胃癌組織中OPN、c-Met蛋白的異常表達及其意義*

馬桂芳，蔡紅星，丁鳳云，蘭建云

(1.鹽城衛生職業技術學院，江蘇鹽城 224006；2.江蘇省鹽城市第一人民醫院 224005)

胃癌是嚴重危害人類健康的常見惡性腫瘤之一，中國是胃癌的高發區，每年新發現40萬胃癌患者，占世界胃癌發病人數的42％，病死率居各種癌癥之首。隨著分子生物學發展，人們逐漸對于腫瘤浸潤、轉移過程有了深入的認識，并發現了一些與侵襲轉移相關的基因及基因產物。近年來，國內外研究發現骨橋蛋白(OPN)和肝細胞生長因子受體(c-Met)可作為反映腫瘤的生物學行為的參考指標，在多種惡性腫瘤的侵襲、轉移過程中都發揮著重要作用[1-7]。本研究采用免疫組織化學法檢測胃癌組織中OPN、c-Met蛋白表達情況，探討它們與胃癌的浸潤轉移之間的相關性，現報道如下。

1 材料與方法

1.1材料 收集鹽城市第一人民醫院病理科2011年1～12月手術切除并經病理證實的胃癌石蠟標本69例，另取同期胃黏膜不典型增生組織標本15例及因胃良性病變行部分胃切除的正常胃黏膜標本10例作對照。所有患者術前均未接受放療、化療。

1.2主要試劑 鼠抗人骨橋蛋白單克隆抗體即用型(編號ZM-0174)、兔抗人c-Met多克隆抗體即用型(ZA-0412)購自北京中杉金橋公司；二抗及DAB顯色液均為福州邁新生物技術公司產品。

1.3方法

1.3.1免疫組化染色方法 采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法(SP)檢測胃癌及正常胃黏膜組織中OPN、c-Met蛋白的表達。將存檔的石蠟塊行4 μm厚切片，常規脫蠟至水，具體操作步驟按說明書進行。用已知的OPN和c-Met陽性胃癌切片染色作陽性對照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對照。

1.3.2結果判定 OPN表達以細胞質呈棕黃色或棕褐色為陽性染色；c-Met的表達以細胞質(少數細胞膜)呈棕黃色或棕褐色為陽性染色。每份標本置高倍鏡下選取5個不同視野，每個視野計數200個腫瘤細胞，由兩位病理醫師進行盲法判讀，計算陽性腫瘤細胞所占的百分數。結果分為4級：未見明顯陽性細胞為“-”；陽性細胞數<25％為“+”；25％～50％為“+ +” ；>50％為“+ + +”。

1.4統計學處理 采用SPSS19.0軟件進行統計分析，病理參數采用χ2檢驗，相關性采用Spearman分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1OPN、c-Met在胃癌和不典型增生、正常胃黏膜組織中的表達 OPN蛋白在胃癌組織中陽性染色主要定位于細胞質，為棕黃色或棕褐色顆粒(封2圖1)。OPN在胃癌組織中的陽性表達率為69.6％(48/69),胃黏膜不典型增生組織40％(6/15)，正常胃黏膜組織20％(2/10)。結果顯示，OPN蛋白在胃癌組織的表達高于胃黏膜不典型增生組織(χ2=4.691，P<0.05)和正常胃黏膜組織(χ2=7.225，P<0.01)。c-Met陽性染色主要定位于細胞質，少數在細胞膜，為棕黃色或棕褐色顆粒(封2圖2)。c-Met在胃癌組織中的陽性表達率為65.2％(45/69),胃黏膜不典型增生組織26.7％(4/15)，正常胃黏膜組織10％(1/10)。結果顯示，c-Met蛋白在胃癌組織的表達顯著高于胃黏膜不典型增生組織(χ2=7.534，P<0.01)和正常胃黏膜組織(χ2=8.796，P<0.01)。

2.2OPN、c-Met表達與腫瘤臨床病理參數的關系 胃癌組織中OPN表達與腫瘤臨床TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移等有相關性(P<0.01)；而與患者年齡、腫瘤大小、腫瘤組織分化等無明顯相關性。c-Met表達與腫瘤的淋巴結轉移、臨床TNM分期等有相關性(P<0.01)；與患者年齡、腫瘤大小、浸潤深度、腫瘤組織分化等無相關性，見表1。

2.3胃癌組織中OPN和c-Met表達的相關性 在48例OPN陽性的胃癌組織中，c-Met陽性者37例(77.1％)，21例OPN陰性胃癌組織中，c-Met陽性者8例(38.1％)(γ=0.352 48,P<0.05)，相關分析表明，胃癌組織中OPN蛋白的表達與c-Met蛋白表達呈正相關。

表1 胃癌OPN與c-Met蛋白表達與臨床病理參數關系(n)

3 討 論

OPN是近年來發現的一種糖磷酸化蛋白，是細胞外基質(ECM)中一種重要的非膠原蛋白。OPN是一種轉移相關蛋白，能夠促進腫瘤組織細胞的生存、增殖和遷移，參與腫瘤組織中毛細血管床的形成，在腫瘤的發展及轉移過程中發揮著重要作用。人OPN基因定位于人染色體4q13，OPN蛋白中的特異精氨酸一甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-AsP，RGD)序列與許多細胞外基質蛋白的黏附序列相同，對OPN的黏附功能起著重要作用。在RGD結構域下游6個氨基酸處有凝血酶裂解位點，凝血酶可把OPN裂解成2個大小相近的片段C端和N端，以暴露整合素和CD44等結合位點。OPN主要是通過與整合素和CD44結合參與腫瘤的發生發展及侵襲和轉移[1],目前許多研究表明OPN在肺癌[2]、肝癌[3]、胃癌[4]、乳腺癌[5]、宮頸癌[6]、卵巢癌[7]等多種腫瘤中呈高水平表達，與本研究的結果相一致。Hotte等[8]通過用癌基因H-ras轉染NIH3T3細胞模型能使其獲得致瘤性,ras表達水平升高的同時OPN分泌增加,使細胞的轉移能力增強;然而轉染OPN反義RNA后,細胞的轉移能力顯著下降，說明OPN和腫瘤的轉移有關。本研究表明，OPN的表達與腫瘤的浸潤深度、TNM分期及淋巴結轉移有關，表明了病情的進展程度,可以作為判斷胃癌患者預后的良好指標。

原癌基因c-Met的編碼產物是肝細胞生長因子(HGF)的細胞膜受體，屬酪氨酸激酶受體，在細胞內信號轉導中發揮重要作用。c-Met位于人類7號染色體長臂(7q31)。HGF與其受體c-Met蛋白相結合，啟動一系列跨膜信號轉導通路，刺激多種類型細胞的增殖、分化、運動及形態發生，對多種組織器官的生長發育具有重要的生理調節作用[9]。異常因素的持續刺激，使HGF/c-Met系統過度激活，細胞過度表達HGF或c-Met時，常常導致細胞發生癌變，通過影響細胞的黏附、ECM的降解、促進腫瘤細胞的運動及腫瘤血管生成等促進腫瘤的浸潤轉移。大量研究表明在人的許多腫瘤組織中有c-Met蛋白過表達，如肺癌[10]、胰腺癌[11]、肝癌[12]、胃癌[13]、卵巢癌[14]等。本研究發現，隨著臨床TNM分期的增加，伴有淋巴結轉移的發生等c-Met在蛋白水平也有逐漸增高的趨勢,提示隨著腫瘤惡性程度的增加，c-Met的表達率也增加，患者的預后也差，與國內外文獻一致。

OPN和c-Met在腫瘤的侵襲轉移中有許多聯系，Bramwell等[15]研究表明，OPN誘導癌細胞遷移依賴于HGF/c-Met途徑的激活。Medico等[16]證實，HGF與c-Met結合后激活Ras、PI-3K、PLC-γ及STAT信號通路，促進OPN生成，并使OPN與CD44結合，促進腫瘤細胞浸潤、轉移。本研究結果發現，胃癌組織中OPN蛋白的表達與c-Met蛋白表達呈正相關，說明二者在腫瘤的發生發展，浸潤轉移中可能存在一定的內在聯系性，并共同促進腫瘤細胞的侵襲轉移。因此OPN和c-Met可作為反映胃癌生物學行為的參考指標，有助于胃癌的預后判斷，并提供腫瘤轉移基因治療的干預靶點。

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