紫花地丁花提取物的分離鑒定

王亞薇，沈喜海，張志偉，張丹丹，李 洋

(河北科技師范學院理化學院，河北秦皇島，066600)

紫花地丁(Viola yedoensis Makino)為堇菜科(Violaceae)植物，又名野堇菜、遼堇菜、光瓣堇菜，分布于我國東北、華北、華東、中南等地［1］。為多年生蓮座狀草本，高7～14 cm，花有卡柄，萼片卵狀披針形，花瓣紫堇色，具細管狀，直或稍上彎;花期4～5月，紫色小花，全草可入藥，其性寒，味苦、辛，有清熱解毒、涼血消腫之功效，臨床上常用于治療痢疾、乳房炎、黃疸、目赤腫痛，以及外敷治跌打損傷、毒蛇咬傷等［2，3］。據報道［4］，紫花地丁含有有機酸、黃酮及其甙類、酚類成分、糖類、氨基酸、多糖及蛋白質、皂甙等10 多種有效成分［5］，并可富集 Cu，Fe，Mn，Zn，Mg 等微量元素［6］。白殿罡［7］、陳玉花［8］等采用氣相色譜及質譜聯用技術對紫花地丁全草成分進行了研究，并確定了其主要成分。紫花地丁作為一種中藥材，研究植株各部分的成分更有助于對其藥用價值的利用。而有關紫花地丁花成分的研究很少。筆者用乙醚對其花中成分進行提取，經過柱色譜和薄層色譜分離后，采用紫外分析儀對分離物進行了初步的測定。對紫花地丁花成分的研究具有十分重要的意義。

1 材料和方法

1．1 實驗材料

紫花地丁花2010年4月采于河北科技師范學院院內。將其置于干燥箱中，40℃烘干，用研缽充分研細，保存備用。

1．2 儀器與試劑

1．2．1 儀器 DGF－1A型立式電熱鼓風干燥箱，電子天平，KQ－100DB型數控超聲波清洗器，SHZ－D(III)循環水式真空泵，TGL－16B(高速)離心機，UV－2401PC紫外分析儀。

1．2．2 試劑 層析用硅膠(0．075～0．150 mm，0．053 ～0．075 mm)，薄層色譜用硅膠，乙醚，無水乙醇，甲醇，正丁醇，丙酮，二氯甲烷，三氯甲烷，石油醚，乙酸乙酯等為分析純。

1．3 提取與分離

1．3．1 提取方法 稱取5．0 g備用粉末放入250 mL的三角瓶中，加入100 mL乙醚，超聲波提取0．5 h。過濾，收集濾液，殘渣繼續提取2次，合并3次提取的濾液，在34～35℃蒸發濃縮至4 mL左右。置于表面皿中，在空氣中使乙醚自然揮發，得到青黑色膏狀物質。

1．3．2 分離方法 在薄層板上點樣，分別用乙醚、乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇作展開劑展開。其中乙醚和乙酸乙酯中展開速度較快且效果較好，但兩者展開點顏色不同。故選用乙醚和乙酸乙酯分別作展開劑，點樣多次，分離展開，將顏色、位置相同的樣點刮下合并，分別用展開劑溶解，高速離心取上清液放于小瓶中待測。

稱取100．0 g層析用硅膠(0．075～0．150 mm)在110℃下活化4 h，加入適量的石油醚，浸泡一段時間，濕法裝柱。柱高40 cm左右。濃縮所得膏狀物在少量石油醚浸泡的硅膠中拌勻，注入層析柱中洗脫分離。操作如圖1所示。另稱取100．0 g層析用硅膠(0．053～0．075 mm)在110℃下活化2 h，加入適量的石油醚，浸泡一段時間，濕法裝柱，然后梯度洗脫(溶劑極性B＞A，B溶劑梯度洗脫，即A，B兩溶劑混合體積比為 A∶B=10∶0→9∶1→8∶2→7∶3→6∶4→5∶5→4∶6→3∶7→2∶8→1∶9→0∶10)，操作如圖2 所示。

圖1 紫花地丁花粉末提取物提取分離示意圖一

圖2 紫花地丁花粉末提取物提取分離示意圖二

1．4 分離液鑒定

1．4．1 薄層色譜分離液紫外光譜測定 將薄層色譜法所得上清液，調整濃度，測定紫外圖譜。分別用展開劑作參比溶液，消除溶劑的影響。

1．4．2 第1次柱色譜分離液紫外光譜測定 第1次柱色譜分離液，放于干燥的小瓶中，在空氣中使乙醚自然揮發，然后用乙醚溶解測定紫外圖譜。乙醚作參比液，消除溶劑干擾。

1．4．3 第2次柱色譜分離液紫外光譜測定 第2次柱色譜分離液，直接測定紫外圖譜，用對應的梯度洗脫液作參比溶液，消除溶劑干擾。

2 測定結果與分析

根據圖譜中吸收峰的位置和峰形，分析確定了部分應用價值較廣泛的分離物的名稱(表1)。

表1 部分分離產物

3 結 論

采用超聲波提取方法及柱色譜和薄層色譜分離技術對紫花地丁花的成分進行了初步測定，確定了其中的部分分離產物，主要為黃酮類，香豆精類，飽和脂肪酸類等物質。已確定物質為7－羥基－5－甲氧基黃酮，山萘黃素－3－二葡萄糖苷，山萘黃素－7－鼠李糖－3－二葡萄糖苷，7－羥基－5－甲氧基黃酮，槲皮素－3－氧－二葡萄糖苷，4′－羥基－7，3′－二甲氧基二氫黃酮，7－羥基－4′－甲氧基－二氫黃酮，7，8－二甲氧基香豆精，8－異戊烯－7－氧－異戊烯基香豆精。為紫花地丁花的開發利用提供理論依據。

［1］楊鵬鵬，閆福林，梁一兵，等．紫花地丁化學成分的研究［J］．新鄉醫學院學報，2008，25(2):185－187．

［2］李定剛，張武崗，宋毓民，等．紫花地丁抗菌活性成分研究［J］．西北農林科技大學學報:自然科學版，2006，34(4):87－90．

［3］李海濤，楊琳，章廣玲，等．紫花地丁煎劑調節小鼠巨噬細胞功能的體內實驗研究［J］．華北煤炭醫學院學報，2004，6(5):553－554．

［4］劉嘉，徐潤生，程存歸．兩產地紫花地丁揮發油的化學成分研究［J］．中成藥，2009，31(10):1 575－1 577．

［5］李金艷，偉忠民．中藥紫花地丁的研究進展［J］．中國現代中藥，2008，10(1):27－29．

［6］梁雪芹，李志宏，李秀珍，等．紫花地丁中微量元素淺析［J］．黑龍江醫藥，1995，8(3):166－167．

［7］白殿罡．紫花地丁揮發性化學成分的分析［J］．長春大學學報，2008，18(5):69－71．

［8］陳玉花，肖德華．紫花地丁揮發油化學成分分析［J］．內蒙古民族大學學報:自然科學版，2008，23(1):22－23．