血水草提取物對(duì)福壽螺的殺螺效果

摘要：利用溶劑浸提的方法獲得血水草根莖的醇提物和水提物，通過室內(nèi)生物測(cè)定的方法就血水草根莖提取物對(duì)福壽螺的殺螺效果進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示，在２５０～４ ０００ μｇ／ｍＬ的濃度范圍內(nèi)，血水草醇提物對(duì)福壽螺卵的孵化抑制率、幼螺和成螺的相對(duì)毒殺率分別為３０．２２％～１００.00％、１２．３６％～８６．５２％和５．５６％～３６．６７％；水提物對(duì)福壽螺卵的孵化抑制率、幼螺和成螺的相對(duì)毒殺率分別為１５．１１％～４２．４５％、７．８７％～３４．８３％和３．３３％～２８．８９％。綜合結(jié)果表明血水草醇提物對(duì)福壽螺的毒殺作用強(qiáng)于水提物，具有開發(fā)為植物源殺螺劑的潛力。

關(guān)鍵詞：血水草；福壽螺；提取物；殺螺效果

中圖分類號(hào)：Ｓ４８２．３９文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０11）07－1390-04

Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｅｏｍｅｃｏｎ ｃｈｉｏｎａｎｔｈａ Ａｇａｉｎｓｔ Ａｍｐｕｌｌａｒｉａ ｇｉｇａｓ

ＺＨＯＵ Ｂｉｎｇ，ＺＯＵ Ｙｏｕ，ＹＡＮ Ｘｉａｏ－ｈｏｎｇ，ＬＩＵ Ｍｉｎｇ－ｘｉｎ，ＺＨＯＮＧ Ｊｕａｎ，ＪＩＡＮＧ Ｐｉｎｇ

（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｊｉｎｇｇａｎｇｓｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｊｉ’ａｎ ３４３００９， Ｊｉａｎｇｘｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄａｌ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｅｏｍｅｃｏｎ ｃｈｉｏｎａｎｔｈａ ｏｎ Ａｍｐｕｌｌａｒｉａ ｇｉｇａｓ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｂｙ ｂｉｏａｓｓａｙｓ under ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ２５０ ｔｏ ４ ０００ μｇ／ｍＬ， ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ａｇａｉｎｓｔ ｓｎａｉｌ ｅｇｇｓ， ｒｅｌａｔｉｖｅ ｋｉｌｌｉｎｇ ｒａｔｅ ａｇａｉｎｓｔ ｙｏｕｎｇ ａｎｄ ａｄｕｌｔ ｓｎａｉｌｓ ｗｅｒｅ ３０．２２％～１００．００％，１２．３６％～８６．５２％ ａｎｄ ５．５６％～３６．６７％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ａｎｄ ｔｈｏｓｅ ｆｏｒ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｗｅｒｅ １５．１１％～４２．４５％，７．８７％～３４．８３％ ａｎｄ ３．３３％～２８．８９％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈａｔ ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄａｌ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ； ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｈａｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ being devetoped ａｓ ｐｈｔｏ－ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｏｍｅｃｏｎ ｃｈｉｏｎａｎｔｈａ； Ａｍｐｕｌｌａｒｉａ ｇｉｇａｓ； ｅｘｔｒａｃｔ； ｍｏｌｌｕｓｃｉｃｉｄａｌ ｅｆｆｉｃａｃｙ

血水草（Ｅｏｍｅｃｏｎ ｃｈｉｏｎａｎｔｈａ Ｈａｎｃｅ）是罌粟科（Ｐａｐａｖｅｒａｃｅａｅ）血水草屬（Ｅｏｍｅｃｏｎ）植物，特產(chǎn)于長(zhǎng)江以南各省和西南山區(qū)，為我國(guó)獨(dú)屬獨(dú)種的特有物種［１］。目前，針對(duì)血水草的研究主要集中在解剖學(xué)［２，３］、化學(xué)成分［４－７］及生物活性方面［８］。其代謝產(chǎn)物的生物活性主要表現(xiàn)為抗菌［９，１０］、抗腫瘤［１１－１３］、滅螺［１４－１６］、殺血吸蟲［１７，１８］等。其中在滅螺活性方面，關(guān)注最多的是代謝產(chǎn)物對(duì)釘螺的滅螺活性，而關(guān)于血水草代謝產(chǎn)物對(duì)福壽螺（Ａｍｐｕｌｌａｒｉａ ｇｉｇａｓ Ｓｐｉｘ）的滅螺效果未見報(bào)道。為進(jìn)一步探討血水草的開發(fā)價(jià)值，本文通過溶劑浸提的方法獲得血水草地下根莖代謝產(chǎn)物，再通過室內(nèi)生物測(cè)定的方法檢測(cè)了代謝產(chǎn)物對(duì)福壽螺卵孵化的抑制作用、對(duì)幼螺和成螺的毒殺作用，探討了血水草代謝產(chǎn)物殺滅福壽螺的潛力，為將血水草開發(fā)成植物殺螺劑提供理論依據(jù)。

１材料與方法

１．１試驗(yàn)材料

供試血水草植株于２００８年９～１０月采自井岡山水口，采收時(shí)處于果期，由井岡山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院肖宜安教授鑒定。將植株地下根莖收回，清洗干凈，于室內(nèi)通風(fēng)處自然晾干，剪成１～２ ｃｍ長(zhǎng)的小段，再用ＪＺ-７１１４型粉碎機(jī)粉碎成粉末備用。福壽螺卵采自吉安市青原區(qū)贛江邊水稻田溝中，幼螺和成螺均采自吉安市青原區(qū)木山村農(nóng)田。

１．２提取物的制備與溶液配制

取粉碎后的血水草根莖粉末２ ｋｇ，先用９５％乙醇超聲波振蕩浸提，重復(fù)３次，每次浸提６ ｈ，收集浸提液，過濾除殘?jiān)瑴p壓濃縮回收乙醇得棕色膏狀物。乙醇浸提后的植物材料再用水浸提，操作方法同乙醇提取，最終同樣得棕色膏狀物。稱取適量的醇提物和水提物，用水配制成４ ０００、２ ０００、１ ０００、５００、２５０ μｇ／ｍＬ不同濃度的提取物溶液，備用。

１．３殺卵作用測(cè)定

取產(chǎn)后約７～１０ ｄ色澤一致（粉紅略帶灰白）的卵塊，小心將其弄散，選未受損傷的卵粒５０粒置于加有５ ｍＬ不同濃度的血水草提取物溶液的培養(yǎng)皿中，置（２５±１）℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，連續(xù)１０ ｄ觀察其孵化情況，１０ ｄ后統(tǒng)計(jì)孵化卵粒數(shù)，并計(jì)算孵化抑制率。同時(shí)設(shè)置對(duì)照處理（清水處理，ＣＫ，下同），每處理３次重復(fù)。

１．４對(duì)幼螺的毒殺作用

用２００ ｍＬ燒杯盛放１００ ｍＬ上述不同濃度的血水草提取物溶液，每個(gè)燒杯中投放２～３旋的鮮活幼螺３０顆，用紗布封口，以防幼螺逃出。處理后連續(xù)５ ｄ檢查各處理幼螺死亡情況，并計(jì)算死亡率。同時(shí)設(shè)置對(duì)照處理，每處理重復(fù)３次。

１．５對(duì)成螺的毒殺作用

用鐵制的長(zhǎng)方形盆（２９．５ ｃｍ×１９．０ ｃｍ×４．５ ｃｍ） 盛放１ ０００ ｍＬ試液，每盆投放３０顆個(gè)體較大的成螺，用紗布封口，防止成螺逃出。連續(xù)５ ｄ檢查各處理成螺的生死情況并計(jì)算死亡率。同時(shí)設(shè)置對(duì)照處理，每處理重復(fù)３次。

１．６福壽螺死活鑒定標(biāo)準(zhǔn)

福壽螺死活鑒定參考駱悅等［１９］和Ｓａｎｔｏｓ等［２０］的方法，將福壽螺置于處理液后，每隔２４ ｈ取出各處理中的懷疑死螺，將其放入清水中，浮于水面或懸浮于水中對(duì)外界刺激無反應(yīng)的為死螺，沉于水底且活動(dòng)的為活螺。

１．７數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用Ｅｘｃｅｌ軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，并運(yùn)用ＳＰＳＳ １３．０統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析。

２結(jié)果與分析

２．１血水草提取物對(duì)福壽螺卵孵化的抑制作用

不同濃度的血水草提取物處理的福壽螺的卵孵化率均顯著低于對(duì)照，孵化率隨著提取物濃度的升高而降低，孵化抑制率隨著濃度的升高而升高。醇提物對(duì)福壽螺卵的孵化抑制率在３０．２２％以上，當(dāng)濃度為２ ０００ μｇ／ｍＬ時(shí)，抑制率達(dá)到９８．５６％；水提物對(duì)福壽螺卵的孵化抑制率也超過１５．１１％，在最高濃度４ ０００ μｇ／ｍＬ時(shí)，抑制率達(dá)到４２．４５％（表１），表明血水草提取物對(duì)福壽螺的卵孵化具有一定的抑制作用。醇提物孵化抑制效果的回歸方程為ｙ＝２０．７６０ｘ-１３．１８０，相關(guān)系數(shù)（ｒ）為０．９８０ ８，抑制中濃度ＥＣ５０為４５０．９３ μｇ／ｍＬ；水提物孵化抑制效果的回歸方程為ｙ＝７．８９３ｘ-３．４０５，相關(guān)系數(shù)（ｒ）為０．９７９ ３，抑制中濃度ＥＣ５０為７ ４０６．５０ μｇ／ｍＬ。

２．２血水草提取物對(duì)福壽螺幼螺的毒殺作用

血水草提取物對(duì)福壽螺幼螺的毒殺作用效果見表２，可以看出，醇提物和水提物對(duì)福壽螺幼螺均具有一定的毒殺作用，且毒殺效果隨濃度的升高而增強(qiáng)，醇提物的毒殺效果要強(qiáng)于水提物。在２５０～

４ ０００ μｇ／ｍＬ濃度范圍內(nèi)，醇提物處理的福壽螺幼螺的死亡率顯著高于對(duì)照，相對(duì)毒殺率為１２．３６％～８６．５２％；而在相同的濃度范圍內(nèi)，水提物對(duì)幼螺的相對(duì)毒殺率為７．８７％～３４．８３％，表明血水草醇提物對(duì)福壽螺幼螺具有相對(duì)較好的毒殺效果。醇提物幼螺毒殺效果的回歸方程為ｙ＝１７．７２０ｘ-２１．５７０，相關(guān)系數(shù)（ｒ）為０．９９６ ０，抑制中濃度ＥＣ５０為１ ０６１．１５ μｇ／ｍＬ；水提物幼螺毒殺效果的回歸方程為ｙ＝６．９６６ｘ-６．２１５，相關(guān)系數(shù)（ｒ）為０．９９６ ５，抑制中濃度ＥＣ５０大于１０ ０００ μｇ／ｍＬ。

２．３血水草提取物對(duì)福壽螺成螺的毒殺作用

表３顯示了血水草提取物對(duì)福壽螺成螺的毒殺效果，可以看出，提取物對(duì)福壽螺成螺具有一定的毒殺作用，毒殺效果隨著濃度的升高而增強(qiáng)。２５０～４ ０００ μｇ／ｍＬ醇提物溶液處理的成螺的死亡率顯著高于對(duì)照，其相對(duì)毒殺率為５．５６％～３６．６７％；而５００～４ ０００ μｇ／ｍＬ水提物溶液處理的成螺的死亡率顯著高于對(duì)照，其相對(duì)毒殺率為７．７８％～２８．８９％，２５０ μｇ／ｍＬ水提物溶液對(duì)成螺無顯著毒殺作用，相對(duì)毒殺率為３．３３％。醇提物成螺毒殺效果的回歸方程為ｙ＝７．２０６ｘ-９．８５１，相關(guān)系數(shù)（ｒ）為０．９７４ ７，抑制中濃度ＥＣ５０為８ １４９．３０ μｇ／ｍＬ；水提物成螺毒殺效果的回歸方程為ｙ＝５．９０５ｘ-８．０７５，相關(guān)系數(shù)（ｒ）為０．９８６ ９，抑制中濃度ＥＣ５０大于１２ ０００ μｇ／ｍＬ。

３討論

福壽螺是原產(chǎn)于南美洲亞馬遜河流域的一種大型淡水食用螺。在我國(guó)，因盲目引進(jìn)、大量飼養(yǎng)而管理不善，福壽螺迅速逃逸擴(kuò)散至田間，成為一種農(nóng)業(yè)有害生物，主要為害水稻、蔬菜及其他水生作物［２１］。同時(shí)，福壽螺是人畜共患寄生蟲病病原廣州管圓線蟲（Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｃａｎｔｏｎｅｎｓｉｓ）的重要中間宿主之一，對(duì)人類健康造成很大傷害［２２，２３］。２００３年福壽螺被國(guó)家環(huán)保總局列為１６種“危害最大的外來物種”之一。目前針對(duì)福壽螺的防治主要以化學(xué)防治為主，人工防治和農(nóng)業(yè)防治為輔，生物防治處于摸索階段。化學(xué)防治中所使用的有機(jī)殺螺劑雖然對(duì)福壽螺有一定防效，但對(duì)人的皮膚有強(qiáng)烈的刺激作用，有的甚至?xí)禄掳瑢?duì)水生生物有劇毒，對(duì)自然界生態(tài)平衡有一定破壞，防治成本高，實(shí)際應(yīng)用中有很大局限性［２４］；農(nóng)業(yè)防治和人工防治費(fèi)時(shí)費(fèi)力，需要大量的勞力物力財(cái)力［２５］。因此，國(guó)內(nèi)外都相繼開展了福壽螺的生物防治研究。

在植物源殺螺劑方面，章玉蘋等［２６］研究發(fā)現(xiàn)金腰箭（Ｓｙｎｅｄｒｅｌｌａ ｎｏｄｉｆｌｏｒａ（Ｌ．）Ｇａｅｒｔ）甲醇提取物對(duì)福壽螺幼螺有較好的浸殺作用，同時(shí)對(duì)成螺和卵也具有一定的控制效果。曾坤玉等［２７］和胡飛等［２８］研究發(fā)現(xiàn)五爪金龍（Ｉｐａｎｏｅａ ｃａｉｒｉｃａ）具有開發(fā)出既能有效防治福壽螺又不影響水稻生長(zhǎng)和稻田環(huán)境的植物源殺螺劑的潛力。在實(shí)驗(yàn)室條件下，Ｊｏｓｈｉ等［２９］發(fā)現(xiàn)，從昆諾阿藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ ｑｕｉｎｏａ）中分離得到的皂角苷對(duì)福壽螺有很好的控制效果。最近，董道青等［３０］研究發(fā)現(xiàn)夾竹桃（Ｎｅｒｉｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ Ｍｉｌｌ）葉提取物對(duì)福壽螺也具有一定的毒殺活性。可以看出，在自然界中存在著可以開發(fā)為福壽螺殺螺劑的植物材料。本研究發(fā)現(xiàn)了另外一種殺螺植物——血水草。研究結(jié)果表明，血水草醇提物和水提物對(duì)福壽螺都具有一定的控制作用，從控制效果來看，醇提物的殺螺效果要強(qiáng)于水提物，而且醇提物對(duì)福壽螺卵的孵化具有很強(qiáng)的抑制作用，在濃度為２ ０００ μｇ／ｍＬ時(shí)，抑制率達(dá)到９８．５６％；其對(duì)福壽螺幼螺同樣具有很強(qiáng)的毒殺作用，在濃度為４ ０００ μｇ／ｍＬ時(shí)，相對(duì)毒殺率達(dá)到８６．５２％；其對(duì)福壽螺成螺雖然也有一定的毒殺作用，但毒殺效果不理想，在最高濃度

４ ０００ μｇ／ｍＬ時(shí)，相對(duì)毒殺率僅為３６．６７％。雖然血水草醇提物對(duì)福壽螺的毒殺效果不及現(xiàn)在市面上常用的有機(jī)化學(xué)殺螺劑貝螺殺、五氯酚鈉、辛硫磷和巴丹等，但與金腰箭、五爪金龍、昆諾阿藜和夾竹桃提取物的毒殺效果相當(dāng)，甚至比夾竹桃醇提物的效果更好。

綜上所述，血水草具有開發(fā)為福壽螺植物殺螺劑的潛力。同時(shí)，有研究表明，血水草生物堿對(duì)鰱魚、鯉魚和鯽魚苗具有較低的毒性［３１］，這也為血水草提取物開發(fā)為殺螺劑提供了另一方面的理論依據(jù)。然而，在活性方面尤其是針對(duì)成螺的毒殺活性有待提高，血水草殺螺活性成分需要進(jìn)一步的分離純化。另外，本研究尚處于實(shí)驗(yàn)室階段，田間試驗(yàn)還需進(jìn)一步開展，代謝產(chǎn)物對(duì)作物的安全性、對(duì)生物多樣性的影響、毒理學(xué)特性及助劑的篩選等也需要深入研究。

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