黃龍病誘導下椪柑SSH文庫的構建與分析

摘要： 以實生苗和平椪柑（Citrus reticulate Blanco）為材料，采用抑制性差減雜交技術，分別以感染黃龍病與未感染黃龍病的椪柑葉片為檢測方（tester）和驅動方（driver），成功構建了黃龍病誘導的差減cDNA文庫。挑選了100個陽性克隆并成功測序得到71條EST，經NCBI基因庫同源性比對，有41條非冗余高質量EST序列找到了同源序列，另有10條非冗余未搜索到同源序列。同源序列的基因涉及抗逆防御、運輸、能量代謝、光合作用、蛋白代謝、信號轉導、抗氧化等代謝途徑和生理生化過程。值得注意的是文庫中有由病原引起的韌皮部相關的凝集素蛋白的前體積累。挑選了2條進行Q-PCR定量分析，結果表明感病1周表達量增強不大，2周后tester的表達量明顯高于driver，說明材料感病早期這些基因表達增強。