黃頂菊葉片抑菌作用初步研究

摘要：用水、５０％乙醇、８０％乙醇和９５％乙醇從黃頂菊葉片中提取活性成分，初步探討了其抑菌作用，結(jié)果表明，黃頂菊提取物對大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌和枯草芽孢桿菌均有不同程度的抑菌作用，其中乙醇提取液抑菌效果強于水提取液，且８０％乙醇提取物抑菌作用最強；４種溶劑提取物對大腸桿菌的抑制效果最強。

關(guān)鍵詞：黃頂菊；提取物；細菌；抑菌活性

中圖分類號：Ｓ４８２．２＋９２文獻標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）07－1386-02

Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Bacteriostasis ｏｆ Ｆｌａｖｅｒｉａ ｂｉｄｅｎｔｉｓ Ｌｅａｖｅｓ

ＬＵ Ｚｈａｎ－ｇｅｎ

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｅｎｇｓｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｎｇｓｈｕｉ ０５３０００，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ of Ｆｌａｖｅｒｉａ ｂｉｄｅｎｔｉｓ ｗｉｔｈ ｗａｔｅｒ（ＰＷＥ） ａｎｄ ａｌｃｏｈｏｌ（ＰＡＥ，５０％、８０％ａｎｄ ９５％ ｅｔｈａｎｏｌ）ｉｎ Ｈｅｎｇｓｈｕｉ Ｌａｋｅ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｉｔｉｇａｔｅｄ ｆｏｒ the ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｆｌａｖｅｒｉａ ｂｉｄｅｎｔｉｓ ｈａｄ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ， Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ａｎｄ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ． Ｔｈｅ ８０％ ａｌｃｏｈｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｈａｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｒｏｍｉｎｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ the ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ＰＷＥ ａｎｄ ＰＡＥ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｎ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ was ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｆｌａｖｅｒｉａ ｂｉｄｅｎｔｉｓ； ｅｘｔｒａｃｔ； ｂａｃｔｅｒｉａ； ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ

黃頂菊（Ｆｌａｖｅｒｉａ ｂｉｄｅｎｔｉｓ）是菊科黃菊屬［１］一年生外來入侵植物。目前對其研究主要集中在如何防除上，但黃頂菊具有很好的抗蟲、抗菌活性［２］。黃菊屬的近緣屬植物萬壽菊已被列入殺蟲性植物，其主要殺蟲成分α－三連噻吩是一種典型的光活化毒素，且殺蟲活性和α－三連噻吩的含量成正相關(guān)［３］，對植物病原菌具有光活化毒殺增效作用。而α－三連噻吩在黃頂菊中分布廣泛，含量很高［４］，黃菊屬植物還能合成酚類化合物中的硫酸鹽類黃酮物質(zhì)，也具有強的抑菌效果［５］。因此，黃頂菊有望成為一種新的天然農(nóng)藥提取植物。

筆者研究了黃頂菊葉片提取物對３種細菌的抑制作用，以期為植物源抑菌劑開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

１材料和方法

１．１材料與設(shè)備

１．１．１實驗材料黃頂菊葉片，２００８年１０月采于衡水湖邊。

１．１．２實驗菌種大腸桿菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、枯草芽孢桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、產(chǎn)氣桿菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）菌種由衡水學(xué)院生命科學(xué)系微生物實驗室提供。

１．１．３培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏５．０ ｇ、蛋白胨１０．０ ｇ、瓊脂２０．０ ｇ、ＮａＣｌ ５．０ ｇ、水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ值 ７．０。

１．１．４主要儀器設(shè)備及試劑ＳＢ－ＪＳ－１超凈工作臺（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、ＣＸ－２５０超聲波清洗儀（北京醫(yī)療設(shè)備二廠）、ＺＤ－８５氣浴恒溫振蕩器（江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠）、ＹＸＱ－ＬＳ－ＳＨ全自動立式電熱壓力蒸汽滅菌鍋（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）、ＦＡ１００４Ｎ電子天平（上海）、微調(diào)移液器（法國吉爾森），ＨＨ－６數(shù)顯水浴鍋、烘干箱、５００ ｍＬ蒸餾瓶（天津產(chǎn)）、研缽；蒸餾水、５０％乙醇、８０％乙醇、９５％乙醇（國產(chǎn)試劑）、６ ｍｍ濾紙片等。

１．２實驗方法

１．２．１黃頂菊葉片浸提液制備將黃頂菊葉片洗凈、６０℃烘箱烘干，將葉片稱取６份，每份１０ ｇ，在干凈的研缽內(nèi)研碎，分別于蒸餾水、５０％乙醇、８０％乙醇、９５％乙醇各１６０ ｍＬ中浸泡，并置于超聲波破碎儀中振蕩２０ ｍｉｎ后移至氣浴恒溫振蕩器２８℃振蕩２ ｄ，殘渣繼續(xù)用以上４種不同浸提液５０ ｍＬ浸泡，于振蕩器中振蕩過夜， 次日將第一次與第二次的提取液混和，水浴鍋蒸餾，提取溶劑約有２５ ｍＬ時取出，２５ ｍＬ容量瓶定容，置于 ４℃冰箱冷藏待用。

１．２．２培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基分裝到三角瓶，１２１℃高壓滅菌２０ ｍｉｎ待用。

１．２．３菌懸液的制備把供試的各種菌種進行斜面活化，然后用１０ ｍＬ無菌生理鹽水把已活化的供試菌從試管中混勻，制成菌懸液，再用無菌吸管取 １ ｍＬ充分混合的菌懸液于試管中，加入９ ｍＬ無菌生理鹽水，調(diào)制濃度為含菌體為１０６～１０７個／ｍＬ的菌懸液備用。

１．２．４含菌平板的制備將無菌培養(yǎng)基趁熱倒于平皿中，凝固后，將上述各菌懸液用移液槍取１００ μＬ滴到平皿，再用無菌的涂布棒迅速將菌液涂抹均勻，制成含菌平板。

１．２．５抗菌活性的測定用直徑為６ ｍｍ的滅菌濾紙片分別在蒸餾水、５０％乙醇、８０％乙醇、９５％乙醇４種不同的浸提液中浸泡３ ｈ，３７℃溫箱干燥后，用紫外燈照射滅菌１０～１５ ｍｉｎ，用無菌鑷子將浸透不同濃度溶液的濾紙片放在含菌平板上３７℃培養(yǎng)７２ ｈ，測量抑菌環(huán)直徑；小于或等于７ ｍｍ判為抑菌，同一濃度所有濾紙片均有抑制作用判為合格。根據(jù)抑菌圈的大小判斷不同提取液對供試菌的抑制效果［６，７］。各提取液的每項抑菌實驗均平行重復(fù)３次。

２結(jié)果與分析

從表１可以看出，５０％、８０％、９５％乙醇和水提取液對大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌、枯草芽孢桿菌都有抑制作用，其中８０％乙醇提取液的抑菌作用最為明顯，蒸餾水提取液的抑菌作用最差。８０％乙醇提取液對３種細菌的抑菌效果均最好，而９５％乙醇提取液對枯草芽孢桿菌的抑制效果與８０％乙醇提取液的抑制效果差異不顯著，；95%乙醇提取液對大腸桿菌的抑制效果顯著高于80%乙醇提取液。

各提取物對同種對象菌抑制作用的差異顯著性分析如表２所示，４種溶劑提取物對每種對象菌的抑制作用均差異顯著，且對大腸桿菌的抑制效果最強，對產(chǎn)氣桿菌與枯草芽孢桿菌的抑制效果差異顯著。說明４種溶劑獲得的黃頂菊提取物可以實現(xiàn)對其中具有抑菌作用成分的初步分離。

３結(jié)論與討論

黃頂菊水提取液和醇提取液都具有不同程度的抑菌活性，其中醇提取液抑菌效果強，且８０％的抑菌效力強于５０％和９５％，這說明８０％乙醇作溶劑更容易使黃頂菊體內(nèi)有效抑菌物質(zhì)提取出來。４種溶劑提取物對大腸桿菌的抑制效果最強，說明大腸桿菌對黃頂菊的提取物較敏感。

本實驗只是初步探討了黃頂菊的抑菌作用，需要進一步地測定其最小抑菌濃度和半致死濃度。黃頂菊的抑菌作用成分及其他溶劑提取液的抑菌效果尚待進一步的研究。

參考文獻：

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