橄欖基因組AFLP擴增體系的優(yōu)化

摘要：為建立適于橄欖研究用的AFLP技術體系，以10個橄欖品種為材料，對其基因組DNA從酶切、連接、預擴增和選擇性擴增等方面進行條件優(yōu)化。研究結果表明，DNA模板用量為500 ng，酶切體系中限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ和MseⅠ各加入3 U，37 ℃水浴4 h；連接體系中T4 DNA連接酶加入1.5 U，16 ℃連接6 h；并利用優(yōu)化后的預擴增體系和選擇性擴增體系篩選出6對適合于橄欖AFLP分析的引物組合：E/AAC-M/CAT、E/AAC-M/CTT、E/ACA-M/CAA、E/AGG-M/CAA、E/ACC-M/CAA、E/ACT-M/CAT。采用該體系得到的電泳條帶清晰可靠、多態(tài)性好，可用于對橄欖遺傳多樣性的研究。