復方中藥制劑“芪苓湯”對人工感染雞大腸桿菌病的治療試驗

摘要：為了觀察復方中藥制劑“芪苓湯”對人工感染雞大腸桿菌病的治療效果，以大腸桿菌Ｏ７８株人工感染１２日齡海蘭褐公雛致其發病，于接種后灌服不同劑量的復方中藥制劑。結果表明，分別按每只０．０５、０．１0、０．２0ｍＬ“芪苓湯”的劑量給藥，對人工感染雞大腸桿菌病均有較好的治療作用，各組治愈率分別為７０．００％、８３．３３％、９０．００％，中、高劑量組與氧氟沙星組療效相當。同時可顯著或極顯著（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）提高病雞的增重，但與健康組比較差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。上述結果表明，“芪苓湯”對人工感染雞大腸桿菌病療效顯著，其作用優于或相當于氧氟沙星。

關鍵詞：復方中藥制劑；雞大腸桿菌病；治療

中圖分類號：Ｓ８５３．７３文獻標識碼：B文章編號：１００７－２７３Ｘ（２０11）09-0013-02

雞大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌所引起的傳染病，不僅可單獨發生，而且可與慢性呼吸道疾病、新城疫、傳染性支氣管炎及傳染性法氏囊炎等混合感染。近年來，雞大腸桿菌病的發病率越來越高，再加上其血清型眾多，給防制工作帶來了極大困難，給養雞業造成了巨大的經濟損失。該病迄今尚無有效的疫苗用于防控，臨床常用抗生素和其他化學抗菌藥物進行治療，但因目前病原耐藥性日趨嚴重，藥物殘留危害人體健康而受到強烈關注與質疑，因而，尋求新的防治藥物已成當務之急［１－４］。

經參考各種資料［５］，組成中藥配方，制成了復方中藥制劑并命名為“芪苓湯”，為觀察其治療人工感染雞大腸桿菌病的有效性，本試驗采用大腸桿菌Ｏ７８菌株人工感染１２日齡海蘭褐公雛致其發病，然后在其飲水中加入不同劑量的復方中藥制劑，觀察該藥治療人工感染性雞大腸桿菌病的效果。該研究成果將為臨床上雞大腸桿菌病的防治提供一定的理論依據，為大腸桿菌病的診治提供理論支撐。

１材料與方法

１．１材料

１．１．１復方中藥制劑由黃芪３０ｇ、茯苓２０ｇ、香附２０ｇ組成。將以上中藥烘干后，準確稱取組方配伍中所需劑量，加入蒸餾水（１∶１０，Ｍ／Ｖ）浸泡３０ｍｉｎ煎煮，煮沸后文火煎１ｈ，用4層紗布過濾，藥渣加入沸騰蒸餾水（１∶８，Ｍ／Ｖ），煎煮１ｈ，過濾，合并兩次藥液用旋轉蒸發器濃縮至藥液中生藥含量為１．０ｇ／ｍＬ，置于４℃冰箱保存，備用。

１．１．２菌株及標準血清大腸桿菌Ｏ７８株與大腸桿菌Ｏ抗原定型血清，購自中國獸醫藥品監察所。

１．１．３試劑ＬＢ培養基、肉湯培養基購自青島海博生物技術有限公司。

１．１．４試驗動物未經雞大腸桿菌疫苗免疫的１日齡健康海蘭褐公雛210只，飼喂無抗生素添加劑的飼料，自由采食與飲水。

１．２方法

１．２．１大腸桿菌感染液制備將凍干的大腸桿菌Ｏ７８于室溫下融化，無菌條件下劃線接種于ＬＢ培養基上，３７℃培養２４ｈ后挑取生長良好的單個菌落接種于肉湯培養基中，３７℃培養２４ｈ。用倍比稀釋進行計數，使細菌濃度為１．０×１０９ＣＦＵ／ｍＬ，４℃保存備用。

１．２．２試驗雞分組與處理將供試雞隨機分為７組，每組３０只。至１２日齡時，除健康組外每組雞只均胸肌注射大腸桿菌培養液０．２ｍＬ／只（１．０×１０９CFU／ｍＬ）攻毒，各組動物分別進行處理，為準確把握給藥劑量，采用灌胃方式給藥，各組不同劑量的藥物稀釋成同體積灌服。其中，Ａ組為健康對照組，隔離飼養，不攻毒，不用藥；Ｂ組為感染對照組，攻毒不給藥；Ｃ、D、Ｅ組分別為中藥低、中、高劑量治療組，攻毒感染發病后，分別按每只０．０５、０．１０、０．２０ｍＬ復方中藥制劑的劑量給藥；Ｆ組為氧氟沙星組，攻毒感染發病后，按每１ｋｇ體重０．１ｍＬ氧氟沙星的劑量，以溫開水溶解后灌服，每日１次，連續５ｄ。

１．２．３結果記錄分別計算各組的發病率、感染死亡率、治愈率、增重率等。計算公式如下：發病率＝組內發病數／該組試驗雞數×１００％；感染死亡率＝組內死亡數／該組試驗雞數×１００％；治愈率＝組內治愈數／該組試驗雞發病數×１００％；增重率＝組內最終平均體重－初始平均體重／初始平均體重×１００％。

１．２．４統計分析試驗數據以ＳＰＳＳ１２．０軟件進行統計處理，試驗數據以（ｘ±s）表示。

２結果

２．１人工感染發病情況

試驗雞攻毒２ｈ后，各組雞開始陸續發病，最初出現精神沉郁，活動減少，蹲伏或擁擠扎堆。４ｈ后除中藥預防組僅有少數雞只發病外，其余各組全部發病。病雞精神萎靡，閉目呆立，或扎堆而臥，羽毛蓬亂，食欲減退，排黃色或黃綠色稀便；部分雞呼吸困難，張口伸頸，氣促喘粗；有的雞站立不穩，腿翅無力或癱軟臥地。攻菌８ｈ后開始有雞死亡，１０ｈ后死亡數增加，２４～４８ｈ后達死亡高峰，７２ｈ后死亡明顯減少。各組雞發病和死亡情況見表１。

２．２剖檢變化

病死雞鼻腔及口腔存有泡沫狀液體，肛門及其周圍羽毛粘附糞污，早期死亡雞剖檢僅見急性敗血癥病變。中后期死亡病雞出現典型的心包炎、肝周炎、氣囊炎病變。心包腔積有淡黃色渾濁滲出液，心包壁增厚，不透明，附著纖維素性滲出物，嚴重的可見黃色干酪樣物質；肝臟腫大，表面覆蓋灰白色纖維素性滲出物，容易剝離，肝實質偶有灰色壞死區；氣囊壁混濁，不均勻增厚，呼吸面被覆干酪樣滲出物；嗉囊內容物充實，酸臭氣味濃烈；腺胃、肌胃內容物有酸臭氣味；十二指腸、空腸、回腸、盲腸等黏膜出血、脫落，腸系膜充血、出血；腎臟腫大充血。

２．４“芪苓湯”對人工感染雞大腸桿菌病的治療作用

雛雞接種大腸桿菌發病后，“芪苓湯”治療組分別按每只０．０５、０．１０、０．２０ｍＬ的劑量稀釋成同體積灌服給藥，使病情很快得到控制。８ｈ后，病情逐漸趨于緩解，病雞精神漸顯活潑，活動增加；２４ｈ后飲、食欲明顯好轉；４８ｈ后病雞臨床癥狀基本消失，飲、食欲基本恢復正常。各治療組療效均極顯著優于感染對照組（Ｐ＜０．０１）。其中，低劑量治療組療效顯著低于氧氟沙星治療組（Ｐ＜０．０５），其余各治療組間無明顯差異（Ｐ＞０．０５）（表１）。試驗期間沒有發現試驗雞對復方中藥制劑有明顯的不良反應。

２．５“芪苓湯”對試驗雞增重的影響

試驗雞體重變化情況見表２。

由表２可見，各組雞在１２日齡時平均體重差異不顯著（Ｐ＞０．０５）。在１７日齡各組雞停藥后，感染對照組增重率極顯著低于其他各組（Ｐ＜０．０１）；“芪苓湯”高劑量組增重率極顯著高于其他各組（Ｐ＜０．０１）；中劑量組增重率與健康對照組無顯著差異（Ｐ＞０．０５），但顯著高于氧氟沙星治療組（Ｐ＜０．０５），同時極顯著高于感染對照組和低劑量治療組（Ｐ＜０．０１）；低劑量治療組增重率極顯著高于感染對照組，同時極顯著低于其余各組（Ｐ＜０．０１）。

３討論

（１）研究證實，黃芪對肺炎雙球菌、痢疾桿菌、溶血性鏈球菌Ａ、Ｂ、Ｃ及金黃色、檸檬色、白色葡萄球菌等均有抑制作用，對流感仙臺ＢＢ１病毒及口腔病毒的致病作用也有一定的抑制作用，但無直接滅活作用［６］。黃芪可促進機體體液免疫和細胞免疫功能。茯苓多糖具有增強免疫的作用，既可增強細胞免疫，又可增強體液免疫。羧甲基茯苓多糖還具有免疫調節、保肝降酶、間接抗病毒、誘生和促誘生白細胞調節素等多種生理活性。茯苓具有抗菌作用，對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、炭疽桿菌、綠膿桿菌、甲型鏈球菌、大腸桿菌、乙型鏈球菌等均有抑制作用［７］。香附提取物對由變形鏈球菌引起的齲齒有預防作用，對念珠菌性腹膜炎有治療作用，香附根莖提取的總黃酮類和乙酸乙酯提取部分對腸炎沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和糞腸球菌有顯著抑制作用［８－１０］。

（２）人工感染雞發病后，按每只０．０５、０．１０、０．２０ ｍＬ的劑量灌服“芪苓湯”，每日１次，連用５ｄ，可使病情很快得到控制，其治愈率分別為７０．００％、８３．３３％、９０．００％，表明復方中藥制劑“芪苓湯”對雞大腸桿菌病具有較好的治療作用。每只０．２０ｍＬ的高劑量“芪苓湯”內服也沒有引起明顯的不良反應，表明該制劑具有較高的臨床用藥安全性。

（３）試驗雞感染大腸桿菌Ｏ７８后，其生長發育受到嚴重影響，“芪苓湯”內服在一定程度上抵消了大腸桿菌感染對雞生長發育的影響，與感染對照組相比，可極顯著提高病雞的增重率（Ｐ＜０．０1），其中以高劑量組增重效果最明顯，其增重率極顯著高于其他各組（Ｐ＜０．０１），進一步從體重變化角度證明了復方中藥制劑“芪苓湯”對人工感染雞大腸桿菌病的治療作用。

參考文獻：

［１］甘孟侯．中國禽病學［Ｍ］．北京：中國農業出版社，１９９９．

［２］中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所．動物傳染病學［Ｍ］．北京：中國農業出版社，１９９９．

［３］陳守彬，陳曉霞．禽慢性呼吸道病并發雞大腸桿菌病的防制［Ｊ］．畜牧與獸醫，２００５，３７（２）：４２－４３．

［４］孫鎏國，蔣鎖俊，姚德法．致病性大腸桿菌的耐藥性監測［Ｊ］．上海畜牧獸醫通訊，２００４（５）：１８．

［５］賀常亮，付本懂，韋旭斌，等． 防治雞大腸桿菌病方劑統計分析［Ｊ］．中獸醫醫藥雜志，２００８（３）：７４－７６．

［６］陰健，郭力弓．中藥現代研究與臨床應用［Ｍ］．北京：京苑出版社，１９９５．

［７］孫博光，邱世翠，李波清，等．茯苓的體外抑菌作用研究［Ｊ］．時珍國醫國藥，２００３，１４（７）：３９４．

［８］ＹＵ Ｈ Ｈ，ＬＥＥ Ｄ Ｈ，ＳＥＯ Ｓ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｃａｒｉｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ［Ｊ］． Ａｍ Ｊ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ， ２００７，３５（３）：４９７－５０５．

［９］ＤＵＡＲＴＥ Ｍ Ｃ，ＦＩＱＵＥＩＲＡ Ｇ Ｍ，ＳＡＲＴＯＲＡＴＴＯ Ａ，ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉ－Ｃａｎｄｉｄａ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｂｒａｚｉｌｉａｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］． Ｊ Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００５，９７（２）；３０５－３１１．

［１０］ＫＩＬＡＮＩ Ｓ， ＢＥＮ ＳＧＨＡＩＥＲ Ｍ， ＬＩＭＥＭ Ｉ，ｅｔ ａｌ． Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ， ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ， ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｕｂｅｒｓ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏａｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，９９（１８）：９００４－９００８．