失血性休克及腸系膜上靜脈阻斷對(duì)兔小腸黏膜結(jié)構(gòu)和屏障功能的影響

[摘要] 目的 本實(shí)驗(yàn)觀察失血性休克、靜脈阻斷及開(kāi)放后缺血-再灌注多重?fù)p傷對(duì)小腸黏膜結(jié)構(gòu)和屏障功能的影響。方法 日本大白兔20只隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，在各個(gè)時(shí)間段取腸系膜靜脈血檢測(cè)血漿內(nèi)毒素及丙二醛水平，取末端回腸檢測(cè)小腸黏膜厚度和絨毛高度。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組在休克1h后和再灌注1h后血漿內(nèi)毒素及丙二醛水平均明顯升高（P＜0.01）；實(shí)驗(yàn)組小腸黏膜厚度和絨毛高度明顯下降（P＜0.01）。結(jié)論 在經(jīng)歷失血性休克、腸系膜上靜脈阻斷及再灌注損傷多重打擊下，小腸黏膜結(jié)構(gòu)和屏障功能遭受了嚴(yán)重破壞，進(jìn)而引起細(xì)菌移位和內(nèi)毒素血癥，對(duì)機(jī)體造成不利影響。

[關(guān)鍵詞] 失血性休克；再灌注損傷；腸系膜上靜脈

[中圖分類(lèi)號(hào)] R574.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2011）23-16-02

The Change of Rabbit Intestinal Mucosa Structure and Barrier Function Endured Haemorrhagic Shock and Superior Mesenteric Vein Blocking

TAO Lijun1 FANG Jun1 WU Zuozhu1 CHEN Bicheng2

1.The No.1 Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Wenzhou 325000，China；2. Experimental Animal Center，Wenzhou Medical College，Wenzhou 325000，China

[Abstract] Objective To study the change of rabbit intestinal mucosa structure and barrier function endured multiple damage by haemorrhagic shock，superior mesenteric vein blocking and ischemia reperfusion. Methods Twenty rabbits were divided randomly into two groups：normal control group and experimental group. Plasma endotoxin and MDA of superior mesenteric vein were detected before shock，one hour after shock and one hour following resuscitation，terminal ileum were taken to determinate ileum mucosa thickness and villus height. Results Plasma endotoxin and MDA levels of experimental group were elevated markedly（P＜0.01），ileum mucosa thickness and villus height were declined markedly compared with normal control group（P＜0.01）. Conclusion The intestinal mucosa structure and barrier function are heavily damaged by haemorrhagic shock，superior mesenteric vein blocking and ischemia reperfusion，then lead to bacteria translocation and endotoxemia，bring about organism harmful influence.

[Key words] Haemorrhagic shock；Ischemia reperfusion；Superior mesenteric vein

隨著交通事故增多，臨床上腸系膜撕裂傷致腸系膜上靜脈破裂合并失血性休克病例日漸增多，手術(shù)中需阻斷腸系膜上靜脈進(jìn)行修補(bǔ)，因此小腸黏膜需承受失血性休克低灌注、靜脈阻斷無(wú)血流及開(kāi)放后缺血-再灌注三重?fù)p傷。本實(shí)驗(yàn)采用失血性休克動(dòng)物模型模擬臨床腸系膜上靜脈破裂致失血性休克病例，觀察失血性休克、靜脈阻斷及開(kāi)放后缺血-再灌注多重?fù)p傷對(duì)小腸黏膜結(jié)構(gòu)和屏障功能的影響。

1 材料與方法

1.1 造模與分組

日本大白兔20只，體重1.5～2.5kg，雌雄不限。術(shù)前禁食12h，自由飲水。戊巴比妥鈉（3%，30mg/kg）耳緣靜脈注射麻醉，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，插管接多功能監(jiān)護(hù)儀監(jiān)測(cè)動(dòng)脈壓；分離右側(cè)頸外靜脈用于輸液及給藥，穩(wěn)定10min，隨機(jī)分為兩組：對(duì)照組：直接開(kāi)腹取小腸標(biāo)本，分離腸系膜上靜脈取血液標(biāo)本，作正常對(duì)照；實(shí)驗(yàn)組：經(jīng)左頸總動(dòng)脈放血使平均動(dòng)脈壓在10min內(nèi)降至50mmHg，建立休克模型，并通過(guò)動(dòng)脈放血和靜脈回輸，維持平均動(dòng)脈壓在50mmHg水平，休克1h后開(kāi)腹，開(kāi)腹后取腸系膜上靜脈血樣，并阻斷腸系膜上靜脈，同時(shí)開(kāi)始回輸自體血及等量生理鹽水，糾正休克，5min后開(kāi)放阻斷，1h后再次取腸系膜上靜脈血樣，并取小腸樣本。

1.2 樣品采集和測(cè)定

1.2.1 小腸病理學(xué)檢查 距回盲部2cm以上取回腸5cm，常規(guī)固定，石蠟包埋，切片（3～4μm），HE染色。采用奧林巴斯BX41圖像采集分析系統(tǒng)，觀察3張非連續(xù)性切片，每張切片在圖像分析儀上測(cè)定10個(gè)絨毛腸黏膜厚度、腸絨毛高度。其均數(shù)作為測(cè)定數(shù)據(jù)。

1.2.2 丙二醛測(cè)定 實(shí)驗(yàn)組分別于休克1h后、再灌注1h后取腸系膜上靜脈血2mL，3000r/min離心15min，取血清低溫保存?zhèn)錅y(cè)；對(duì)照組于建立頸部插管10min后即開(kāi)腹取血。試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所，測(cè)定時(shí)嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明操作。

1.2.3 血漿內(nèi)毒素測(cè)定 采用偶氮鱟試劑基質(zhì)顯色法測(cè)定。實(shí)驗(yàn)組分別于休克1h后、再灌注1h后取腸系膜上靜脈血1mL加抗凝劑1mL，以1000 r/min離心10min，取血漿保存于超低溫冰箱；對(duì)照組于建立頸部插管10min后即開(kāi)腹取腸系膜上靜脈血作對(duì)照，按鱟試劑試劑盒（廈門(mén)鱟試劑廠提供）使用說(shuō)明測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用（χ±s）表示。采用SPSS10.0軟件包，兩組間差異的比較采用兩樣本均數(shù)差別的顯著性檢驗(yàn)（t檢驗(yàn)），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小腸黏膜厚度和絨毛高度

對(duì)照組絨毛排列有序，黏膜完整，無(wú)絨毛脫落壞死，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組小腸黏膜厚度及絨毛高度明顯下降（P＜0.01），絨毛間距變寬，部分上皮細(xì)胞壞死脫落，部分頂端絨毛脫落。見(jiàn)表1、圖1、2。

圖1 對(duì)照組小腸形態(tài) 圖2 實(shí)驗(yàn)組小腸形態(tài)

2.2 MDA及內(nèi)毒素測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組休克1h后血漿MDA及內(nèi)毒素水平較對(duì)照組明顯升高（P＜0.01），經(jīng)腸系膜上靜脈阻斷、再灌注1h等損傷后血漿MDA及內(nèi)毒素水平較休克1h時(shí)再次明顯升高（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

注：與對(duì)照組比較，1t=19.80，P＜0.01；2t=5.75，P＜0.01；與休克1h后比較：3t=14.80，P＜0.01；4t=10.12，P＜0.01

3 討論

近年來(lái)，隨著交通事故增多，臨床上腸系膜撕裂傷致腸系膜上靜脈破裂合并失血性休克病例日漸增多，手術(shù)中需阻斷腸系膜上靜脈進(jìn)行修補(bǔ)，因此小腸黏膜需承受失血性休克低灌注、靜脈阻斷無(wú)血流及開(kāi)放后缺血-再灌注三重?fù)p傷。

腸系膜上靜脈破裂后，腹腔內(nèi)出血往往非常嚴(yán)重，入院時(shí)血壓常測(cè)不出，而腸道對(duì)失血非常敏感，失血性休克發(fā)生時(shí)，隨著血壓下降，血流不成比例地減少和重新分配，最早發(fā)生腸道血流量的顯著下降[1]，加之腸道微循環(huán)結(jié)構(gòu)的特殊性及腸黏膜的高代謝、高氧需求，使腸黏膜對(duì)缺血缺氧較為敏感，易引起腸黏膜細(xì)胞壞死、凋亡脫落，細(xì)胞間隙增寬，從而引起腸道通透性增加、黏膜屏障功能削弱，出現(xiàn)細(xì)菌移位、內(nèi)毒素血癥[2]，最終發(fā)生全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能不全[3]。本組研究中休克1h后血漿內(nèi)毒素及丙二醛含量明顯升高，說(shuō)明腸道黏膜結(jié)構(gòu)和屏障功能已受到明顯破壞，進(jìn)而導(dǎo)致了細(xì)菌移位和內(nèi)毒素血癥，并對(duì)機(jī)體造成進(jìn)一步的影響。

靜脈阻斷后隨著靜脈壓力的升高，小腸血供完全停止，腸道黏膜缺血缺氧進(jìn)一步加劇，而血管里內(nèi)毒素和代謝產(chǎn)物堆積導(dǎo)致和加重局部腸道炎癥反應(yīng)，加重小腸黏膜的損害；另一方面小腸腸腔內(nèi)壓力也相應(yīng)增高；趙衛(wèi)川等[4]發(fā)現(xiàn)隨著腸腔內(nèi)壓力增高，內(nèi)毒素吸收成倍增多。內(nèi)毒素本身也可引起腸黏膜發(fā)生一系列病理改變：黏膜下水腫、腸絨毛頂部細(xì)胞壞死、腸通透性增加，從而破壞腸黏膜屏障功能，形成惡性循環(huán)。

靜脈開(kāi)放后再灌注，腸黏膜血管產(chǎn)生大量自由基，伴隨中性粒細(xì)胞在局部聚集，激活的中性粒細(xì)胞釋放大量氧自由基與蛋白酶參與損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，造成血管通透性增加，上皮細(xì)胞壞死脫落，黏膜屏障功能受損，從而加重腸內(nèi)細(xì)菌移位和內(nèi)毒素血癥，加重全身?yè)p害[5]。本組研究中發(fā)現(xiàn)在休克糾正、靜脈開(kāi)放1h后，血內(nèi)毒素及丙二醛水平仍有進(jìn)一步上升，說(shuō)明缺血-再灌注損傷進(jìn)一步加重小腸黏膜結(jié)構(gòu)及屏障破壞。

因此，在治療過(guò)程中，我們應(yīng)盡量縮短患者術(shù)前失血性休克時(shí)間，簡(jiǎn)化術(shù)前準(zhǔn)備流程，盡早手術(shù)，術(shù)中應(yīng)結(jié)合上腹部受傷史、受傷部位、出血程度和部位等，盡早探明出血原因，并盡量縮短腸系膜上靜脈阻斷時(shí)間，術(shù)后采用對(duì)缺血-再灌注保護(hù)性藥物，從各個(gè)環(huán)節(jié)減少對(duì)小腸結(jié)構(gòu)和屏障功能的破壞，從而減輕細(xì)菌移位和內(nèi)毒素血癥，減少和避免全身性炎性反應(yīng)綜合征及多系統(tǒng)器官功能衰竭的發(fā)生。

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（收稿日期：2011-05-31）