野鴉椿果實水提物對急性酒精性肝損傷的保護作用

鐘 飛, 高 輝

(吉首大學1.醫學院生物化學教研室; 2.醫學院藥理教研室, 湖南吉首 416000)

野鴉椿(euscaphis japoneca)為省沽油科野鴉椿屬落葉小喬木,湘西地區分布廣泛,果實主要含異槲皮苷、矢車菊素-3-木糖-葡萄糖苷、紫云英苷、山柰酚-3-葡萄糖苷及槲皮素-3-葡萄糖苷等[1].臨床以其果實治療肝炎、肝硬化取得了較好的效果.我們前期的研究也證實,野鴉椿提取物對大鼠慢性肝纖維化具有較好的保護和治療作用.基于以上臨床資料和動物實驗的證據,我們推測其對酒精性肝損傷也可能具有保護作用,因此本研究采用大鼠急性酒精性肝損傷模型,研究其肝保護作用.

1 材料及方法

1.1 動物 雄性SD大鼠40只,體重220±20 g,清潔級,由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供,許可證號：SCXK(湘)2011-0003.

1.2 藥品及試劑 野鴉椿成熟果實采集自湖南吉首地區,由吉首大學醫學院呂江明老師鑒定,制成每毫升含生藥1 g的水提物;谷丙轉氨酶 (ALT)、谷草轉氨酶 (AST)、總膽紅素 (TBIL)、直接膽紅素 (DBIL)及甘油三酯 (TG)試劑盒均購自南京建成生物有限公司.

1.3 儀器 TG L-16G低溫高速離心機,上海醫用分析儀器廠;BS-300全自動生化分析儀,深圳邁瑞公司.

1.4 動物分組及處理 40只雄性SD大鼠隨機分成5組,每組8只,分別是正常組、模型組、野鴉椿高(野鴉椿水提物9 ml/kg,下同)、中 (3 ml/kg)、低劑量組 (1 ml/kg),野鴉椿處理各組每天給予相應劑量的野鴉椿水提物,正常組和模型組灌胃給予等體積生理鹽水,連續7天.此外,除正常組外其余各組每天上午8時灌胃給予體積濃度50%酒精10 ml/kg,連續7天[2].

1.5 指標檢測 各組動物末次給藥后2 h 3%的戊巴比妥鈉1 ml/kg麻醉,腹主動脈取血,離心取血清,檢測ALT、AST、TBIL及DBIL;同時剪取肝右葉10%甲醛固定,行HE染色,檢查肝組織病理變化.

2 結果

2.1 一般情況 模型組大鼠活躍程度、進食量均明顯 減少,毛色暗淡,體重有所減輕;野鴉椿給藥各組以 上情況均有不同程度改善,尤其高劑量組在進食量和活躍程度上與正常組差距已不太明顯,只是毛色光澤 仍稍差.

2.2 肝臟生化指標及組織學檢查 模型組AST、ALT、TBIL、DBIL以及TG均明顯高于正常組,尤其是AST升高程度明顯超過了ALT,而野鴉椿給藥各組除低劑量組TBIL與模型組差異不顯著之外,其余均明顯低于模型組;而且以上各項指標隨著給藥劑量的增加降低的程度也更加明顯,表現出一定的量效關系.(表1)

表1 野鴉椿對急性酒精性肝損傷大鼠肝功能的影響 (±s,n=8)

表1 野鴉椿對急性酒精性肝損傷大鼠肝功能的影響 (±s,n=8)

注：與正常組比較,＊＊P＜0.01;與模型組比較,▲P＜0.05,▲▲P＜0.01.

images/BZ_125_176_606_2205_681.png正常組 67±13 49±8 9.6±1.2 5.2±0.9 0.53±0.09模型組 672±125＊＊ 313±48＊＊ 56.7±7.9＊＊ 33.6±5.3＊＊ 0.95±0.13＊＊低劑量組 513±124▲ 252±37▲ 48.8±7.3 25.8±4.1▲ 0.81±0.12▲中劑量組 476±86▲▲ 175±25▲▲ 37.5±6.4▲▲ 18.7±3.7▲▲ 0.71±0.11▲▲高劑量組 358±75▲▲ 128±22▲▲ 22.9±5.1▲▲ 13.6±3.2▲▲ 0.65±0.12▲▲

肝組織學檢查顯示,正常肝細胞呈多邊形,單行排列,胞質均勻紅染 (圖1A);而模型組肝細胞增大、明顯腫脹,肝板界限不清,胞質疏松、淡染,部分肝細胞腫脹呈氣球樣變,并見明顯脂肪變性 (圖1B);低劑量組肝細胞中度腫脹,部分肝細胞質高度疏松呈空泡狀,脂肪變性較模型組稍有減輕 (圖1C);中劑量組部分肝細胞輕度腫脹,胞質稍疏松 (圖1D);高劑量組肝細胞輕度腫脹,部分肝細胞質呈紅染細顆粒狀 (圖1E).

圖1 大鼠肝組織病理變化 (HE染色×100),說明見正文

3 討論

長期酗酒可導致慢性酒精性肝病,而短期大量攝入則可導致急性肝損害,甚至酒精性肝炎.本研究顯示野鴉椿水提物高、中、低劑量組均可明顯降低急性酒精性肝損害大鼠的AST、ALT水平,發揮肝保護作用;也能夠降低TBIL、DBIL,起到消除黃疸作用,對于酒精性肝損害發生時的TG升高,也能夠起到抑制作用,從而改善酒精性肝損害發生時的脂代謝紊亂.病理組織學也同樣顯示野鴉椿各劑量組肝細胞腫脹、氣球樣變、脂肪變性等均較模型組為輕.生化指標的改善和病理損害的減輕都說明,野鴉椿水提物對大鼠急性酒精性肝損傷具有保護作用.

野鴉椿成熟果實含有豐富的黃酮類物質,其中異槲皮苷是其主要有效成分,也是田基黃治療肝炎的重要物質基礎,異槲皮苷對四氯化碳和D-氨基半乳糖胺導致的大鼠急性肝損傷均有很好的保肝作用[3],野鴉椿果實中槲皮素-3-葡萄糖苷、山柰酚-3-葡萄糖苷體內外實驗也均表明具有保肝作用[3-7];此外,矢車菊素-3-木糖-葡萄糖苷能夠促進肝臟X受體α和β、過氧化物酶體增殖劑激活受體等多種與脂代謝有關的核轉錄因子的表達[8],可能是其改善酒精性肝損害時脂代謝紊亂的重要機制.異槲皮苷、矢車菊素-3-木糖-葡萄糖苷、紫云英苷、山柰酚-3-葡萄糖苷及槲皮素-3-葡萄糖苷等黃酮成分均有很強抗氧化作用[9,10],能夠有效清除酒精代謝過程中產生的大量活性氧,保護肝細胞;這些黃酮類物質可能也能夠抑制肝損害時的肝內血管收縮,增加肝內血流、改善血流動力學紊亂,增加氧供等,改善肝組織代謝,達到保護肝細胞的作用.因此,野鴉椿的保肝作用是多種成分、多種機制共同作用的結果,對于其不同成分之間的相互影響還需深入研究.

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