高效液相色譜法測定月餅中3種防腐劑*

金 露 張 妤 虞選柯 郭應建 陸雪嬌 關允詩 黃光榮*

（中國計量學院生命科學學院，杭州 310018）

高效液相色譜法測定月餅中3種防腐劑*

金 露**張 妤 虞選柯 郭應建 陸雪嬌 關允詩 黃光榮***

（中國計量學院生命科學學院，杭州 310018）

利用高效液相色譜法測定5種月餅樣品中的3種常見防腐劑苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的含量。樣品經提取、脫蛋白、膜過濾后，用高效液相色譜進行測定。結果表明，3種防腐劑的測定線性相關性均在0.99以上，檢測線性范圍為10 μg/mL～200 μg/mL。該方法應用于5種月餅中苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的測定結果表明，5種樣品均檢出山梨酸，3種樣品檢出有脫氫乙酸，均未檢出苯甲酸。

高效液相色譜；月餅；防腐劑

月餅是我國人們在中秋節前后普遍消費的一類大眾食品，種類各式各樣，其保質期也各不相同。2011年6月20日起，我國實施新的國家標準《食品安全國家標準——食品添加劑使用標準》，與2007版標準相比，有27類食品添加劑被限制使用，其中包括在月餅中不得使用苯甲酸及傳統抗氧化劑BHA（丁基羥基茴香醚）、BHT（二丁基甲基甲苯）和TBHQ（特丁基對苯二酚）。因此，月餅的保質期相比以前都將會大大縮短。目前，月餅的保質期一般30 d～60 d，有的只有15 d左右。

為防止月餅及餡料不腐敗變質，添加防腐劑是一種有效的方法。防腐劑雖可抑制食品中微生物的繁殖，但添加過量，不僅能破壞VB1，還可能使鈣形成不溶物，影響人體對鈣的吸收；另外，防腐劑對人胃腸有刺激作用，過量食用還可能引發癌癥。苯甲酸在酸性條件下抑菌范圍廣、價格低廉，在以前的食品防腐中被廣泛應用，但是苯甲酸的毒性遠遠大于山梨酸；山梨酸及其鉀鹽的毒性相對較小，抗菌力強，是月餅中最常使用的防腐劑之一；脫氫乙酸具有較強的抑制細菌、霉菌及酵母菌的作用，尤其對霉菌的抑制作用很強，是一種廣譜、高效的防霉、防腐劑，同時其脂溶性強、熱穩定性極高，尤其適用于熱加工食品。現行國家標準GB2760-2011《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》規定月餅防腐劑中禁用苯甲酸，山梨酸及其鉀鹽最大使用量1.0 g/kg（以山梨酸計），脫氫乙酸及其鈉鹽最大使用量0.50 g/kg（以脫氫乙酸計）。

本次研究采用高效液相色譜法分別對市售5種月餅樣品中的防腐劑苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的含量進行了測定。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和試劑

儀器：高效液相色譜儀（LC-15C），數控超聲波清洗器（KQ2200DE），電子天平（JA2003），臺式高速冷凍離心機（CT14RD）。

試劑：甲醇為色譜純試劑，苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸為色譜級標準品，水為超純水，其他試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

測定苯甲酸和山梨酸鉀色譜條件：Diamonsil C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm）；柱溫40℃；流動相為甲醇-0.02 mol/L乙酸銨（體積比5∶95）；流速1.0 mL/min；進樣量：10 μL；檢測波長230 nm。

測定脫氫乙酸色譜條件：Diamonsil C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm）；柱溫30℃；流動相為甲醇-0.02 mol/L乙酸銨（體積比10∶90）；流速1.0 mL/min；進樣量：10 μL；檢測波長293 nm。

均采用色譜峰的保留時間來定性，以外標法峰面積來定量計算含量。

1.3 標準溶液的配制

儲備液：準確稱取苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸標準品，用超純水溶解并定容，配成質量濃度為1.000 mg/mL的儲備液，4℃冰箱保存。

工作液：準確量取適量的苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的儲備液，以超純水逐級稀釋，配制成系列濃度的工作溶液，過孔徑0.22 μm濾膜，取10 μL進樣分析。

1.4 樣品的預處理

用刀把5種月餅樣品分別切碎、擠壓，呈肉眼看不到大顆粒的均勻黏糊狀。

測定苯甲酸、山梨酸的樣品前預處理方法：準確稱取5.0 g均勻黏糊狀樣品于25 mL容量瓶中，加入10 mL超純水，再先后加入0.5 mL 0.5 mol/L氫氧化鈉溶液、4 mL質量分數10%亞鐵氰化鉀溶液和4 mL質量分數20%乙酸溶液，震蕩混勻后用稀醋酸調pH至7.0～8.0，用超純水定容。混勻靜置30 min，待沉淀蛋白后，用濾紙過濾，濾液再經孔徑0.22 μm微孔濾膜過濾，收集濾過液于樣品瓶中保存，供高效液相色譜測定。每個樣品做3次重復，以平均值計算含量。

測定脫氫乙酸的樣品預處理方法：準確稱取5.0 g均勻黏糊狀樣品于25 mL容量瓶中，加入約10 mL超純水，然后加入5 mL質量分數12%硫酸鋅溶液，用氫氧化鈉溶液調pH至7～8，超聲提取10 min，再以超純水定容至刻度；將提取液過濾后取適量濾液轉移到分液漏斗中，加入10 mL正己烷，振搖1 min，靜置分層，棄去正己烷層，再加入10 mL正己烷重復進行萃取；取下層水相離心（4 000 r/min，10 min）；取上清液過孔徑 0.22 μm濾膜，收集濾過液于樣品瓶中保存，供高效液相色譜測定。

2 結果與分析

圖1 苯甲酸HPLC測定標準曲線

2.1 標準曲線

分別在苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的高效液相色譜測定條件下測定，以峰面積為縱坐標，標準液濃度為橫坐標，線性擬和得到苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸3種防腐劑高效液相法測定的標準曲線，如圖1、圖2和圖3所示。結果表明，苯甲酸在 10 μg/mL～200 μg/mL、山梨酸在 20 μg/mL～200 μg/mL、脫氫乙酸在 1 μg/mL～200 μg/mL濃度范圍內呈線性關系，線性相關系數平方值（R2）分別為0.999 9、0.997 4和0.994 0，可以應用于樣品中3種防腐劑的檢測。

圖2 山梨酸HPLC測定標準曲線

圖3 脫氫乙酸HPLC測定標準曲線

2.2 樣品測定

在標準色譜條件下，我們對市場購買的5種月餅樣品進行了苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸3種防腐劑的含量測定，結果如表1所示。在5種月餅樣品中均檢出山梨酸，含量在111.9 mg/kg～180.2 mg/kg之間，符合GB2760-2011的要求（≤1.0 g/kg）；三種月餅樣品中檢出脫氫乙酸，含量在16.8 mg/kg～137.8 mg/kg之間，2種月餅樣品中未檢出，也符合新標準規定（≤0.5 g/kg）；5種月餅中均未檢出苯甲酸。

表1 市售月餅樣品中苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸的含量測定

3 結 論

高效液相色譜法可以很好地檢測月餅樣品的苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸3種食品防腐劑。在5種月餅樣品中，均檢出山梨酸，含量符合新的國家標準；部分樣品中檢出脫氫乙酸，其含量也符合新的國家標準規定；5種樣品中均未檢出苯甲酸。市售5種月餅中主要依靠山梨酸來防腐，部分月餅同時使用山梨酸和脫氫乙酸來防腐。

［1］中華人民共和國衛生部.GB 2760-2011食品安全國家標準——食品添加劑使用標準［S］.北京：中國標準出版社，2011.

［2］程盛華，丁麗，林玲，等.高效液相色譜法同時測定月餅中的苯甲酸、山梨酸和糖精鈉［J］.食品科學，2008，29（6）：376-378.

［3］義志忠，彭寨玉.高效液相色譜法測定月餅中山梨酸［J］.中國衛生檢驗雜志，2004，14（2）：214.

［4］張輝珍，馬愛國，梁惠.高效液相色譜法測定食品中脫氫乙酸的方法研究［J］.衛生研究，2007，36（6）：748-750.

［5］中華人民共和國衛生部.GB/T 5009.29-2003.食品中山梨酸、苯甲酸的測定［S］.北京：中國標準出版社，2003.

［6］黃欣，周玉，吳小平，等.高效液相色譜法測定月餅中5種食品添加劑［J］，中國衛生檢驗雜志，2009，19（2）：335-336.

Determination of three antimicrobial reagents in mooncakes by high performance liquid chromatography

JIN Lu**ZHNAG Yu YU Xuan-keGUO Ying-jian LU Xue-jiao GUAN Yun-shiHUANG Guang-rong***
（College of life sciences，China jiliang university，Hangzhou 310018，China）

Three common kinds of antimicrobial reagents in mooncakes,benzoic acid,sorbic acid and dehydroacetic acid,were determined with high performance liquid chromatography (HPLC).After extracting,removal of proteins and membrane filtration,samples were tested with HPLC.The experimental results showed that the determination of linear correlation of these three antimicrobial reagents were above 0.99 with the linear detection range at 10 μg/mL ～200 μg/mL.After testing the contents of benzoic acid,sorbic acid and dehydroacetic acid in five kinds of mooncakes by this method,the results demonstrated that all of these samples contained sorbic acid,three of samples contained dehydroacetic acid,and no samples contained benzoic acid.

high performance liquid chromatography；mooncake；antimicrobial reagent

TS207.3

A

1673-6004（2012）01-0049-03

* 資助項目：省實驗教學示范中心（浙高教[2010]151）和校教改實驗專項（HEXSY2011083）資助

** 金露，男，1991年出生，中國計量學院食品質量與安全專業本科在讀

*** 黃光榮，通訊作者，Email：grhuang@126.com

2011-12-07