金葉接骨木中熊果酸和齊墩果酸含量的高效液相色譜測定

　　摘 要：目的：建立高效液相色譜法同時(shí)測定金葉接骨木莖葉中齊墩果酸和熊果酸含量的方法。方法：采用Thermo ODS-2HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（80%：20%）；檢測波長210 nm，流速0.8 mL/min，柱溫25 ℃。結(jié)果：齊墩果酸的線性范圍為12.17～243.36 μg /mL（r=0.999 9），回收率為98.50%（RSD為3.03）；熊果酸的線性范圍為3.25～64.92 μg（r=0.999 8），回收率為99.49%（RSD為1.37）。金葉接骨木莖中齊墩果酸含量（mg/g）為1.485，熊果酸為0.348；葉中齊墩果酸為0.636，熊果酸為0.437。結(jié)論：本法操作簡單，測定結(jié)果準(zhǔn)確，可用于金葉接骨木中齊墩果酸與熊果酸的含量測定。
　　關(guān)鍵詞：金葉接骨木；齊墩果酸；熊果酸；高效液相色譜法
　　中圖分類號：R282.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）06-0076-02
　　
　　金葉接骨木（Sambucus canadensis.‘Aurea’）為忍冬科接骨木屬植物加拿大接骨木（Sambucus Canadensis L.）的彩色葉變種，本區(qū)作為觀賞植物從外地引進(jìn)并在銀川地區(qū)栽培［1］。接骨木屬植物有著廣泛的臨床藥用價(jià)值，其中齊墩果酸、熊果酸是接骨木屬植物抗病毒性肝炎活性成分，臨床用于治療急性病毒性肝炎療效顯著［2］。本人在前期的實(shí)驗(yàn)中檢測出金葉接骨木的莖葉中含有槲皮素、蕓香苷以及熊果酸、齊墩果酸等化學(xué)成分［3］。金葉接骨木如接骨木屬其他植物一樣具有一定藥用價(jià)值，本文對銀川地區(qū)引種的三年生金葉接骨木莖葉中齊墩果酸和熊果酸兩種成分進(jìn)行含量測定，并建立高效液相色譜法測定金葉接骨木中齊墩果酸和熊果酸含量的方法，為進(jìn)一步開發(fā)和利用其植物提供科學(xué)依據(jù)。
　　
　　1 儀器與試藥
　　
　　1.1 儀器 日立L2000高效液相色譜儀（L-2455DAD）檢測器，L-2300柱溫箱，L-2200自動進(jìn)樣器，L-2130四元泵，分析天平（AP210，十萬分之一），超聲波提取器（KQ-500B），中藥材粉碎機(jī)（FW100型）。
　　1.2 試藥 齊墩果酸對照品（批號110742-200314，中國藥品生物制品檢定所）；熊果酸對照品（批號8502，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純，美國天地試劑公司）；乙腈（色譜純，美國天地試劑公司）；娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。
　　
　　2 方法與結(jié)果
　　
　　2.1 色譜條件 色譜柱：美國Thermo ODS-2HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（80%：20%）；檢測波長：210 nm，流速0.8 mL/min，柱溫：25 ℃。
　　2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱量熊果酸對照品5.0 mg，齊墩果酸對照品1.3 mg，共同置5 mL容量瓶中，色譜甲醇溶解，定容，得熊果酸、齊墩果酸混合對照品溶液，臨用前稀釋［4~5］。在2.1項(xiàng)所述色譜條件下，取對照品溶液進(jìn)樣10 μL檢測。得色譜圖1。
　　
　　
　　
　　結(jié)果顯示，齊墩果酸色譜峰保留時(shí)間為28.00 min，熊果酸色譜峰保留時(shí)間在29.59 min，兩者能夠基線分離。
　　2.3 供試品溶液的制備 分別取金葉接骨木的葉和莖藥材，粉碎，過80目篩，60 ℃干燥至恒重。分別精密稱取適量（相當(dāng)于生藥0.5 g），置200 mL具塞三角錐形瓶中，加入甲醇10 mL，超聲提取40 min，冷卻，過濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0 mL容量瓶中得金葉接骨木葉和莖藥材供試品溶液。
　　2.4 線性范圍考察 取稀釋后的齊墩果酸、熊果酸混合對照品溶液（齊墩果酸、熊果酸濃度分別為243.36 μg/mL、64.92 μg/mL），分別稀釋1.5、2、3、4、10、20倍后按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測，以峰面積為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。齊墩果酸回歸方程C=0.000 1A+3.440 5，r=0.999 9，表明齊墩果酸在12.17～243.36 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；熊果酸回歸方程C=4×10-5A+0.979 1，r=0.999 8，表明熊果酸在3.25～64.92 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
　　2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一金葉接骨木葉供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測定，考察其穩(wěn)定性。記錄峰面積，計(jì)算齊墩果酸和熊果酸峰面積的RSD分別為0.63%、0.81%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
　　2.6 精密度試驗(yàn) 取同一金葉接骨木葉供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算齊墩果酸和熊果酸峰面積的RSD，RSD分別為1.05%、0.73%（n=6）。表明儀器精密度良好。
　　2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱定同一批金葉接骨木葉樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法分別制備6份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，分別按回歸方程計(jì)算齊墩果酸和熊果酸的含量。其RSD值分別為0.85%、1.42%（n=6），表明此方法重復(fù)性良好。
　　2.8 加樣回收率 稱取已知含量的金葉接骨木葉樣品6份，每份約0.5 g，準(zhǔn)確計(jì)算樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量，分別加入適量齊墩果酸和熊ul0Pyuw91QsVYt98lEOByQ==果酸對照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣。結(jié)果顯示，齊墩果酸和熊果酸的加樣回收率分別為98.50%（RSD為3.03）和99.49（RSD為1.37），回收率良好。
　　2.9 樣品測定 分別取金葉接骨木葉和莖藥材粉末約0.5 g精密稱定，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別取10 μL進(jìn)樣檢測，記錄金葉接骨木莖和葉的色譜圖和峰面積。如圖2、3所示。
　　
　　
　　
　　測得金葉接骨木莖齊墩果酸與熊果酸含量分別為1.485 mg/g和0.348 mg/g；葉中齊墩果酸和熊果酸的含量分別為0.636 mg/g和0.437 mg/g。
　　
　　3 討論
　　
　　齊墩果酸與熊果酸均屬三萜類化合物，結(jié)構(gòu)相似，其理化性質(zhì)相近，因而在色譜柱上的保留時(shí)間非常相近，如果柱效不高并且流動相選擇不當(dāng)時(shí)，很難將其分開。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測定金葉接骨木莖葉中的這兩種成分時(shí)，采用調(diào)節(jié)流動相的pH值，并加大流動相中水的比例，可以有效的將兩者分開。本法定量準(zhǔn)確，回收率高，并能同時(shí)測出齊墩果酸與熊果酸的含量，簡單易行，可做為同時(shí)含有齊墩果酸與熊果酸植物的測定標(biāo)準(zhǔn)。
　　金葉接骨木在我國多省區(qū)均有栽培，其枝繁葉茂，資源豐富，能否如接骨木屬植物一樣具有藥用價(jià)值，本次實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步開發(fā)和利用其植物提供了一定的科學(xué)依據(jù)。
　　致謝：對本課題給予幫助的韓義欣、張霞等老師表示感謝！
　　
　　參考文獻(xiàn)：
　　［1］曹兵，宋麗華，馬國彬，等.銀川地區(qū)14種綠化樹種的引種試驗(yàn)報(bào)告［J］.農(nóng)業(yè)科學(xué)研究，2007，28（3）：72.
　　［2］陳武，李開泉，熊筱娟，等.陸英抗肝炎活性成分的研究［J］.南昌大學(xué)學(xué)報(bào)（理科版），2001，25（2）165~167.
　　［3］趙淑紅，高亦瓏，徐力生，等.銀川引種金葉接骨木藥用價(jià)值初探［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2010，32（1）：58~59.
　　［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄28~30.
　　［5］鄒盛勤，陳武.地榆中烏索酸和齊墩果酸含量的高效液相色譜測定［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2006，17（8）：1373~1374.
　　（收稿日期：2011-04-18）