型組、給藥組灌胃4℃食醋10mLkg-1。連續(xù)造模10天[6]；正常組灌胃生理鹽水10mLkg-1。第6天下午給藥組大鼠按劑量開始灌胃給藥，給藥體積均為10mLkg-1。連續(xù)給藥5天。實(shí)驗(yàn)期間，觀察動(dòng)物外觀行為狀態(tài)、體重、進(jìn)食量等。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

末次給藥60min后，各組大鼠隨機(jī)取8只，摘眼球取血，每只大鼠取血4mL左右，置離心管中，3500r.min-1離心10min，分離血清，一部分制備供HPLC分析的樣品，另一部分按試劑盒方法測(cè)量胃泌素和胃動(dòng)素。剩余大鼠禁食不禁水24小時(shí)，灌胃炭末30min后處死，稱胃全重與凈重計(jì)算胃中物質(zhì)殘留率；測(cè)小腸全長(zhǎng)與炭末前端所到達(dá)的距離計(jì)算小腸推進(jìn)率[7]。

2.4 含藥血清HPLC分析

色譜條件：Dikma Platisil ODS C18色譜柱(5μm,250×4.6mm )，檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；流速：0.8mL.min-1；流動(dòng)相：A為水，B為乙腈；洗脫梯度為：10%B (0min)→20%B (10min) → 50%B (20min)→70%B (40min) →85%B (55min) →100%B (60min)。

血清分析：同組每只動(dòng)物取相同體積的血清混合均勻，精密量取2mL，精密加入甲醇8mL，蝸旋3min，4000r.min-1，離心10min，取上清液7mL，回收甲醇，定容至1mL。轉(zhuǎn)移置2mL離心管內(nèi)，15000r.min-1，離心10min，取上清液按上述色譜條件進(jìn)行血清樣品測(cè)定，記錄色譜圖。

2.5 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)中所有數(shù)據(jù)使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，多組間比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)脾胃虛寒大鼠體重和進(jìn)食量的影響

與正常對(duì)照組比較，造模動(dòng)物體重、進(jìn)食量明顯下降。給藥組在第5天后體重增長(zhǎng)有所改善，進(jìn)食量也有所增加。而模型組的體重和進(jìn)食量一直呈下降狀態(tài)。見(jiàn)圖1、圖2。

3.2 對(duì)脾胃虛寒大鼠腸蠕動(dòng)、胃泌素、胃動(dòng)素的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組動(dòng)物小腸推進(jìn)率、胃泌素和胃動(dòng)素含量顯著下降（P<0.05）；胃排空率明顯增加（P<0.05）。表明脾胃虛寒模型造模成功。干姜高劑量組較模型組小腸推進(jìn)率、胃泌素和胃動(dòng)素含量顯著增加（P<0.05）；胃排空率明顯減少（P<0.05）。干姜低劑量組較模型組胃排空率減少和胃泌素含量顯著增加（P<0.05），表明干姜具有顯著的溫中散寒的作用。炮姜高劑量組較模型組胃泌素含量顯著增加（P<0.05），炮姜低劑量組較模型組胃動(dòng)素含量顯著增加（P<0.05），對(duì)推進(jìn)率和排空率無(wú)顯著改善，說(shuō)明炮姜有一定的溫中散寒作用。而生姜汁和生姜水煎液組較模型組無(wú)顯著改善。見(jiàn)表1。

表1 對(duì)脾胃虛寒大鼠腸蠕動(dòng)、胃泌素、胃動(dòng)素的影響（xˉ±S）（n=8）

3.3 含藥血清HPLC研究

按“2.4”色譜條件，將實(shí)驗(yàn)各組動(dòng)物血清上樣，得到以下HPLC色譜峰（見(jiàn)圖3～7）。通過(guò)與正常血清、模型血清、6-姜酚標(biāo)準(zhǔn)品以及藥材HPLC色譜比較，在溫中實(shí)驗(yàn)中干姜水煎液高劑量組和炮姜水煎液高劑量組的含藥血清中發(fā)現(xiàn)了姜的移行成分。通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖對(duì)比，溫中實(shí)驗(yàn)的大鼠含藥血清中姜的移行成分均為6-姜酚。見(jiàn)圖6，圖7。

4 討論

4.1 姜，雖然有生姜、干姜、炮姜等不同炮制品，但三者均有溫中之功。研究姜溫中功效的物質(zhì)基礎(chǔ)，應(yīng)該在脾胃虛寒模型上，結(jié)合藥效進(jìn)行。因此，試驗(yàn)選擇比較公認(rèn)的脾胃虛寒動(dòng)物模型。試驗(yàn)中，該模型動(dòng)物均出現(xiàn)體重減輕，食量減少，且畏寒，蜷縮，豎毛，精神萎靡。并出現(xiàn)明顯的活動(dòng)減少，表現(xiàn)為倦臥少動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，唇色蒼白，捉拿時(shí)反抗無(wú)力，漸見(jiàn)體型瘦弱，可見(jiàn)便溏等明顯的脾胃虛寒的癥狀和體征。模型組小腸推進(jìn)率降低，胃殘留率增多，胃泌素含量下降，與正常對(duì)照組比較有顯著差異。上述表明，脾胃虛寒大鼠造模成功。

4.2 試驗(yàn)觀察到，干姜高劑量組較模型組小腸推進(jìn)率、胃動(dòng)素和胃泌素含量明顯增加，胃排空率明顯降低，干姜低劑量組較模型組除小腸推進(jìn)率無(wú)明顯改善外，其余指標(biāo)與干姜大劑量組結(jié)果相當(dāng)，表明干姜具有顯著的溫中作用。炮姜高、低劑量組只是分別在胃動(dòng)素和胃泌素含量上較模型組有明顯改善，而生姜汁、生姜水煎液在上述四項(xiàng)指標(biāo)上較模型組僅有改善的趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)表明，在生姜汁、生姜、干姜、炮姜4個(gè)品種中，以干姜的溫中作用最佳，這與傳統(tǒng)干姜為溫中要藥的認(rèn)識(shí)吻合。

4.3 通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清HPLC分析，在給予干姜、炮姜的模型動(dòng)物血清中，觀察干姜、炮姜的血中移形成分，經(jīng)比較分析確認(rèn)為6-姜酚。結(jié)合藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為，6-姜酚為干姜、炮姜溫中功效物質(zhì)的代表性化學(xué)成分。

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