酵母樣真菌的濃度對UF－1000i尿沉渣分析儀檢測結(jié)果的影響

羅小兵，尤舉銘（.廣州市番禺區(qū)第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 5470；.陜西省漢中市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 73000）

UF－1000i尿沉渣分析儀是目前常用于尿液有形成分篩查的自動化分析儀，該儀器具有檢測快速、敏感度高、精密度好等優(yōu)點(diǎn)。但有文獻(xiàn)報(bào)道，大量酵母菌可引起儀器紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的假性增高［1］。為準(zhǔn)確了解該儀器對酵母樣真菌的檢出濃度與產(chǎn)生干擾濃度以及兩者間的關(guān)系，作者進(jìn)行了相關(guān)分析，以期為儀器的全面評價和結(jié)果正確判斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 UF－1000i尿沉渣分析儀及配套試劑，質(zhì)控物均購自日本Sysmex株式會社。10μL定量接種環(huán)購自法國生物梅里埃公司。

1.2 方法

1.2.1 菌懸液制備及實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)分為生理鹽水（對照）組、白色念珠菌懸液組、含血細(xì)胞生理鹽水組（血細(xì)胞對照組）和含血細(xì)胞白色念珠菌菌懸液組。白色念珠菌來自本科細(xì)菌室（分離自尿液標(biāo)本），用無菌生理鹽水將其制成103、104、105、106、107／mL不同濃度菌懸液組，每個濃度設(shè)3個平行樣本，濃度確定采用顯微鏡計(jì)數(shù)結(jié)合平板計(jì)數(shù)法。然后再取一定體積的5種菌懸液分別加入已知濃度的紅細(xì)胞（RBC）和白細(xì)胞（WBC），制成含血細(xì)胞的菌懸液組。

1.2.2 檢測方法 UF－1000i尿沉渣分析儀按儀器操作規(guī)程進(jìn)行操作，先測定質(zhì)控品，質(zhì)控合格后再進(jìn)行樣本測定。每個濃度的菌懸液及生理鹽水對照組均交替平行測定5次后，再同樣方法測定含血細(xì)胞的菌懸液及生理鹽水（血細(xì)胞對照組），所有測定于3 h之內(nèi)完成，然后記錄、統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用于分析統(tǒng)計(jì)的軟件為SigmaState，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示，統(tǒng)計(jì)分析采用單因素方差分析（ANOVA），實(shí)驗(yàn)組與對照組的比較采用最小顯著差法（LSD），實(shí)驗(yàn)組間的比較采用q檢驗(yàn)（Newman－keuls test），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同濃度菌懸液時紅細(xì)胞、白細(xì)胞和酵母菌的儀器計(jì)數(shù)結(jié)果（表1）。

2.2 不同濃度菌懸液中加入定量的血細(xì)胞后3項(xiàng)指標(biāo)的儀器計(jì)數(shù)結(jié)果（表2）。由表1、表2的結(jié)果可以看出：當(dāng)白色念珠菌的菌懸液濃度小于105／mL時，儀器對其不能檢出，亦沒有引起紅細(xì)胞和白細(xì)胞計(jì)數(shù)的差異。但當(dāng)濃度達(dá)到105／mL時，在其被檢出的同時也造成了紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的明顯差異（P＜0.05），而且這種差異程度隨著濃度的增加而增加。當(dāng)其濃度達(dá)到107／mL，白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果也明顯高于含血細(xì)胞生理鹽水組（P＜0.05）。

表1 不同濃度菌懸液3項(xiàng)指標(biāo)的儀器測定結(jié)果（，n＝15，個／微升）

表1 不同濃度菌懸液3項(xiàng)指標(biāo)的儀器測定結(jié)果（，n＝15，個／微升）

注：與生理鹽水組比較，a P＞0.05，b P＜0.05。

0 2±1 0 103／mL組 0 2±2a 0 104／mL組 0 3±2a 0 105／mL組 34±4b 39±6b 2±2ab 106／mL組 256±36b 407±49b 3±2ab 107／mL組 2 953±87b 3 872±92b 16±5b P＜0.01 ＜0.01 ＜組別 酵母菌 紅細(xì)胞 白細(xì)胞生理鹽水組0.01

表2 含血細(xì)胞菌懸液3項(xiàng)指標(biāo)的儀器測定結(jié)果（，n＝15，個／微升）

表2 含血細(xì)胞菌懸液3項(xiàng)指標(biāo)的儀器測定結(jié)果（，n＝15，個／微升）

注：與血細(xì)胞對照組比較，a P＞0.05；與血細(xì)胞對照組比較，b P＜0.05。

22±3 8±3 103／mL組 0 23±5a 9±3a 104／mL組 0 25±6a 10±4a 105／mL組 48±10b 45±8b 9±5a 106／mL組 387±28b 307±59b 11±3a 107／mL組 3 765±71b 2 102±112b 28±6b P＜0.01 ＜0.01 ＜組別 酵母菌 紅細(xì)胞 白細(xì)胞含血細(xì)胞生理鹽水組 0 0.01

3 討 論

UF－1000i全自動尿沉渣分析儀采用流式細(xì)胞及電阻抗的原理，通過檢測經(jīng)熒光染色后的單個細(xì)胞的熒光強(qiáng)度、散射光強(qiáng)度及電阻抗的大小來識別尿內(nèi)細(xì)胞、管型、結(jié)晶等各種有形成分。近年來，關(guān)于酵母樣真菌引起其紅細(xì)胞計(jì)數(shù)假性增高的報(bào)道日漸增多［2-4］。這些報(bào)道較好分析了酵母樣真菌干擾細(xì)胞計(jì)數(shù)的大體情況和導(dǎo)致干擾的原因，但都沒有指出產(chǎn)生干擾的具體濃度和相應(yīng)的檢出濃度，以及二者存在何種關(guān)系。基于此點(diǎn)，作者用臨床最常見的酵母樣真菌（白色念珠菌）進(jìn)行了儀器的檢出及抗干擾濃度分析，以期為儀器的合理、客觀評價和臨床結(jié)果判斷提供一定依據(jù)。

結(jié)果顯示，UF－1000i尿沉渣分析儀檢測白色念珠菌時，檢出濃度和產(chǎn)生干擾濃度均是105／mL，說明儀器檢測白色念珠菌可能存在“只要檢出即有干擾”現(xiàn)象。因此，使用該儀器檢測到酵母菌時，應(yīng)當(dāng)考慮到紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的假性增高。同時，在檢測其他體液標(biāo)本比如腦脊液中酵母樣真菌（如新型隱球菌）時，還應(yīng)注意檢出的濃度下限，當(dāng)檢出結(jié)果為陰性時不能排除感染。結(jié)果還顯示，紅細(xì)胞的假性增高隨著白色念珠菌的濃度增加而加劇，這與有關(guān)報(bào)道一致［5］。一些報(bào)道指出，儀器的部分熒光參數(shù)有助于鑒別紅細(xì)胞與細(xì)菌或酵母菌［6-7］。作者對此也進(jìn)行了初步試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)酵母菌存在時，儀器的前向散射光強(qiáng)度（S－FSC）、側(cè)向散射光強(qiáng)度（S－SSC）及熒光強(qiáng)度（S－FLH 和 SFLL）均明顯高于單純血細(xì)胞組（P＜0.01，數(shù)據(jù)未列出）。應(yīng)當(dāng)注意的是，本研究樣本量有限，標(biāo)本也與臨床標(biāo)本有所不同，還需要更多的臨床數(shù)據(jù)來支持與驗(yàn)證。

此外，還發(fā)現(xiàn)當(dāng)白色念珠菌的濃度達(dá)到107／mL時，亦會引起儀器白細(xì)胞計(jì)數(shù)的假性增高。這可能與白色念珠菌濃度較大時，因其本身含有的大量細(xì)胞核及孢子等物質(zhì)，導(dǎo)致熒光信號與白細(xì)胞重疊或類似有關(guān)［5］。這也提示，儀器測定白細(xì)胞時還應(yīng)鑒別大量酵母菌的干擾。作者發(fā)現(xiàn)白色念珠菌的菌體大小和連體孢子的數(shù)量及大小、菌體內(nèi)是否有細(xì)胞核等都會影響儀器的3項(xiàng)指標(biāo)的計(jì)數(shù)結(jié)果。通常情況下，菌體較小、連體孢子多及無細(xì)胞核時更易干擾紅細(xì)胞計(jì)數(shù)；反之，對白細(xì)胞的干擾作用有所增加。還有，由于作者使用的溶劑不是尿液，也可能對計(jì)數(shù)結(jié)果造成一定影響，但作者認(rèn)為不會影響到結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，UF－1000i尿沉渣分析儀檢測酵母樣真菌時，應(yīng)當(dāng)注意“檢出即有干擾”的現(xiàn)象，當(dāng)顯示檢出酵母菌時，應(yīng)考慮紅細(xì)胞和白細(xì)胞存在假性增高。

［1］馬鄭輝.UF－100全自動尿沉渣分析儀各檢測項(xiàng)目假陽性結(jié)果的分析［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2004，22（1）：67.

［2］劉景瑤，孟冬梅，趙冬梅，等.Sysmex UF－100全自動尿沉渣分析儀在臨床檢測中的應(yīng)用［J］.中國誤診學(xué)雜志，2009，9（10）：2356－2357.

［3］陳忠，鄒曉月，袁立新.UF－100尿沉渣分析儀和干化學(xué)檢測尿中紅細(xì)胞和白細(xì)胞及管型的干擾因素分析［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2008，12（4）：534－537.

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［5］馬麗，袁漢堯，王小梅.酵母菌對UF－100全自動尿沉渣分析儀紅細(xì)胞檢測結(jié)果的影響［J］.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2001，16（3）：161－162.

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