呂青志，劉德勝，李珂珂，陳向明，杜雨蒙（濱州醫學院藥學院，煙臺市 264003）

醋酸潑尼松龍醇質體的制備及其藥劑學性質考察

呂青志＊，劉德勝，李珂珂，陳向明，杜雨蒙（濱州醫學院藥學院，煙臺市 264003）

目的：制備醋酸潑尼松龍醇質體并考察其藥劑學性質。方法：采用乙醇注入法制備醇質體。以包封率為指標，以處方中藥物與大豆磷脂質量比（A）、膽固醇與大豆磷脂質量比（B）、無水乙醇占處方總量的百分比（C）為考察因素進行正交設計優化處方；考察優化后處方所制醇質體的形態、粒徑、Zeta電位、包封率、穩定性等，差示量熱分析法考察其熱力學特性。結果：最佳處方為A 1∶20，B 1∶6、C 30%；以此處方制備的醇質體外形圓整光滑，平均粒徑為（278.5±46.7）nm，Zeta電位為（－31.6±0.04）mV，平均包封率為（76.79±0.29）%，貯藏30d穩定性較好。差示量熱分析法結果表明，醋酸潑尼松龍以無定形狀態包封于醇質體中。結論：醋酸潑尼松龍醇質體制備工藝簡單，優化處方所制制劑藥劑學性質符合要求。

醋酸潑尼松龍；醇質體；制備；藥劑學性質；包封率；差示量熱分析

在透皮給藥系統中，致密的角質層結構是藥物透過皮膚的最大屏障[1]。為了突破角質層的屏障，有學者通過研究[2，3]發現了一種新型的柔性脂質體——醇質體（Ethosome），其是一種由磷脂、乙醇、水組成的，具有脂質雙分子層結構的新型囊泡給藥載體，能夠增加藥物的透皮速率和皮膚滯留藥物量。醋酸潑尼松龍（Prednisolone acetate，PA）為腎上腺皮質激素類藥物，具有抗炎、抗過敏和抑制免疫等多種藥理作用，臨床主要用于活動性風濕、類風濕性關節炎的治療。目前國內該藥的制劑有注射液、片劑和滴眼液。但長期全身給藥可引起庫欣綜合征及并發感染等不良反應，因此，患者對其順應性較差[4]。筆者將PA制備成醇質體透皮給藥制劑，通過提高其透皮滲透速率和透皮滲透量，維持病變部位較高的藥物濃度，以期減少全身治療引起的不良反應，提高患者的順應性。本次制備的PA醇質體混懸液藥物含量為1mg·mL－1，擬進一步濃縮制備成凝膠劑以滿足臨床用藥需要及提高給藥的便利性。

1 儀器與試藥

Waters 600-2489高效液相色譜（HPLC）儀（美國Waters公司）；EL204高精度電子分析天平、TGA/DSC1同步熱分析儀（瑞士梅特勒-托利多公司）；旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器設備有限公司）；SH23-2恒溫磁力攪拌器（上海梅穎浦儀器儀表制造有限公司）；KQ5200DB型數控超聲波清洗器（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）；TU-1901紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司）；超濾管（美國Millipore公司）；LD4-2A低速離心機（北京醫用離心機廠）；JEM-1400電子透射顯微鏡（日本電子株式會社）；激光粒度分析儀（美國Sarta Barbara公司）。

PA原料藥及對照品（河南利華制藥有限公司，批號：K07A20091003，含量：99.4%）；大豆磷脂（上海太偉藥業有限公司，批號：081012）；膽固醇（上?；瘜W試劑采購供應站分裝廠，批號：20070112）；PA醇質體（自制，規格：1mg·mL－1）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 PA醇質體混懸液的制備

參照文獻[5，6]，采用乙醇注入法制備PA醇質體。稱取PA 10mg、大豆磷脂250mg、膽固醇50mg溶于3.0mL的無水乙醇中，置于磁力攪拌器上，在35℃、700r·min－1的密閉條件下，邊攪拌邊緩慢細流注入6.8mL磷酸鹽緩沖液（pH6.8）中，注完后繼續攪拌30min，經0.45μm微孔濾膜整粒，即得混懸液。

2.2 正交設計法優化處方

參照文獻[7，8]，選取對包封率影響較大的3個因素，即藥物與大豆磷脂質量比（即藥脂比，A）、膽固醇與大豆磷脂質量比（B）、無水乙醇占處方總量（10mL）的百分比（C）作為考察因素，每個因素取3個水平，見表1；以包封率為優化指標，采用L9（34）設計表進行處方篩選，結果見表2，方差分析結果見表3。

表1 因素水平表Tab 1 Factors and levels

表2 正交試驗設計結果Tab 2 Results of orthogonal design

表3 方差分析結果Tab 3 Results of analysis of variance

由表2直觀分析結果表明，影響PA醇質體包封率的各因素的主次關系依次為：C＞B＞A，確定PA醇質體的較優處方為A2B3C1。

方差分析與直觀分析結果基本相符，因此，篩選得PA醇質體的最優處方為：藥脂比為1∶20，膽固醇與大豆磷脂比為1∶6、無水乙醇百分含量為30%。按照最優處方制備PA醇質體3批，進行以下藥劑學性質評價。

2.3 外觀形態

取PA醇質體混懸液加適量蒸餾水稀釋，滴至銅網上，用1%磷鎢酸溶液負染，自然干燥后在透射電鏡下觀察其微觀形態。結果，PA醇質體為近球狀小囊泡，外形圓整光滑，詳見圖1。

2.4 粒徑及Zeta電位

取PA醇質體混懸液以適量蒸餾水稀釋，采用激光粒度分析儀測定醇質體的粒徑及粒徑分布，測得平均粒徑為（278.5±46.7）nm，粒徑分布見圖2。

圖1 PA醇質體的透射電鏡照片（×20000）Fig 1 Transmission electron microphotography of PA-ethosomes（×20000）

圖2 PA醇質體的粒徑分布圖Fig 2 Particle size distribution of PA-ethosomes

測定PA醇質體Zeta電位，結果為（－31.6±0.04）mV。

2.5 包封率的測定

2.5.1 色譜條件。色譜柱：Hypersil ODS-2C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水（55∶45）；檢測波長：243nm；流速：1.0mL·min－1；進樣量：20μL；柱溫：室溫。

2.5.2 標準曲線的建立。制備濃度為100μg·mL－1的PA甲醇貯備液，用流動相稀釋至0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0μg·mL－1的對照品溶液，經0.22μm微孔濾膜濾過，進樣，以PA的峰面積（Y）與濃度（c）作圖，用最小二乘法回歸，得線性方程：Y＝45851c+3037.3（r＝0.9996），表明PA檢測濃度線性范圍為0.5～10.0μg·mL－1。另制備高、中、低濃度的樣品液，測定其日內RSD分別為0.85%、0.57%、0.94%，日間RSD分別為0.63%、1.10%、1.40%；平均回收率為97.3%。

2.5.3 包封率（EE）的測定。采用超濾管法分離游離藥物后，HPLC法測定。取適當稀釋后的PA醇質體混懸液2mL置于超濾管（10kDa）中，4000r·min－1離心1h，測定下層水相中PA濃度，得游離藥物量（Wfree）；取PA醇質體混懸液0.1mL，置于10mL容量瓶中，加入甲醇至刻度，超聲15min破乳，測得總藥量（Wtotal）。按公式（1）計算包封率[9，10]：

測得3批PA醇質體的包封率分別為76.94%、76.43%、77.01%，平均包封率為（76.79±0.29）%。

2.6 穩定性考察[4]

將制備的PA醇質體混懸液灌封于安瓿中，分別于室溫（25℃）、冷藏條件（4℃）放置，于0、10、20、30d取樣，測定放置前、后的游離藥物量，按公式（2）計算滲漏率（TR），結果見表4：

式中，Wfree1為貯存后測得的游離藥物量，Wfree為貯存前測得的游離藥物量，Wtotal為PA醇質體混懸液中的總藥量。

表4 穩定性試驗結果Tab 4 Results of stability experiments

表4結果表明，在冷藏條件下，PA醇質體滲漏率未見顯著變化，穩定性較好。

2.7 差示量熱分析（DSC）

分別取PA原料藥、膽固醇、蔗糖（凍干保護劑）、大豆磷脂、PA醇質體（凍干）及除PA醇質體外的前述4種成分的物理混合物各約10mg，精密稱定，置于鋁盤中，掃描。掃描區間：30～400℃，掃描速率：10℃·min－1。掃描圖譜見圖3。

圖3 DSC圖譜a.PA原料藥；b.膽固醇；c.蔗糖；d.大豆磷脂；e.PA醇質體；f.物理混合物Fig 3 DSC thermogramsa.PA crude drug；b.cholesterol；c.sucrose；d.soybean lecithin；e.PA-ethosome；f.physical mixture

由圖3可見，PA原料藥在248.6℃有吸熱峰，制成物理混合物后，其吸熱峰減弱且峰強度變??；而在PA醇質體中，其吸熱峰完全消失。DSC未檢測到結晶型的PA，表明PA以無定形的狀態而非結晶狀態包封于醇質體中，這可能是由于在制劑過程中大豆磷脂抑制了PA結晶形成所致[11，12]。

3 討論

本試驗采用乙醇注入法制備醇質體，所用設備簡單，易于操作，重現性好，便于推廣使用。制備的脂質體粒徑小而均勻，包封率高，穩定性好。

醇質體包封率的測定方法主要有超濾管法、凝膠過濾法、透析法、超速離心法。采用超濾管法分離游離藥物與醇質體，HPLC法測定藥物含量及包封率，該法操作簡便、快捷可靠。選用滲漏率為指標考察了PA醇質體的穩定性，結果表明，醇質體在室溫下貯存滲漏率較高，穩定性較差，這主要是由于較高的溫度加速了磷脂的氧化水解，使脂質膜流動性增加，易于發生聚集和黏連所致。隨著粒子的聚集，脂質材料沉淀，藥物泄露到分散介質中，因此滲漏率增大，化學穩定性降低。

本試驗醇質體中乙醇含量為30%，高濃度的乙醇可增加藥物在角質層的溶解度，增強角質層的流動性，還能增強醇質體膜的柔性，使其在透皮傳遞過程中發生變形，更易透過紊亂的角質層。研究[3]認為醇質體（乙醇含量為30%～45%）對家兔沒有急性及長期刺激性。醇質體作為一種新的透皮給藥載體，具有高變形性、高包封率，能夠顯著提高藥物的透皮速率和透皮量[13]。但關于PA醇質體的透皮滲透性有待后續的實驗考察。

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Preparation and Pharmaceutical Property of Prednisolone Acetate Ethosomes

OBJECTIVE：To prepare Prednisolone acetate ethosomes，and to evaluate their pharmaceutical property.METHODS：Prednisolone acetate loaded ethosomes were prepared with ethanol injection method.The formulation of ethosomes was optimized by orthogonal experiment with weight ratio of drug to soybean lecithin（A），weight ratio of cholesterol to soybean lecithin（B），ethanol concentration（C）as factors and using encapsulation efficiency as index.The morphology，particle size，Zeta potential，entrapment efficiency and stability of prepared ethosomes were determined.The thermal behaviors were investigated by differential scanning calorimetry（DSC）.RESULTS：The optimal formulation was as follows：A was 1∶20，B was 1∶6，and C was 30%.The obtained ethosomes were spherical，the mean size and Zeta potential were（278.5±46.7）nm and（－31.6±0.04）mV，respectively.The entrapment efficiency of prednisolone acetate in ethosomes was（76.79±0.29）%.The ethosomes were stable within 30days.DSC study showed that the prednisolone acetate encapsulated in ethosomes was in the amorphous form.CONCLUSION：The preparation technology is simple and convenient，and optimal formulation is up to the requirements of pharmaceutical property.

Prednisolone acetate；Ethosome；Preparation；Pharmaceutical property；Entrapment efficiency；Differential scanning calorimetry

R943；R977.1+1

A

1001-0408（2011）33-3123-03

＊助教，碩士。研究方向：藥物新劑型與新技術。電話：0535-6913409。E-mail：tidyno1@126.com

2010-12-15

2011-02-12）