玫瑰花茶對束縛應激小鼠曠場活動性的影響

陳 文，任 超，劉 嬌，王 祎，郭月逸

(北京聯合大學應用文理學院，北京市生物活性物質與功能食品重點實驗室，北京100191)

玫瑰花茶對束縛應激小鼠曠場活動性的影響

陳 文，任 超，劉 嬌，王 祎，郭月逸

(北京聯合大學應用文理學院，北京市生物活性物質與功能食品重點實驗室，北京100191)

旨在探討玫瑰花茶對束縛應激小鼠自主探究活動能力的影響。將8周齡雄性BALB/C小鼠分為4組:正常對照組(C組)、應激對照組(S組)、低劑量玫瑰花茶組(L-RE組)、高劑量玫瑰花茶組(H-RE組)。S、L-RE、H-RE組小鼠每日給與1h的束縛刺激，30min后分別灌喂水和相應劑量的玫瑰花茶。連續6周后用Smart小動物行為活動記錄分析系統進行曠場實驗。結果顯示，S組小鼠在曠場周邊區域、中央區域的活動性分別比C組小鼠減弱了10.8% (P＜0.05)和15.7%，快速移動時間百分率顯著降低(P＜0.05)。與S組相比較，L-RE組小鼠在曠場周邊區域、中央區域的探究活動性明顯提升(P＜0.05)，不動時間百分率下降(P＜0.05);H-RE組小鼠在周邊區的探究活動性提高(P＜0.05)，不動時間百分率下降(P＜0.05)。以上結果顯示玫瑰花茶能夠縮短束縛應激小鼠的不動時間，提高小鼠在曠場中央和周邊區域的自主探究活動能力，起到緩解應激小鼠焦慮狀態的作用。

玫瑰花，曠場，束縛應激，小鼠

1 材料與方法

1.1 材料與設備

玫瑰花 購自平安百合大藥房;小鼠60只SPF級，購于軍事醫學科學院實驗動物中心。

小鼠曠場箱 西班牙Smart小動物行為活動記錄分析系統。

1.2 實驗方法

1.2.1 玫瑰花茶的制備 稱取玫瑰花4.5、9g，分別浸于100mL沸水中，超聲提取30min，過濾，濾液分別作為高劑量玫瑰花茶和低劑量玫瑰花茶。

1.2.2 實驗動物及分組 8周齡雄性BALB/C小鼠60只，在光-暗周期為12h、溫度20～22℃的環境下適應飼養一周后，按體重隨機分成四組:正常對照組(C組)、應激對照組(S組)、低劑量玫瑰花茶組(L-RE組)、高劑量玫瑰花茶組(H-RE組)，每組15只。各組小鼠均自由攝食飲水，S組、L-RE組、H-RE組小鼠每日置于帶有透氣孔的束縛管中，給與1h的束縛刺激，30min后分別灌喂0.4mL水、低劑量玫瑰花茶、高劑量玫瑰花茶。連續喂飼6周，于第6周結束時進行曠場實驗。

1.2.3 曠場實驗 曠場箱是一個單邊長為27.5cm、總邊長為110cm的正方形，在圖形上將該正方形區分為周邊、中央兩個區域。中央區為套在大正方形中的一個單邊長為13.75cm、總邊長為55cm的小正方形，此小正方形到大正方形各邊的距離相等。小正方形與大正方形之間的區域即為周邊區。在曠場箱正上方安裝好攝像機，調整好影像畫面。

將小鼠置于曠場箱的中央，開始計時，用西班牙Smart小動物行為活動記錄分析系統記錄并分析小鼠在曠場箱內5min的自主探究情況，包括小鼠分別在周邊區、中央區內的自主活動性、小鼠的不動時間、慢速移動時間、以及快速移動時間等。每實驗完1只小鼠用75%酒精擦洗曠場箱并揮干，再進行下一只小鼠的實驗。

2 結果與分析

2.1 玫瑰花茶對小鼠體重的影響

實驗開始時(分組時)各組小鼠間體重無明顯差異，經過6周的實驗后，與C組相比較，S組的體重有所降低，顯示束縛刺激使得小鼠產生焦慮情緒，影響了小鼠隨齡的體重增長;與S組相比較，L-RE組和H-RE組小鼠體重也都明顯減輕，表明玫瑰花茶有一定減重效果。

表1 實驗前后各組小鼠體重(g)的變化(X±SD)

2.2 玫瑰花茶對小鼠曠場自主活動性的影響

Smart小動物行為活動記錄分析系統通過小鼠在曠場箱中的移動運行時間、速度、以及軌跡等不同參數來綜合給出小鼠在不同區域的自主探究活性數據。

由表2可見，與C組相比較，S組小鼠在周邊區域的活動性數值明顯降低(P＜0.05)，在中央區域的活動性也降低了15.7%，顯示束縛刺激使小鼠的自主活動能力下降、焦慮水平提升;與S組相比較，L-RE組和H-RE組小鼠在周邊區域的探究活動性都顯著提高(P＜0.05)，L-RE組小鼠在中央區域的探究活動性比S組小鼠提高了34%(P＜0.05)，表明玫瑰花茶能夠提升束縛應激小鼠的自主探究活動性、緩解焦慮狀態。

表2 玫瑰花茶對小鼠曠場自主活動性的影響(X±SD)

2.3 玫瑰花茶對小鼠曠場自主活動時間與移動速度的影響

小鼠在曠場箱中的移動分為三種情況，小鼠不動或移動速率小于2.04cm/s時計為不動，移動速率介于2.04～8.16cm/s時計為慢速移動，移動速率大于8.16cm/s時計為快速移動。

實驗結果顯示，連續喂飼6周后，與C組相比較，S組小鼠的不動時間百分率上升、慢速移動時間百分率減少、快速移動時間百分率則顯著降低(P＜0.05)，提示每日的束縛刺激使小鼠的快速移動能力明顯減弱;與S組相比較，L-RE組和H-RE組小鼠的不動時間百分率都顯著降低(P＜0.05)，分別下降了20.5%和22.3%，而慢速移動和快速移動時間百分率則均有所上升，顯示玫瑰花茶能夠明顯縮短束縛應激小鼠在曠場中的不動時間，在一定程度上提高小鼠的活動能力。

表3 玫瑰花茶對小鼠曠場自主活動時間與移動速度的影響(X±SD)

3 討論與結論

應激是指機體在受到各種內外環境因素刺激時出現的非特異性全身反應，有研究表明，適度的應激對機體而言具有積極意義［6］;但長期或嚴重的應激則易對機體造成傷害，對多種疾病如心腦血管疾病、惡性腫瘤和糖尿病的發生、發展都有重要影響［1］。應激又與焦慮和抑郁密切相關，被認為是導致焦慮和抑郁的誘因。在焦慮和抑郁生物學機制的研究方面，通常利用動物對應激性或新異性事件的行為或生理反應來測定動物的焦慮狀態，曠場實驗就是經典的方法之一［7］，主要檢測動物的非條件性反射，利用動物對新異環境的恐懼心理和探究特性形成的矛盾沖突來考察動物的焦慮狀態［8］。當小鼠進入曠場箱中，對新環境的恐懼使其主要在周邊區域活動，而喜歡探究的天性又使其產生在中央區域活動和探究的動機，造成了探究-回避的沖突行為，從而誘導焦慮產生。在中央區域活動、中央-周邊穿梭等自發活動行為能有效反應小鼠對新環境的探索欲望水平和環境適應能力，探索欲越強代表環境適應能力越強，焦慮水平越低［9］。1999年，王天芳［10］等人報道慢性束縛應激使大鼠的不動時間延長、自主活動次數減少、穿格次數減少，表現出抑郁傾向。隨后，又有多項動物實驗也顯示［11-12］，慢性應激可致大鼠曠場行為異常，如潛伏期延長、行為活動減少等。

本實驗結果顯示，束縛應激組小鼠在曠場周邊和中央區域的活動性、慢速與快速移動時間百分率等均比正常對照組小鼠有所下降，而不動時間百分率上升。說明每日的束縛刺激抑制了小鼠的自主活動能力，提升了焦慮水平。

玫瑰花作為藥食兩用的植物，其主要的功效報道集中在抗氧化、抗菌、抗病毒、以及對心血管的保護等方面。作為日常飲品，玫瑰花茶雖然常常被宣傳具有“減壓”功效，卻鮮有相關的文獻報道。本實驗中，在連續給予束縛應激小鼠6周的玫瑰花茶后，與應激對照組相比較，兩個玫瑰花茶組小鼠在曠場周邊區域的探究活動性都明顯提高、在中央區域的探究活動性也都有所增強，特別是低劑量玫瑰花茶組小鼠在曠場中央區域的探究活動性比應激對照組顯著提高了34%，兩個玫瑰花茶組小鼠的不動時間百分率都明顯下降了20%以上。結果顯示，玫瑰花起到了緩解應激小鼠焦慮狀態的作用，低劑量優于高劑量。長期過度的應激往往會導致機體的氧化損傷，而玫瑰花茶組小鼠應激狀態的緩解很可能與其抗氧化活性相關。曾佑煒等人曾報道［13］玫瑰花水提液具有良好的清除二苯代苦味酰自由基的作用。

本實驗中另一個值得探討的問題是，束縛刺激抑制了小鼠體重的增長;而與應激對照組相比較，兩個玫瑰花茶組小鼠的體重也都減輕，這與我們此前關于玫瑰花茶功效作用的實驗結果相吻合，玫瑰花茶組均多次出現減重效果。關于玫瑰花茶減重減壓功效及其作用機制有待于深入探討。

本文通過曠場實驗，初步證實了玫瑰花茶能夠縮短束縛應激小鼠的不動時間，提高了其在曠場中央和周邊區域的自主探究活動能力，具有一定的緩解應激小鼠焦慮狀態的作用，為玫瑰花茶的功效研發提供一些參考依據。

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［13］曾佑煒，趙金鏈，彭永宏.玫瑰花抗氧化活性研究［J］.中國農學通報，2008，24(3):205-209.

Effect of the rose extract on stressed mice in open-field test

CHEN Wen，REN Chao，LIU Jiao，WANG Yi，GUO Yue-yi
(College of Arts＆Science of Beijing Union University，Beijing Key Laboratory of Bioactive Substances and Functional Foods，Beijing 100191，China)

In order to study the effect of rose extract on the open-field test of stressed mice，8-weeks-old male BALB/C mice were divided into 4 groups:control group(C)，stressed group(S)，low-dose rose extract group(LRE)，and high-dose rose extract group(H-RE)based on their body weights.The mice of S，L-RE and H-RE group were suffered restraint stress 1h a day.6 weeks later，open-field test was determined.Results showed that compared with C group，fast-moving time(%)and the locomotive activity of S group in periphery and central area were markedly decreased(P＜0.05).Compared with S group，L-RE group had higher locomotive activity in periphery and central area and had less immobility time(%)(P＜0.05)，and H-RE group had higher locomotive activity in periphery area and less immobility time(%)(P＜0.05).The above results suggested rose extract was reducing the immobility time and improving the locomotive activity of stressed mice and showed some anxiolytic effect.

rose;the open-field test;restraint stress;mice

TS201.4

A

1002-0306(2011)09-0396-03

當前，在我國社會經濟發展、轉型的階段，越來越多的心理應激問題引起了社會各界的重視，人們已經逐漸認識到應激會影響健康和增加疾病的易感性。已有大量的研究表明，長期或嚴重的應激對多種疾病，如心腦血管疾病、惡性腫瘤和糖尿病的發生、發展都有重要影響［1］。玫瑰花為薔薇科植物玫瑰(Rosa rugosa Thunb)的干燥花蕾［2］，含有多種生物活性成分，主要包括揮發油、鞣質、氨基酸、黃酮類、色素類、多酚類等［3-5］，其在中醫藥學中的應用歷史悠久，具有理氣解郁、活血散淤的作用。玫瑰花的現代藥理學研究大多集中在抗氧化、抗菌、抗病毒、以及對心血管的保護方面。關于玫瑰花茶的“減壓”功效雖常被宣傳，但卻鮮有相關的科技文獻報道。本研究旨在觀察玫瑰花茶對束縛應激小鼠曠場自主活動性的影響，以初步探討玫瑰花茶之“減壓”的功效。

2010-03-21

陳文(1966-)，女，博士，副教授，研究方向:營養與功能食品。

北京聯合大學自然科學類項目(2009)。