MMP-7、CD147在卵巢子宮內膜異位囊腫中的表達及意義

[摘要] 目的 探討MMP-7、CD147與子宮內膜異位癥（EMT）發病的相關性。方法 本文應用免疫組化方法檢測了33例正常子宮內膜（增生期13例，分泌期20例），45例在位子宮內膜（增生期25例，分泌期20例）、45例巧囊異位內膜中MMP-7、CD147的表達情況。檢測結果用美國Media Cybernetics公司的image pro-plus 5.0專業圖像分析軟件進行定量分析，分析結果采用SPSS11.5軟件進行秩和檢驗和等級秩相關Spearman分析。結果 （1）MMP-7、CD147在巧囊異位內膜中的表達高于其在在位內膜及正常內膜中的表達，差異有顯著性；在在位內膜中的表達高于在正常子宮內膜中的表達，差異有顯著性；在在位內膜分泌期中的表達高于增生期，差異有顯著性；而在正常子宮內膜分泌期與增生期中的表達無顯著性差異。（2）MMP-7與CD147在巧克力囊腫中的表達呈正相關趨勢，差異有顯著性。結論 MMP-7、CD147與EMT發病有關。

[關鍵詞] 卵巢子宮內膜異位囊腫；基質金屬蛋白酶-7；細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子

[中圖分類號] R711.71 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）23-51-02

The Expressions of MMP-7、CD147 in Ovarian Endometriosis and Its Significances

DING Yonghui

Department of Gynecology， the Affiliated Hospital of Ningxia Medical University， Yinchuan 750004， China

[Abstract] Objective To detect the expressions of MMP-7 and CD147 in ovarian endometriosis. Methods The expressions of MMP-7 and CD147 were observed by immunohistochemistry in the ectopic and eutopic endometrium of 45 cases with ovarian endometriosis， using normal endometrium of 33 cases as contrast group. The detected results of MMP-7 and CD147 in tissues using image pro-plus 5.0 software， and analyzed the detected Results by SPSS11.5， with choosing IOD as evaluating parameter. Results （1） The positive expressions of MMP-7， and CD147 increased gradually from normal endometrium to eutopic endometrium and to ectopic endometrium. There were significant statistical differences of IOD between eutopic endometrium and normal endometrium， between eutopic endometrium and ectopic endometrium， and between ectopic endometrium and normal endometrium， respectively. （2） The expressions of CD147 and MMP-7 in ovarian endometriosis were positively correlated significantly. Conclusion The expressions of MMP-7 and CD147 may play key roles in occurrence of endometriosis.

[Key words] Ovarian endometriosis; MMP-7; CD147

具有活性的子宮內膜組織出現在子宮內膜以外部位時稱為子宮內膜異位癥（endometriosis，EMT）。卵巢子宮內膜異位囊腫，俗稱巧克力囊腫，是最常見的子宮內膜異位癥[1]。近年研究發現，惡性腫瘤細胞發生遠處轉移及浸潤，必須黏附異位組織、降解細胞外基質并且突破細胞基底膜。而基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）在腫瘤的發生、發展方面發揮了上述作用。MMP-7是MMP家族中結構最小的成員。岳軍等[2]在食道癌的研究中發現MMP-7表達可代表腫瘤的浸潤特征，其表達增高可促進腫瘤進展。CD147又稱為細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），作為細胞外基質金屬蛋白酶刺激物，在腫瘤浸潤、轉移過程中起重要作用[3]。因此，CD147可能在EMT的發病中具有重要作用。本文探討MMP-7及CD147在巧囊中的表達及意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源

實驗組及對照組組織蠟塊均取自寧夏醫科大學附屬醫院病理科。2006年1月～2009年1月因巧克力囊腫切除子宮患者45例，取巧克力囊腫異位內膜及在位內膜標本蠟塊，患者年齡24～48歲，平均38歲。對照組為同期在該院因不孕癥（排除器質性疾患及子宮內膜異位癥）行診刮患者的正常子宮內膜33例，患者年齡25～46歲，平均34歲。實驗組與對照組患者年齡無統計學差異。所有患者術前均未經內分泌藥物及子宮內膜異位癥藥物治療。

1.2 實驗材料

鼠抗人單克隆抗體MMP-7、CD147免疫組化試劑盒及DAB試劑盒均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3 實驗方法

組織標本蠟塊脫蠟、水化；PBS沖洗3次，每次3min；應用0.3% H2O2封閉內源性過氧化物酶10min；PBS沖洗3次，每次3min；加鼠抗人MMP-7/CD147單克隆抗體，室溫下孵育2h或4℃冰箱過夜；PBS沖洗3次，每次3min；加生物素標記的羊抗鼠IgG，室溫下孵育20min；PBS沖洗3次，每次3min；加鏈霉素生物素蛋白30min；PBS沖洗3次，每次3min；加DAB顯色液；蘇木精復染核8min；梯度乙醇脫水；二甲苯透明、中性樹膠封片。每次實驗重復3次。

1.4#8195;結果判定[4]

在高倍鏡下觀察，根據著色面積和著色強度進行綜合評分：①著色面積：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；②著色強度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。以上兩項結果相加，＜2分為（-），2～3分為（+），4～5分為（++），6～7分為（+++）。陽性對照片由試劑公司提供，陰性對照采用PBS代替一抗。

1.5 統計學處理

采用SPSS10.0軟件進行等級秩相關Spearman分析和秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MMP-7在巧囊異位內膜、在位內膜及正常內膜中的表達

見圖1及表1。

注：*VS**，Z＝2.905，P＞0.05；*VS***，Z＝6.109，P＜0.05；**VS***，Z＝5.643，P＜0.05

2.2#8195;CD147在巧囊異位內膜、在位膜及正常內膜中的表達

見圖2及表2。

注：*VS**，Z＝1.692，P＞0.05；*VS***，Z＝6.377，P＜0.05；**VS***，Z＝5.887，P＜0.05

2.3 CD147與MMP-7在巧克力囊腫異位內膜中表達的相關性

經繪制散點圖，有直線相關趨勢，故進行相關性分析。經Spearman相關分析表明，MMP-7與CD147在巧克力囊腫中的表達呈正相關，差異有統計學意義（r＝0.822，P＝0.000）。

3 討論

EMT是生育期婦女常見病。據流行病學研究表明，EMT發病率逐年增加，已達生育年齡婦女的15%～28%，而手術及藥物治療效果均不滿意，術后復發率高達20%～40%[5]，是一種嚴重影響婦女健康及生活質量的疾病，也是目前困擾患者和婦科醫師的難題之一。

1927年Sampson等提出了經血逆流學說，認為EMT形成是子宮內膜隨經血逆流至腹腔種植而導致EMT。但此學說無法解釋80%～90%的婦女有經血逆流，但只有20%左右的婦女罹患EMT。說明經血逆流只是誘因，而內異癥患者內膜與非內異癥患者內膜相比，具有類似惡性腫瘤特性的細胞侵蝕轉移能力，才是本病的發病關鍵。這就是“在位內膜決定論”的新觀點[6]。依此觀點，異位內膜擴散必須突破細胞外基質（ECM）屏障，從而使異位內膜組織細胞向周圍組織浸潤，促進異位內膜侵襲和轉移，導致EMT的形成[7]。可見降解細胞外基質是子宮內膜異位癥的形成過程中的關鍵步驟。

3.1 MMP-7與卵巢子宮內膜異位癥發病關系

MMP-7是MMPs家族中結構最小的成員，是一種分泌型的基質金屬蛋白酶，具有破壞細胞基底膜及促血管生成作用[8]。國內外多位學者研究發現MMP-7與腫瘤的浸潤特性密切相關。其機制是MMP-7可通過直接破壞基底膜和腫瘤基質浸潤周圍組織而呈侵襲性生長；腫瘤細胞可能與腫瘤周圍脈管細胞相互作用，使脈管細胞表達MMP-7而促進腫瘤細胞侵入動脈、靜脈、淋巴管。可見MMP-7是腫瘤的浸潤和遠處轉移的一個重要指標。

在本研究中，MMP-7陽性表達位置在胞漿。MMP-7在33例正常內膜中表達低于在45例在位內膜中的表達，而二者又低于其在45例異位子宮內膜中的表達，差異均有顯著性。這一結果提示MMP-7與EMT的發病有關。MMP-7在EMT的發病中，可能起到了類似惡性腫瘤向周圍組織浸潤生長的作用，并通過侵入動脈、靜脈、淋巴管而向遠處轉移，使得異位內膜得以在周圍浸潤生長并向遠處轉移。MMP-7在正常內膜與在位內膜的表達具有顯著性差異，在分泌期在位內膜中的表達與增生期在位內膜中的表達具有顯著性差異，進一步佐證了“在位內膜決定論”。

3.2 CD147與卵巢子宮內膜異位癥發病關系

CD147已被發現在人腫瘤細胞、外周血細胞、血管內皮細胞的表面有較多表達。研究發現[3]，CD147在腫瘤的浸潤、轉移過程中，不僅通過促進腫瘤組織細胞與細胞、細胞與基質的黏附而發揮作用，還通過誘導腫瘤細胞釋放MMPs，加速BM和ECM的降解，從而發揮MMPs上游分子的作用。

本實驗結果表明，CD147在正常子宮內膜中的表達最低，低于其在巧克力囊腫在位內膜及異位內膜中的表達。在位內膜及正常內膜相比差異有顯著性。以上結果表明EMT患者在位內膜與正常內膜是有差異的。這種差異可以解釋80%的女性有經血逆流，但僅有約20%的女性患有EMT的現象，符合“在位內膜決定論”的觀點。CD147在異位內膜中的表達程度高于其在巧克力囊腫在位內膜及正常內膜中的表達，且均有顯著性差異，表明CD147與EMT的發病具有相關性。

3.3 MMP-7與CD147在巧克力囊腫中表達的相關性及意義

本研究通過對MMP-7及CD147在巧克力囊腫的表達進行相關性分析，發現二者呈高度正相關。這一結果證實CD147在EMT發病過程中，與其在惡性腫瘤中的作用相同，除其本身作用外，還促進異位內膜組織產生MMPs，進一步促進EMT的發生、發展。

綜上所述，EMT的浸潤和轉移是一個復雜的多階段過程，具有侵蝕活性的內膜細胞通過降解BM及ECM而發生浸潤和轉移，而BM和ECM的降解取決于MMPs的作用。而CD147作為黏附分子及MMPs的上游分子，在EMT發病中亦發揮了重要作用。目前診斷EMT主要靠臨床癥狀及體征，尚無良好的實驗室檢查。倘若將MMPs作為一種輔助的檢測手段，通過檢測疑似EMT患者子宮內膜中MMPs的表達，結合臨床，將提高EMT及AM的診斷準確率。

[參考文獻]

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[2] 岳軍，王松陽. 基質金屬蛋白酶-7在食管癌組織中的表達及其意義[J]. 新鄉醫學院學報，2006，23（1）：27-29.

[3] Ishibashi Y，Matsumoto T，Niwa M，et al. CD147 and matrix metalloproteinase-2 protein expression as significant prognostic factors in esophageal squamous cell carcinoma[J]. Cancer，2004，101（9）：1994-2000.

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（收稿日期：2011-05-23）