一種簡(jiǎn)易檢測(cè)牛奶中青霉素殘留的方法

摘要：采用微生物法建立了一種簡(jiǎn)易檢測(cè)牛奶中青霉素殘留的方法。結(jié)果顯示該法對(duì)樣品中青霉素殘留的檢測(cè)限為０．８ＩＵ／ｍＬ。該法可以檢測(cè)出牛奶中的青霉素殘留，對(duì)基層奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)檢測(cè)青霉素殘留具有重要的意義。

關(guān)鍵詞：青霉素；藥物殘留；檢測(cè)；牛奶

中圖分類號(hào)：ＴＳ２５２．７文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：１００７－２７３Ｘ（２０12）06-0011-01

長(zhǎng)期使用抗生素會(huì)造成畜禽免疫力下降，引起畜禽內(nèi)源性感染和殘留，而人類食用抗生素超量的畜產(chǎn)品會(huì)產(chǎn)生抗藥性，或因抗生素大量蓄積而對(duì)人體產(chǎn)生毒害。近年來(lái)，牛奶中的抗生素殘留成為人們?nèi)找骊P(guān)注的話題。目前抗生素的檢測(cè)方法按照檢測(cè)原理和使用的儀器可分微生物法、免疫法、理化儀器法等３類［１－４］。其中微生物法由于其簡(jiǎn)單快速、易于普及，在基層養(yǎng)殖場(chǎng)具有極大的應(yīng)用前景。本試驗(yàn)采應(yīng)用微生物法建立了一種快速檢測(cè)牛奶中青霉素殘留的方法。

１材料與方法

１．１材料

金黃色葡萄球菌由本中心保存。牛奶采自河北省保定市某牛場(chǎng)。青霉素標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自上海碩光科技有限公司，腦浸液肉湯培養(yǎng)基（ＢＨＩ）購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司，牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉等購(gòu)自上海希美生物科技有限公司，其他生化試劑均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

１．２方法

１．２．１菌種活化將金黃色葡萄球菌菌種從冰箱取出，劃線接種到固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，３７ ℃培養(yǎng)２４ ｈ，然后接種到滅菌的ＢＨＩ培養(yǎng)基中，３７ ℃培養(yǎng)２４ ｈ，備用。

１．２．２青霉素標(biāo)準(zhǔn)液的配置和濾紙片的制備用蒸餾水配置青霉素標(biāo)準(zhǔn)液，使其含量分別為１．２、１．０、０．８、０．６、０．４、０．２ ＩＵ／ｍＬ。將干燥的滅菌濾紙片分別浸入上述青霉素溶液中，３０ ｍｉｎ后取出，置干燥箱中干燥，取出后分裝到不同的玻璃瓶中備用。

１．２．３青霉素檢測(cè)方法的建立取活化的金黃色葡萄球菌菌液５０ μＬ均勻涂布到固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面，倒置培養(yǎng)皿１０ ｍｉｎ，使表面水分干燥。取上述制作好的青霉素濾紙片貼到固體培養(yǎng)基表面，做好標(biāo)記，在平皿中間貼一個(gè)空白濾紙片做對(duì)照。３７ ℃培養(yǎng)２４ ｈ，用直尺測(cè)量抑菌圈大小，記錄結(jié)果。

１．２．４牛奶中青霉素殘留的檢測(cè)牛奶直接采自牛場(chǎng)，其中病牛３頭，健康牛３頭。將濾紙片用上述方法制作成牛奶浸液濾紙片，貼到涂布菌液的平板上，３７℃培養(yǎng)２４ ｈ后觀察結(jié)果。

２結(jié)果

本試驗(yàn)采用金黃色葡萄球菌作為工作菌，首先用青霉素標(biāo)準(zhǔn)品探討了該方法的檢測(cè)限。結(jié)果表明，隨著青霉素含量的增加，其抑菌圈逐漸增大（圖１Ａ）。但在０．２～０．６ ＩＵ／ｍＬ范圍內(nèi)觀察不到抑菌圈，０．８ ＩＵ／ｍＬ開(kāi)始出現(xiàn)明顯的抑菌圈，說(shuō)明該方法的檢測(cè)限為０．８ ＩＵ／ｍＬ。

對(duì)牛場(chǎng)采集的牛奶進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)病牛牛奶均可檢測(cè)到青霉素殘留（圖１Ｂ）。這可能是因?yàn)榕?chǎng)正在對(duì)患病牛進(jìn)行治療，青霉素殘留在牛奶中所致。對(duì)健康牛奶檢測(cè)未觀察到抑菌圈。研究結(jié)果表明該方法可用來(lái)檢測(cè)牛奶中的青霉素殘留。

３討論

目前檢測(cè)抗生素殘留的方法很多，如ＴＴＣ、ＥＬＩＳＡ、ＨＰＬＣ法等［５，６］。對(duì)藥物殘留的檢測(cè)限也越來(lái)越低。但是對(duì)于廣大的基層奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)來(lái)說(shuō)，這樣的檢測(cè)方法大多數(shù)都需要特殊的儀器設(shè)備，尤其對(duì)于小規(guī)模奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)，購(gòu)買如此昂貴的儀器并不是理想的選擇［７］。所以微生物法在廣大基層奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)具有極大的應(yīng)用前景。本試驗(yàn)所建立的抗生素檢測(cè)方法采用金黃色葡萄球菌作為工作菌，探索了對(duì)青霉素檢測(cè)的范圍，表明可以檢測(cè)到０．８ ＩＵ／ｍＬ的青霉素標(biāo)準(zhǔn)品。經(jīng)過(guò)對(duì)奶牛場(chǎng)的牛奶樣品進(jìn)行檢測(cè)，表明該方法具有可行性，可以檢測(cè)出牛奶中的青霉素殘留，在廣大基層奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

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