藥品生產企業無菌檢查室現狀及存在問題和改進建議

王聞珠

江蘇省食品藥品監督管理局認證審評中心，南京 210002

無菌檢查是藥品生產企業判斷其無菌制劑或無菌原料藥是否無菌的一種方法，雖然它存在一定的局限性，但仍是無菌產品合格放行或質量監督的一個重要項目。無菌檢查室的管理涉及到無菌檢查操作人員、無菌檢查環境、菌種、培養基、驗證等多個方面的管理，其管理水平也往往反映了該藥品生產企業GMP的實施水平。筆者曾參加了省內多家藥品生產企業無菌檢查室的專題調研，了解到各藥品生產企業無菌檢查室管理水平參差不齊，尚存在一些普遍的或共性的問題。為此，結合《中國藥典》（2010年版）的相關要求，從以下六個方面進行探討，并作簡要的分析，旨在為藥品生產企業進一步規范無菌檢查工作提供參考。

1 現狀及存在問題

1.1 人員培訓

藥品生產企業專門從事無菌檢查工作的相關人員均進行了微生物知識、藥品生產質量管理規范、《中華人民共和國藥典》附錄、無菌檢驗操作規程等的培訓，并建有培訓檔案，但培訓的針對性不強：沒有根據微生物學科的特殊性、結合無菌檢查這一具體的崗位設定培訓內容；培訓和考核方式單一，主要是書面培訓、試卷考核；操作技能考核無記錄；對無菌檢驗人員從事無菌檢查工作的實際情況缺少再次的確認或考核等。

1.2 培養基

藥品生產企業使用的培養基主要為脫水培養基，主要從藥檢所、培養基生產廠家或進口代理商處購買，購買的培養基均附有相應的檢驗合格報告，并儲存在培養基標簽規定的條件下。雖然《中華人民共和國藥典》附錄對培養基的配制、滅菌、儲存、質量控制等均有明確的規定，但不少企業常常忽略一些問題：未規定啟封后的脫水培養基的保存條件及使用有效期；未測定培養基滅菌前后的pH值；采用直火加熱的方法溶解培養基；培養基滅菌過程無記錄；配制分裝好的培養基標識內容不全，如未標明配制批號、配制日期或配制人等，僅憑經驗根據培養基的性狀、顏色及其深淺或分裝的容器等進行判斷；配制好的培養基置于無菌檢查室內保存，但由于無菌檢查室未使用連續運行的空氣凈化系統，難以保證培養基的儲存要求；個別企業尚未開展培養基的靈敏度檢查等。

1.3 菌種

藥品生產企業購買的菌種來源主要有兩個：一是從藥品檢驗所購買斜面的標準菌株（一般為第2-3代）定期轉種傳代；二是從美國菌種保藏中心（ATCC）或中國藥品生物制品檢定所醫學菌種保藏中心（CMCC）標準菌株的凍干粉，制成甘油管或瓊脂斜面管后保存在相應的條件下并定期轉種傳代。企業均建立了菌種的管理規程，對菌種的申購、貯存、傳代及傳代次數、培養、保存和滅活等內容進行了規定，但內容較簡單，可操作性不強。個別藥品生產企業對菌種的管理尚不夠規范，如銅綠假單孢菌斜面在冰箱內保存；自行傳代的菌株標識不全，如缺傳代日期、代數或傳代人等內容；在傳代過程中未進行菌種的形態學觀察；未規定菌懸液保存時間等。此外，大多數藥品生產企業尚不具備對菌種的純度、特性等關鍵指標進行確認的條件。

1.4 實驗室的布局和運行

無菌檢查實驗室均能按照無菌檢查工作的需求配備了培養基及實驗用具準備（包括滅菌）、培養（包括實驗結果觀察）、菌種貯存等功能間或區域，無菌檢查亦按照《中國藥典》（2010年版）的規定在萬級背景下的超凈臺或生物安全柜中進行操作，且無菌檢查室與微生物限度檢查室和陽性對照室三室分開，有的還采用了獨立的空氣凈化系統和單獨分開的人流、物流。但是現場檢查仍發現部分企業尚存在不少缺陷：尚未開展空氣凈化系統的再驗證工作；采用不連續開啟的空氣凈化系統未對自凈時間進行驗證；無菌檢查時只對超凈臺進行了動態檢測，未對無菌檢查操作人員及操作環境進行動態監控。

1.5 設備

無菌檢查工作涉及培養基的滅菌設備、集菌儀、培養箱、超凈臺等主要設備，對這些設備的驗證以及日常檢測、管理也是無菌檢查室的一項重要工作。發現不少企業使用的壓力蒸汽滅菌器雖采用自動控制程序，但無自動記錄設施，不能監控具體的滅菌時間和滅菌溫度；滅菌設備驗證內容不全，性能確認中僅進行了生物指示劑的驗證；培養箱無連續記錄溫度的設施或溫度超標報警裝置；未定期對超級凈化層流臺進行高效過濾器的檢漏等。

1.6 文件

藥品生產企業建立了包括人員、培養基、菌種、設備、實驗室安全、無菌檢驗的操作方法等一系列與無菌檢查工作相關的文件，但從現場抽查的情況看，發現企業對文件的重要性認識不足，具體表現在：培養基配制等標準操作規程描述不詳細，缺乏可操作性；高壓滅菌器等設備的使用記錄內容不全；無菌檢驗記錄簡單，未記錄所使用的設備、菌種、培養基等關鍵信息；配制好的培養基無編號，導致培養基的配制、滅菌、檢驗、使用等整個環節難于追溯；無菌檢驗方法驗證資料中未記錄集菌儀的轉速、缺沖洗液的沖洗方法和用量的確認等[1]；未對培養基的滅菌程序進行驗證。

此外，在現場調研中發現大多數藥品生產企業無偏差記錄；無菌檢查結果未出現陽性或即便出現了陽性結果亦未進行系統的分析和詳細的記錄。

2 建 議

2.1 加強檢驗人員的培訓與考核

一是根據從事無菌操作人員所具備的微生物專業知識、操作技能、實踐經驗等實際情況，結合生產品種的特性，開展有針對性的培訓。新的從事無菌檢查操作人員必須進行大量的無菌檢驗操作練習，并通過規定批次產品的無菌檢查試驗的考核，合格后才能上崗；上崗后亦要定期進行再培訓，以便更新相關知識、回顧以前工作中的偏差和不足[2]。

二是選擇培訓教師時不僅要考慮到培訓的內容，還要注重其資質。培訓教師不僅要有優秀的無菌檢查操作技能，還要有良好的口頭表達和評價能力[2]，以避免考核流于形式。

三是定期對檢驗人員的實際工作情況進行評估，如回顧分析無菌檢驗人員記錄情況、因操作技能不過硬造成假陽性的幾率等。這不僅有助于企業制定培訓計劃，還能讓員工清楚地了解自己的工作情況，同時也是一種考核的方式。

2.2 加強無菌實驗室的管理

一是藥品生產企業應根據《中國藥典》（2010年版）附錄中有關微生物實驗的指導原則和企業長期的實驗室管理實踐，修訂完善所有與無菌檢查工作相關的管理規程、標準操作規程、檢驗方法等，從文件上規范實驗室的管理，并定期監督其執行情況。

二是規范實驗室的各項記錄，對實驗過程中的原始數據、出現偏差情況或日常檢查結果等應及時、詳實的記錄，如無菌檢驗原始記錄應載有使用的設備、菌種、培養基等的關鍵信息；培養基配制的原始記錄應包含或可追溯到所用的脫水培養基的相關信息、實際稱量數、所使用設備、滅菌程序參數、培養基的質量控制（外觀、pH值、無菌性檢查、靈敏度檢查）等相關信息。一旦無菌檢查出現偏差或異常情況，這些基礎性的信息即是開展調查的重要依據。

2.3 規范實驗室偏差或異常結果的處理

從事無菌檢查工作，難免出現偏差或異常情況，如何對這些問題處理是無菌檢查工作的一個難點。以無菌檢查結果出現陽性為例，筆者認為從以下幾個環節入手：首先，應正確看待這一異常情況，不隱瞞、不盲目復檢，規范的記錄是開展工作的前提條件；其次，應立即組織相關人員展開全面、徹底的調查，調查內容涉及本次無菌檢查的儀器、所用培養基等材料、人員的無菌檢驗操作、無菌檢查環境的動態監控、污染菌的鑒定等所有相關因素，分析出現陽性結果的原因，判斷污染菌的來源，必要時延伸到生產環節；最后，根據調查過程中所獲得的有關信息進行偏差分析，決定是否需要重新取樣復試，提出有針對性的糾偏措施，并在調查報告中對產品的無菌性進行評價。此外，整個偏差處理過程應有詳細的記錄，對一些分離到的有價值的菌株應妥善保存。

[1] 李玉芹.淺談目前無菌檢查和微生物限度檢查存在的問題[J].中國藥事,2007,21(12)：1011-2.

[2] 潘友文.現代醫藥工業微生物實驗室質量管理與驗證技術[M].北京：中國協和醫科大學出版社,2004:87.