子宮內膜異位癥患者腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的測定及相關性研究

[摘要] 目的 檢測子宮內膜異位癥（EMs）患者和對照組腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的水平變化及相關性，探討其在子宮內膜異位癥發病機制中的作用。方法 采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測39例內異癥患者（EMs組）及25例非內異癥患者（對照組）腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A水平。結果 ①EMs組中，IGF-Ⅰ和PAPP-A水平分別為（117.1±36.6）ng/L、（2.85±0.56）ng/mL，均高于對照組的（79.5±18.7）ng/L、（1.93±0.56）ng/mL（P＜0.05）；②Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中IGF-Ⅰ水平為（126.5±39.1）ng/L高于Ⅰ～Ⅱ期患者的（107.3±32.0）ng/L（P＞0.05），而Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中PAPP-A水平為（3.15±0.50）ng/mL高于Ⅰ～Ⅱ期患者的（2.55±0.45）ng/mL（P＜0.05），且PAPP-A水平與r-AFS評分呈正相關；③EMs患者腹腔液中PAPP-A和IGF-Ⅰ水平無顯著相關性（P＞0.05）。結論 腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的增高可能與內異癥的發病有關；PAPP-A與疾病的嚴重程度有關。

[關鍵詞] 子宮內膜異位癥；腹腔液；PAPP-A；IGF-Ⅰ

[中圖分類號] R711.71 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）23-110-03

IGF-Ⅰ and PAPP-A Changes in the Peritoneal Fluid and the Relationship in the Patients of Endometriosis

JIN Haihong1 LIU Huining2 ZENG Baojin1

1.Department of Obstetrics and Gynecology，Zhejiang Province Taizhou Hospital， Taizhou 317000，China；2. Department of Obstetrics and Gynecology，Hunan Province Changsha Xiangya Hospital，Changsha 410008，China

[Abstract] Objective To detect the concentration of IGF-Ⅰand PAPP-A in the peritoneal fluid of women with the endometriosis，so as to investigate the role of PAPP-A and IGF-I in the pathogenesis of endometriosis. Methods The study group included 39 samples of peritoneal fluid from patients with endometriosis，and control group included 25 samples of peritoneal fluid from patients without endometriosis. The peritoneal fluids were collected at the time of laparoscopic operation. Concentration of IGF-Ⅰand PAPP-A were determined by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）. Results ①The peritoneal fluid concentrations of IGF-Ⅰ and PAPP-A in study group were significantly higher than that of control group（117.1±36.6）ng/L vs （79.5±18.7）ng/L， （2.85±0.56）ng/mL vs （1.93±0.56） ng/mL（P＜0.05）；②PAPP-A levels of severe endometriosis were significantly higher than that of mild endometriosis（3.15±0.50）ng/mL vs （2.55±0.45）ng/mL（P＜0.05）. Significant correlation was found between the stages of endometriosis and the levels of PAPP-A. ③There was no significant correlation bewteen the PF levels of PAPP-A and IGF-Ⅰ. Conclusion The increased peritoneal levels of IGF-Ⅰand PAPP-A may play an important role in the pathogenesis of endometriosis； There is significant correlation between the levels of PAPP-A and the stages of endometriosis.

[Key words] Endometriosis；Peritoneal fluid；PAPP-A；IGF-Ⅰ

子宮內膜異位癥（EMs）雖然是良性病變，但具有浸潤、轉移和復發的惡性生物學行為。近年來認為腹腔微環境在EMs的發病中起重要作用。胰島素樣生長因子（IGF）系統是由IGF-Ⅰ、Ⅱ及相應的受體、結合蛋白（IGFBP1-6）和蛋白水解酶構成。IGF-Ⅰ及其受體已被證實在異位內膜組織中有免疫化學特性。妊娠相關血漿蛋白-A（PAPP-A）屬于IGF的蛋白水解酶，在多種組織中起著調節IGF生物利用度的重要作用[1]。目前對EMs患者和正常人群腹腔液中IGF系統進行比較的研究較少，且有所爭論。本研究采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測EMs患者腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的水平，探討其在EMs發病機制中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2007年7～9月中南大學湘雅醫院婦科收治的EMs患者39例，均根據手術所見及術后病理檢查確診，平均年齡（30.6±6.4）歲。按照美國生育協會修正標準分期（r-AFS）進行分期，其中Ⅰ期14例，Ⅱ期5例，Ⅲ期11例，Ⅳ期9例，并將Ⅰ～Ⅱ期合并為輕度組，Ⅲ～Ⅳ期合并為重度組。對照組來自同期因不孕癥、卵巢單純囊腫行腹腔鏡手術治療的非EMs患者25例，平均年齡（29.8±6.2）歲。所有病例均無自身免疫性疾病，無內分泌疾病、惡性腫瘤及急性感染等，術前6個月未經任何激素類藥物治療。月經周期規則，均為28～32d。

1.2 方法

1.2.1 腹腔液的采集和處理 腹腔鏡手術者在建立氣腹，置入腹腔鏡后首先觀察、記錄盆腔情況，然后用無菌吸管及無菌注射器將腹腔液吸出2mL。如為開腹手術則在小心剪開腹膜后立即以無菌吸管及無菌注射器于子宮直腸窩處抽取腹腔液2mL，然后記錄盆腔內情況。收集到的腹腔液置于無菌EP管內以3000r/min離心10min，取上清液加入無菌EP管中，于-70℃凍存待測。有血液污染者則棄置不用。

1.2.2 檢測方法 采用酶聯免疫吸附法（ELISA），IGF-Ⅰ和PAPP-A檢測試劑盒分別購自深圳晶美公司和上海麥莎生物公司，均嚴格按照說明操作。

1.3 統計學處理

使用SPSS13.0統計學軟件進行分析，計量資料用（χ±s）表示，組間比較采用方差分析和t檢驗，采用Spearman進行相關性分析。

2 結果

2.1 EMs組與對照組腹腔液中PAPP-A和IGF-I的濃度比較

EMs組腹腔液中PAPP-A和IGF-Ⅰ濃度均高于對照組，差異有顯著性（P＜0.05）；EMs組腹腔液中PAPP-A濃度重度組高于輕度組，差異有顯著性（P＜0.05）；EMs組腹腔液中IGF-Ⅰ濃度重度組高于輕度組，差異無顯著性（P＞0.05）。見表1。

注：a與對照組相比，P＜0.05；b與重度組相比，P＜0.05；c與重度組相比，P＞0.05

2.2 EMs組腹腔液中PAPP-A、IGF-Ⅰ濃度與r-AFS評分的關系

EMs組腹腔液中PAPP-A濃度與r-AFS評分之間的相關系數為r＝0.523，P＜0.05。而IGF-Ⅰ濃度與r-AFS分期之間的相關系數為r＝0.174，P＞0.05。見圖1、圖2。

2.3 EMs組及對照組腹腔液中PAPP-A、IGF-Ⅰ含量的相關性

EMs組及對照組腹腔液中PAPP-A與IGF-Ⅰ的濃度無顯著相關性（相關系數分別為r=0.118，P＞0.05；r=-0.072，P＞0.05）。見圖3、圖4。

3 討論

3.1 IGF-Ⅰ與子宮內膜異位癥的關系

IGF-Ⅰ與胰島素有45%的同源性。IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR結合后可激活酪氨酸激酶，引起細胞內信號轉導，促進細胞有絲分裂，誘導DNA的合成，抑制細胞凋亡。目前，關于IGF與惡性腫瘤的關系已經明確。而子宮內膜異位癥中異位內膜細胞的種植、增生、血管新生等類似惡性腫瘤的生物行為是其發生發展的重要機制之一。

本研究結果顯示，EMs患者腹腔液中IGF-Ⅰ水平在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期均較對照組顯著升高，但Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中IGF-I濃度無明顯差異。與Jung等[2]的研究結果一致，而與Gurgan等[3]的研究結果存在差異。可能與以下因素有關：①病灶的個體差異。目前EMs的分期根據r-AFS評分，而r-AFS評分有一定的主觀性，且不代表病灶的活動性，有的異位灶r-AFS評分高但活性低。②不同廠家生產的試劑盒敏感性、特異性存在差異。③測量方法的差異。Gurgan等使用放射免疫法，而放射性元素具有一定的半衰期。腹腔液中高濃度的IGF-Ⅰ可能來源于漿液性滲出、脫落的子宮內膜、異位內膜組織及腹腔內的炎性細胞如巨噬細胞等。IGF-Ⅰ可通過整合素介導異位內膜細胞和細胞外基質（ECM）的黏附，促進內膜細胞的浸潤和轉移。而整合素與ECM的黏附對于細胞獲得運動、轉移能力是十分重要的，尤其當腫瘤細胞發生轉移時[4]。體外細胞培養發現，IGF-Ⅰ以劑量依賴方式刺激子宮內膜KLE細胞株的生長并保護KLE細胞抵抗阿霉素誘導的凋亡[5]。另外IGF-Ⅰ可通過增強FSH對卵巢顆粒細胞和膜細胞的作用，促進雌激素的生成和釋放，而雌激素有促進子宮內膜細胞生長的作用，同時雌激素能增強IGF-Ⅰ的促細胞有絲分裂作用[6]。兩者的正相關協同作用使這兩條信號路徑在內異癥中的作用均增強。同時IGF-Ⅰ可以上調VEGF的表達，從而促進異位內膜種植部位新生血管的形成。

3.2 PAPP-A與子宮內膜異位癥的關系

PAPP-A是1974年在孕婦血清中發現的高分子量的黏多糖蛋白。已有的研究表明，PAPP-A在腫瘤的發生發展中起一定的作用[7]。本研究發現，EMs患者腹腔液中PAPP-A水平較對照組顯著升高，Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中PAPP-A水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者，這與Arici等[8]的研究結果一致。腹腔液中PAPP-A的來源目前不明確。體外細胞培養發現，子宮內膜細胞能產生PAPP-A[9]。另外EMs患者腹腔內存在無菌性炎癥反應，各種炎癥因子分泌增多，且腹腔液中巨噬細胞的量及活性均增高。而TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、TGF-β、PGE2等均能促進巨噬細胞PAPP-A mRNA和蛋白的表達，并呈時間劑量依賴性[2]。因此腹腔液中異常升高的PAPP-A可能影響異位內膜種植、侵襲、轉移的多個環節，從而參與子宮內膜異位癥的發生發展。本研究還發現，EMs患者腹腔液中PAPP-A水平與r-AFS評分呈正相關（P＜0.05）。由于r-AFS評分系統是根據盆腔異位病灶的數目、大小、深度及盆腔粘連范圍、致密程度來進行評分的。這就提示PAPP-A與腹腔炎癥反應的程度有關，隨著腹腔液中PAPP-A水平的升高，子宮內膜異位癥患者腹腔無菌性炎癥反應及盆腔粘連的情況也加重。故PAPP-A有望用于判斷子宮內膜異位癥的嚴重程度，監測病情變化和治療效果，成為繼IL-8、RANTES之后的較好的腹水標記物[10]。

3.3 子宮內膜異位癥患者腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的相關性

研究表明，PAPP-A能特異性裂解IGFBP-4釋放IGF，而IGF反過來可加速PAPP-A對IGFBP-4的降解，從而增強游離IGF的生物活性[11]。而本研究顯示，EMs組腹腔液中PAPP-A和IGF-Ⅰ表達的列聯系數：r＝0.118（P＞0.05），表明兩者之間無明顯相關性。這與Bayes-Genis A等[10]在研究冠心病患者體循環中PAPP-A與IGF-Ⅰ水平的變化時得出的結論一致。推測與以下因素有關，PAPP-A是IGFBP-4的特異性水解酶，不能水解IGFBP-3。而IGFBP-3結合75％的IGF-Ⅰ[12]，故游離IGF-Ⅰ含量取決于總IGF-Ⅰ和IGFBP-3的濃度和產生速率之間的相互作用。另外水解釋放的是游離型IGF-Ⅰ，血中IGF只有1%左右是游離的[12]。而本實驗檢測的是腹腔液中總IGF-Ⅰ。故關于PAPP-A和IGF-Ⅰ在子宮內膜異位癥中是否有協同作用有待進一步研究。

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（收稿日期：2011-05-05）