培養基組成對銅綠假單胞菌NY3產鼠李糖脂性能和結構的影響

孫 超，郭 斐

鼠李糖脂是一種無毒且應用廣泛的生物表面活性劑，具有乳化、起泡、殺菌、驅油等性能，同時可作為食品添加劑的表面活性劑，有著廣泛的應用前景。鼠李糖脂在石油工業中主要應用于三次采油和石油污染土壤修復;在農業中主要應用于土壤性能的改良，保護植物以及作無污染殺菌劑使用;在環境修復中主要應用于修復重金屬污染，實驗證明鼠李糖脂對土壤中多種重金屬離子的洗脫能力強于普通的化學表面活性劑。

我們分離篩選出的銅綠假單胞菌NY3［1］能利用不同碳源和氮源發酵產鼠李糖脂。通過改變培養基中的碳源和氮源，利用NY3菌發酵產生出結構性能不同的鼠李糖脂，為有目的控制NY3菌株發酵生產鼠李糖脂奠定了基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 菌種

銅綠假單胞菌NY3，本實驗室分離鑒定［2］。

1.1.2 培養基

NY3種子液培養基:牛肉膏3.0 g，蛋白胨10.0 g，NaCl 5.0 g，pH=7.0～7.2，蒸餾水定容至1 000 ml，121℃高壓蒸汽滅菌30 min。

無機鹽培養基:NH4NO31.004 g(或含氮量相當的表2中所列出的其他氮源)，磷酸鹽緩沖液30 mL (K2HPO442 g，NaH2PO428 g，pH7.5，蒸餾水定容至1 000 ml)，MgSO4溶液0.5 mL(24.64 g/L)，CaCl2溶液0.1 mL(CaCl2·2H2O 14.72 g/L)，微量元素1.5 mL(FeSO4·7H2O 4.5 g/L、ZnSO4·7H2O 0.148 g/L、MnSO4·4H2O 0.3 g/L、CoCl2·6H2O 0.024 g/L、NiCl2·6H2O 0.024 g/L、CuCl2·6H2O 0.017 g/L、Na2MoO4·2H2O 0.109 g/L、H3BO30.062 g/L)，置于1L容量瓶中，調節pH為9.0，蒸餾水定容至刻度。

鼠李糖脂發酵培養基:100 ml無機鹽培養基，加入5 ml菜籽油(或重量百分比為4.8%的表1中列出的其他碳源)，121℃高壓蒸汽滅菌30 min。

1.2 鼠李糖脂的發酵和提純

將NY3菌接種于100 ml NY3種子液培養基，置30℃搖床(170 r/min)好氧培養24 h，得NY3種子液。以1%接種量將其接種于100 ml鼠李糖脂培養基中，于30℃搖床(170 r/min)好氧培養72h，得含鼠李糖脂發酵液。再于10 000 r/min轉速、4℃離心10 min。用濃HCl調上清液pH=2，靜置4℃冰箱中過夜，即得發酵液?！?br>