CD4+IL-10+調節(jié)性T細胞在特應性皮炎患者中的改變

趙宏麗 趙俊芳 李孟娟

CD4+IL-10+調節(jié)性T細胞在特應性皮炎患者中的改變

趙宏麗 趙俊芳 李孟娟

目的：探討特應性皮炎（AD）患者外周血CD4+IL-10+調節(jié)性T細胞、白細胞介素（IL）-10及轉化生長因子（TGF）-β的改變。方法：用流式細胞儀直接免疫熒光法檢測86例AD患者（AD組）外周血CD4+IL-10+T細胞的絕對計數和百分率；用酶聯免疫吸附法檢測外周血細胞因子IL-10、TGF-β的濃度，并與67例健康體檢者（對照組）比較。結果：AD患者CD4+IL-10+T細胞絕對計數和占CD4+T細胞的百分率及血IL-10濃度均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。2組TGF-β濃度比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。AD患者CD4+IL-10+T細胞絕對計數與外周血IL-10濃度呈正相關（r=0.47，P<0.05）；而與外周血TGF-β無相關性（r=0.15，P>0.05）。CD4+IL-10+T細胞占CD4+T細胞的百分率與外周血IL-10濃度呈正相關（r=0.65,P<0.05）；而與外周血TGF-β無相關性（r=0.21,P>0.05）。結論：IL-10可能是I型調節(jié)性T細胞（Trl）發(fā)揮功能的主要因子，通過下調由Th1和Th2細胞介導的炎癥反應過程，參與免疫調節(jié)。

皮炎，特應性 T淋巴細胞,調節(jié)性 白細胞介素10轉化生長因子β

特應性皮炎（atopic dermatitis,AD）是一種慢性、復發(fā)性、瘙癢性、炎癥性皮膚病?；疾÷食手鹉晟仙厔荩壳捌毡檎J為其是一種遺傳、環(huán)境、免疫系統(tǒng)相互作用的多因素疾病，但發(fā)病機制尚未明確。調節(jié)性T細胞（T-regulatory cell，Tr）是一群獨特的免疫調節(jié)細胞，具有免疫抑制作用，尤其是CD4+調節(jié)性T細胞。Tr在正常人體生理穩(wěn)態(tài)的維持以及在腫瘤、器官移植、自身免疫性疾病及病毒感染等病理狀態(tài)均起重要作用，與AD的免疫病理過程和病情密切相關[1-2]。本研究旨在通過檢測AD患者外周血CD4+IL-10+調節(jié)性T細胞、白介素（IL）-10及轉化生長因子（TGF）-β的改變，探討Tr在AD患者中的免疫病理機制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2009年10月—2010年10月在我院變態(tài)反應科門診診療的AD患者86例（AD組），其中男47例，女39例，年齡11~39歲，平均（27.31±8.5）歲，平均病程（5.6±2.8）年，均來自天津地區(qū)，漢族，診斷符合文獻[3]的診斷標準。對照組67例為天津地區(qū)健康獻血員，男37例，女30例，年齡21~41歲，平均（35.3±9.3）歲。2組間性別（χ2=0.01），年齡（t=0.97）比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.2 方法 （1）CD4+IL-10+T細胞檢測：無菌采集外周靜脈血10 mL，肝素鈉抗凝，Ficoll淋巴細胞分層液的密度梯度離心法分離外周血單個核細胞，移入RPMI1640（含10%胎牛血

清）培養(yǎng)基中，加20 μg/L植物血凝素（PHA）刺激，37℃ 、5%CO2培養(yǎng)24 h。收集培養(yǎng)液中細胞于流式反應管中，加入抗CD4-PE抗體20 μL，混勻，4℃避光孵育30 min；加入1 mL破膜劑，避光孵育45 min；加入抗IL-10-FITC抗體，室溫避光20 min，PBS洗滌重懸后用流式細胞儀進行檢測。各項數據分析采用CellQuest軟件進行，根據前向散射光和側向散射光調節(jié)PMT1和PMT2，以相應同型IgG染色細胞作為陰性對照調節(jié)熒光補償（FL）1和FL2。（2）外周血IL-10、TGF-β檢測：采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）進行檢測，檢測試劑盒購自晶美生物工程有限公司。用酶標儀（SPECTRⅢ，奧地利）讀取吸光度值，以標準品濃度作橫坐標，吸光度值作縱坐標，繪制標準曲線，以樣品吸光度值在標準曲線上查出其濃度。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0軟件，計量資料以均數±標準差（）表示，兩獨立樣本比較采用t檢驗，相關性分析用Pearson相關，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組CD4+IL-10+T細胞檢測結果 AD患者CD4+IL-10+T細胞絕對計數和占CD4+T細胞的百分率均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

Table 1 Comparison of CD4+IL-10+regulatory T cells,IL-10 and TGF-β between two groups表1 2組CD4+IL-10+T細胞檢測結果、血IL-10及TGF-β水平比較 （）

Table 1 Comparison of CD4+IL-10+regulatory T cells,IL-10 and TGF-β between two groups表1 2組CD4+IL-10+T細胞檢測結果、血IL-10及TGF-β水平比較 （）

*P<0.05

組別 n AD組對照組t 86 67 CD4+IL-10+T絕對計數（×109/L）0.26±0.13 0.02±0.01 3.56*占CD4+T細胞的百分率（%）12.76±4.85 3.27±1.03 2.29*IL-10（ng/L）126.59±59.46 31.47±10.96 2.81*TGF-β（ng/L）407.23±155.88 359.47±99.21 1.33

2.2 2組外周血IL-10、TGF-β檢測結果比較 AD患者外周血IL-10濃度高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。2組TGF-β濃度比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

2.3 AD患者CD4+IL-10+T細胞與外周血IL-10、TGF-β的相關性分析 AD患者CD4+IL-10+T細胞絕對計數與外周血IL-10濃度呈正相關（r=0.47,P<0.05）；而與外周血TGF-β無相關性（r=0.15,P>0.05）。CD4+IL-10+T細胞占CD4+T細胞的百分率與外周血IL-10濃度呈正相關（r=0.65,P<0.05）；而與外周血TGF-β無相關性（r=0.21,P>0.05）。

3 討論

調節(jié)性T細胞是一類具有主動免疫調節(jié)功能的T細胞群，根據來源和表型不同可將CD4+Tr分為CD4+CD25+T細胞、Ⅰ型Tr（Tr1）細胞和輔助性T細胞3（Th3）等亞類。Tr1細胞不表達Foxp3，但活化后可上調Foxp3水平，與活化的CD4+CD25-T細胞表達Foxp3的現象類似[4]。Cobbold等[5]研究鼠類Tr1和CD4+CD25+Tr，發(fā)現Tr1可選擇性地表達ROG（GATA-3的抑制劑），但活化的Th細胞也表達ROG。故目前尚未發(fā)現Tr1細胞的特異性標志，難以將其與CD4+CD25+Tr區(qū)分。Trl主要通過分泌IL-10、TGF-β抑制初始型和記憶型T細胞反應，且其抑制作用需要T細胞受體（TCR）的激活。IL-10下調細胞表面共刺激分子和抗原提呈細胞（APC）表達的促炎因子，直接抑制CD4+T細胞產生IL-2和腫瘤壞死因子（TNF）α。TGF-β同樣抑制APC的功能和T細胞產生細胞因子的能力。在加入抗IL-10和抗TGF-β的中和抗體后，Tr1的抑制作用部分或全部消失。

Szegedi等[6]研究顯示，在AD組和對照組中，Tr1的絕對數量和百分比均有差異，但2組CD4+CD25+Tr無差異。Ver?hagen等[7]通過對皮膚組織的免疫組化研究發(fā)現，盡管AD患者皮損區(qū)、特應性斑貼試驗皮損區(qū)Tr1細胞及其抑制性細胞因子IL-10表達明顯增加，但沒有CD4+CD25+Tr細胞，提示調節(jié)性T細胞的缺陷參與了AD的發(fā)病機制。Keppel等[8]從治療方面的研究顯示患AD的犬接受免疫治療后，CD4+CD25+Tr及IgE數量減少，IL-10數量增多。間接反映AD中CD4+CD25+Tr的數量是增加的。目前國內外對AD患者Tr的研究結果存在一定差異，可能是因為研究方法及病例選擇和分期不同。本研究結果提示，AD患者外周血中Tr1細胞數量和IL-10增加，IL-10可能是導致Tr1發(fā)揮功能的主要因子，能夠下調由Th1和Th2細胞介導的炎癥反應過程，參與免疫調節(jié)[9-10]。因此，隨著對AD患者體內調節(jié)性細胞的深入研究，可能會進一步揭示AD的發(fā)病機制，為臨床診斷、治療與預防提供重要的理論依據。

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10.3969/j.issn.0253-9896.2012.08.023

300120天津市長征醫(yī)院

（2011-08-04收稿 2011-11-21修稿）

（本文編輯 閆娟）