GC-MS法測定虎杖膏中龍腦與異龍腦的含量Δ

易學東，婁方明，蔡義云（1.遵義醫學院附屬醫院，遵義市563000；.遵義醫學院，遵義市563000）

虎杖膏是我院自制的中藥外用制劑，由虎杖、冰片、麻油等制成，具有清熱解毒、消腫定痛之功效，用于治療紅腫而未潰爛的瘡、癰、疔、癤及無名腫毒等癥，在院內使用20余年，療效明顯，安全可靠[1，2]。方中冰片具有抗菌、抗炎、止痛的功效[3]，是虎杖膏的主要成分之一。為控制該制劑質量，筆者參考有關文獻[4]，采用氣相色譜-質譜（GC-MS）聯用法測定虎杖膏中龍腦與異龍腦的含量（冰片含量以龍腦和異龍腦含量之和計），取得了滿意效果。

1 儀器與試藥

6890-5973N型GC-MS聯用儀（美國Agilent公司）；BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；SG3300H型超聲波清洗機（上海冠特超聲儀器有限公司）。

龍腦（批號：110881-200706）、異龍腦（批號：111512-200201）對照品均購自中國藥品生物制品檢定所；虎杖膏（批號：20100608、20100726、20100805）及陰性樣品均由本院制劑室提供；甲醇和乙酸乙酯均為分析純（成都市科龍化工試劑廠）。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取龍腦對照品15.01 mg，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀釋至刻度，為龍腦對照品溶液；再精密稱取異龍腦對照品6.08 mg，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀釋至刻度，為異龍腦對照品溶液；精密量取上述2種對照品溶液各2 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，作為混合對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液 取虎杖膏約1 g，精密稱定，置250 mL具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯30 mL，稱定重量，超聲（功率：180 W，工作頻率：40 kHz）處理30 min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻后靜置。吸取上清液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，精密吸取1 mL，置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容，進樣。

2.1.3 陰性對照溶液 取缺冰片的陰性樣品約1 g，精密稱定，照“2.1.2”項下方法制備陰性對照溶液，即得。

2.2試驗條件與系統適用性試驗

2.2.1 GC條件 色譜柱：Agilent HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升溫：初始溫度為50 ℃，以3 ℃·min-1升至110℃，再以10℃·min-1升至230℃；汽化室溫度：260℃；載氣：高純He，流速：1 mL·min-1；進樣量：2 μL；分流比：20∶1。

2.2.2 MS條件 離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；電離方式：EI；電子能量：70 eV；溶劑延遲：5 min；質量掃描范圍：30～500 amu。

2.2.3 系統適用性試驗 分別精密吸取混合對照品溶液、陰性對照溶液與供試品溶液各2 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖。結果，異龍腦、龍腦的分離度均為2.5，其理論板數按異龍腦和龍腦峰計算分別為153 820和116 663。異龍腦對照品和龍腦對照品分離完全，陰性對照無干擾，供試品圖譜中在相同時間處出現與對照品同樣的峰，且基線較平、雜質峰較少，并分離完全。GC-MS圖見圖1。

圖1 氣相色譜-質譜圖A.混合對照品；B.陰性對照；C.供試品；1.異龍腦；2.龍腦Fig 1GC-MSA.mixed control；B.negative control；C.test sample；1.Isoborneol；2.borneol

2.3 線性關系考察

分別精密吸取混合對照品溶液0.2、0.5、1、1.5、2、2.5 mL，置10 mL容量瓶中，以乙酸乙酯定容，按上述色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以峰面積積分值（Y）對進樣量（X，μg）進行線性回歸，得異龍腦的回歸方程為Y＝1.14E+09X+3.54E+06（r＝0.999 7，n＝6），線性范圍為0.005～0.061 μg；龍腦的回歸方程為Y＝1.18E+09X+1.01E+07（r＝0.999 7，n＝6），線性范圍為0.012～0.150 μg。

2.4 精密度試驗

精密吸取同一混合對照品溶液適量，在上述色譜條件下重復進樣6次，測定峰面積積分值。結果，異龍腦的RSD＝0.81%（n＝6），龍腦的RSD＝1.18%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗

取同一批號樣品適量，按“2.1.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定。結果，異龍腦含量的RSD＝1.60%（n＝6），龍腦含量的RSD＝1.39%（n＝6），表明該方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗

取制備好的同一供試品溶液適量，按上述色譜條件于0、2、4、6、8、10 h測定峰面積。結果，異龍腦的RSD＝0.83%（n＝6），龍腦的RSD＝1.21%（n＝6），表明供試品溶液在10 h內穩定。

2.7 加樣回收率試驗

取同一批號已知含量的虎杖膏樣品，精密稱取約0.5 g，共6份，分別精密加入異龍腦和龍腦對照品溶液適量，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算加樣回收率，結果見表1。

2.8 樣品含量測定

取3批虎杖膏適量，分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定，以峰面積計算樣品中異龍腦和龍腦的含量，結果見表2。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1Results of recovery tests（n＝6）

表2 樣品含量測定結果（mg·g-1，n＝3）Tab 2Results of content determination of samples（mg·g-1，n＝3）

3 討論

虎杖膏中冰片的含量按處方的投料量計為23.0 mg·g-1，本次樣品含量測定結果均在處方投料量的90%以上。考慮到原料冰片中含一定雜質、批量生產過程中有損耗等因素，建議檢測虎杖膏中冰片的含量應不低于投料量的85%，即不低于19.55 mg·g-1。

冰片是易揮發性物質，在生產、運輸、儲存中方法不當均易造成其含量下降，從而影響藥品的處方比例組成，進而影響藥品的療效，因此測定冰片的含量對控制藥品質量有重要意義。

綜上，本方法穩定、簡便、靈敏、快速，可用于虎杖膏中龍腦與異龍腦的含量測定。

[1]黃 怡，王 為，匡菊香，等.虎杖膏的制備及臨床療效觀察[J].貴陽醫學院學報，2005，30（2）：178.

[2]羅世惜，潘紅平，陳 羽，等.虎杖膏治療化療藥物引起的靜脈炎45例[J].陜西中醫，2006，27（2）：211.

[3]吳壽榮，程 剛，馮 巖.冰片藥理作用的研究進展[J].中草藥，2001，32（12）：1 143.

[4]張開蓮，葉 云，王 俊，等.毛細管氣相色譜法測定雪抑樂中龍腦的含量[J].中國藥房，2007，18（30）：2 355.