布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥毒性的試驗研究

[摘要] 目的 觀察布洛芬注射液單次腹腔注射以后小鼠的急性中毒反應。方法 試驗采用ICR小鼠，給藥后觀察出現的各種應激反應和臨床中毒癥狀。連續觀察14d后將動物安樂死，對肉眼所見異常的組織器官進行組織病理學檢查。結果 給藥后，小鼠出現活動減少、困倦、趴伏、呼吸減少的癥狀。550、467、397、337mg/kg組死亡動物數分別為10、9、2、1，動物死亡數隨著劑量降低而減少；287mg/kg組及溶媒對照組未見動物死亡。結論 按Bliss法計算，布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥的LD50和95%可信區間為414.39mg/kg，385.17～445.89。

[關鍵詞] 布洛芬注射液；急性毒性；LD50

[中圖分類號] R971.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）23-18-02

Studies on the Acute Toxicity of Caldolor on ICR Mice by Single Intraperitoneal Injection

YUE Peng CAI Ming LIU Jing SHEN Jiao

Jiangsu Institute of Materia Medica，Jiangsu Center for Safety Evaluation of Drugs，Nanjing 210009，China

[Abstract] Objective To evaluate the acute toxicity of Caldolor on ICR mice. Methods After treatment， the animals were observed daily for totally 14 days. Stress reactions and clinical symptoms were observed and recorded. At the end of the observation period， the mice were sacrificed， necropsied and the major organs were taken out for pathological examination. Results After treatment，the mice appeared abnormal clinical signs such as reduced activity，sleepiness，reduced respiration. The number of dead mice for 550，467，397，337 mg/kg group were 10，9，2 and 1， respectively; There were no mouse dead in 287 mg/kg group and in the vehicle control group. Conclusion Calculated by Bliss，50% lethal dose（LD50） of intraperitoneal Caldolor in mice is 414.39 mg/kg and the 95% confidence interval is 385.17-445.89.

[Key words] Caldolor；Acute Toxicity；LD50

布洛芬是一個較強的前列腺素合成抑制劑，以抗炎、解熱和鎮痛效果確切、不良反應小等優點被廣泛應用，成為全球最暢銷的非處方藥物之一[1-3]。在我國國家藥品監督管理局公布的國家非處方藥目錄第一批西藥名單中，布洛芬赫然位列第一[4]。其作為注射液應用于臨床是從2009開始，為疼痛和發熱同時又不方便口服的患者帶來了方便。國內關于布洛芬注射液的相關毒性作用報道較少，本試驗在小鼠單次腹腔注射布洛芬注射液后，觀察其出現的急性毒性反應，為布洛芬注射液長期毒性試驗劑量的設計和其Ⅰ期臨床起始劑量的選擇提供參考[5-7]。

1 材料與方法

1.1 藥物

布洛芬注射液由浙江尖峰藥業有限公司提供，批號101101，本品為無色澄明液體，含布洛芬（C13H18O2）為標示量的102.0%，陰涼處保存。溶媒對照采用0.9%NaCl注射液，由南京小營藥業集團有限公司提供，批號2010070106。

1.2 動物

SPF級ICR小鼠60只，雄鼠30只，雌鼠30只。動物分為6組，每組10只，雌雄各半。實驗動物年齡為4～5周齡，體重為18～22g。實驗動物購于上海西普爾－必凱實驗動物有限公司，動物質量合格證號0041319，生產單位許可證號SCXK（滬）2008-0016。

1.3 動物飼養

小鼠飼養于江蘇省藥物安全性評價中心SPF動物房，飼養密度為5只/籠，籠具每日清潔，托盤、食盆、飲水瓶每周更換消毒，噪音小于60分貝。飼養間溫度21℃～24℃，相對濕度50％～65％，換氣次數10～20次/h，照明 12h/d（06：00開燈～18：00關燈）。

1.4 動物飼料

小鼠飼料由江蘇省協同醫藥生物工程有限公司提供，批號20101229，動物自由采食，飼料檢測內容為粗蛋白、粗灰分、水分、鈣、總磷，檢測合格。

1.5 方法

布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥預試驗設定劑量為2000mg/kg、1000mg/kg、500mg/kg、250mg/kg和125mg/kg，給藥容積為0.5mL/20g，2000mg/kg組、1000mg/kg組、500mg/kg組的死亡率均為100%（每組3只動物，給藥后3只動物均死亡），250mg/kg組、125mg/kg組小鼠沒有出現死亡情況。所以布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥正式試驗設定給藥劑量為550mg/kg、467mg/kg、397mg/kg、337mg/kg、287mg/kg和0.9%氯化鈉注射液對照組。劑量間距比為0.85。給藥容積為0.5mL/20g。布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥正式試驗藥物濃度及配制方法見表1。根據動物體重按隨機化分組法分組。劑量設計及分組情況見表2。

根據所觀察到的各種反應出現的時間、嚴重程度、持續時間以及大體解剖中肉眼可見的病變和組織病理學檢查的結果，分析判斷出現的各種反應可能涉及的組織、器官或系統，從而初步判斷供試品可能的毒性靶器官，并確定供試品的安全劑量范圍。

1.6 統計學處理

采用Bliss法于計算機上用POMS軟件計算供試品小鼠單次腹腔注射LD50和95%可信區間[6]。

2 結果

2.1 各組動物死亡情況

550mg/kg組給藥當天未見動物死亡，給藥后1d觀察時發現4雄、5雌動物死亡，僅剩的1只雄性小鼠精神萎靡，狀態不佳；給藥后3d觀察，僅剩的1只雄性小鼠死亡。467mg/kg組給藥當天未見動物死亡，給藥后1d觀察1雄、4雌動物死亡；給藥后3d觀察時發現3雄、1雌動物死亡；剩余的1只雄性小鼠在剩余觀察期內未見異常。397mg/kg組給藥當天未見動物死亡，給藥后1d觀察1雄死亡；給藥后3d觀察時發現1雌死亡，其余動物在剩余觀察期內未見異常。337mg/kg組給藥后3d觀察時發現1雌鼠死亡，其余動物在觀察期內未見異常。287mg/kg組給藥后，在觀察期內未見動物死亡。腹腔注射0.9％氯化鈉注射液對照組，小鼠在14d觀察期間均未發現明顯異常現象。動物具體死亡時間及死亡總數見表3。

2.2 動物癥狀觀察及病理解剖結果

各布洛芬注射液給藥組動物給藥后立即出現活動減少、四肢乏力、俯臥、呼吸減緩的現象，但給藥當天1～4h觀察期內未見死亡；在隨后的觀察期內，發現小鼠死亡時對小鼠尸體解剖，發現動物尸體內器官已出現自溶現象，未做病理切片；存活的動物在給藥后1d活動恢復正常。在試驗結束時，對各組存活動物進行解剖，并對主要臟器（腎臟、脾臟、肝臟、肺、心臟、腦）進行肉眼觀察及病理切片分析；各布洛芬注射液給藥組存活動物的主要臟器病理切片與對照組相比，未見異常改變。

2.3 試驗數據統計結果

布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥試驗結果見表4。經過Bliss法計算，布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥的LD50和95％可信區間為414.39mg/kg、385.17～445.89。

3 討論

以往的研究發現，布洛芬的嚴重過敏反應與急性中毒可導致腎乳頭壞死、急性腎功能衰竭、膀胱炎和排尿困難、休克、大出血、知覺喪失等癥狀[8]。布洛芬產生的不良反應通常在減量或停藥后可減輕或迅速消失[9]，治療的主要途徑為盡早洗胃、導瀉、補液、脫敏和對癥處理，以促進藥物排出。

在中國藥典二部標準（2010年版）中關于布洛芬制劑僅有口服溶液、片劑、膠囊、緩釋膠囊、滴劑和糖漿。布洛芬注射液是近兩年在國外上市的新型制劑。因為劑型的原因，布洛芬注射液經靜脈推注或滴注后生物利用度較其他劑型有顯著提高。因此，若臨床劑量設計不合理，出現不良反應后，治療方法較其他布洛芬制劑更加困難。

本次試驗中，小鼠單次腹腔給予布洛芬注射液后，各給藥組動物給藥后立即出現活動減少、四肢乏力、俯臥、呼吸減緩的現象，符合以往研究中發現的布洛芬急性中毒后的乏力、嗜睡的癥狀。存活的動物在給藥后第2天觀察時癥狀消失，也符合布洛芬經代謝后，其不良反應癥狀減輕或迅速消失的描述。

經過Bliss法計算，布洛芬注射液小鼠單次腹腔注射給藥的LD50和95％可信區間為414.39 mg/kg [（385.17～445.89）mg/kg]。在設計布洛芬注射液長期毒性試驗劑量的和其Ⅰ期臨床起始劑量時，不僅要考慮到LD50，也應充分考慮到劑型改變后布洛芬的生物利用度和其藥代動力學的變化。

[參考文獻]

[1] 施文. 布洛芬臨床藥理學及在兒科臨床的療效和安全性評價[J]. 中國實用兒科雜志，2000，15（12）：763-765.

[2] 劉紹德，莫惠平，潘秋榮，等. 布洛芬致不良反應80例文獻分析[J]. 中國藥業，2008，17（2）：48-49.

[3] Alhashemi J，Alotaibi Q. Analgesic effects of intravenous paracetamol vs. ibuprofen after cesarean section：A-706[J]. European Journal of Anaesthesiology，2006，（23）：183.

[4] 張嬌. 布洛芬的臨床研究進展[J]. 中國藥業，2010，19（5）：63-64.

[5] 國家食品藥品監督管理局. 化學藥物急性毒性試驗技術指導原則[Z]. 2006-12-19.

[6] 袁伯俊，廖明陽，李波. 藥物毒理學實驗方法與技術[M]. 北京：化學工業出版社，2007：200-210.

[7] 國家食品藥品監督管理局. 藥物非臨床研究質量管理規范[Z]. 2003-09-01.

[8] Pavliv L，Voss B，Rock A. Pharmacokinetics，safety，and tolerability of a rapid infusion of i.v. ibuprofen in healthy adults[J]. Am J Health Syst Pharm，2011，68（1）：47-51.

[9] De Vries F，Setakis E，Van Staa TP. Concomitant use of ibuprofen and paracetamol and the risk of major clinical safety outcomes[J]. Br J Clin Pharmacol，2010，70（3）：429-438.

（收稿日期：2011-06-13）