CIK細(xì)胞治療對晚期惡性腫瘤患者療效研究*

王 雙

(泰山醫(yī)學(xué)院附屬泰山醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，山東 泰安 271000)

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer cell, CIK)是以CD3+CD8+T 細(xì)胞和 CD3+CD56+T 細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞的異質(zhì)細(xì)胞群，是一類體外增殖能力強(qiáng)、殺瘤活性高、對多重耐藥腫瘤細(xì)胞敏感的廣譜抗瘤免疫活性細(xì)胞[1]。它可以在沒有損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的前提下,直接殺傷腫瘤細(xì)胞,并可調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。我科自2010年6月～2011年12月為38例晚期癌癥患者進(jìn)行了CIK細(xì)胞治療,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料和方法

1.1臨床資料 本組38例患者均經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)檢查確診為惡性腫瘤。其中肺癌20例,鼻咽癌2例,乳腺癌4例,腎癌4例,原發(fā)性肝癌6例, 惡性黑色素瘤 2 例。按照國際抗癌聯(lián)盟(UICC)腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn),本組均為III期或IV期病例。男性26例,女性12例。中位年齡 58歲(34～86 歲)。在行CIK細(xì)胞治療前有27例進(jìn)行過化療,占71%,有11例進(jìn)行過放療,占29%。放化療與CIK細(xì)胞治療間隔在4周以上。均有可測量腫瘤病灶；Karnofsky 評分≥60 分；預(yù)計生存期>3 個月;治療前心、肝、腎功能及血常規(guī)大致正常。 治療前通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，并簽治療知情同意書。

1.2方法

1.2.1CIK細(xì)胞培養(yǎng)與回輸 MCS+血細(xì)胞采集儀采集患者外周血單個核細(xì)胞,經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)一步分離純化。用pH 7.4的PBS洗滌3次,將細(xì)胞置于含人血清的培養(yǎng)基中,細(xì)胞密度為1.5～2.0×106個/ml,置于37℃5%CO2條件下培養(yǎng)。第0 d加入生長培養(yǎng)基IFN-γ 1000 U/ml,24 h后加入人重組IL-1 100 U/ml、人重組IL-2 1 000 U/ml、抗CD3單抗100 ng/ml,每2～3 d更換培養(yǎng)基一次,補(bǔ)加IL-1、IL-2,并調(diào)整細(xì)胞密度為1.5～2.0×106個/ml,培養(yǎng)至第8 d,經(jīng)細(xì)菌、霉菌等微生物培養(yǎng)陰性,革蘭氏染色無菌生長后再收集細(xì)胞,培養(yǎng)10～14 d后,將收集培養(yǎng)的CIK細(xì)胞用無菌生理鹽水洗滌3次,細(xì)胞溶于1%人血白蛋白生理鹽水配成100 ml液體靜脈回輸。隔天回輸 1 次， 每次回輸細(xì)胞數(shù)量在 2～3×109，連續(xù)輸注4次為一個療程。每位患者輸注1～3個療程。

1.2.2免疫學(xué)及其他臨床相關(guān)指標(biāo)的檢測 治療前后常規(guī)檢查患者體溫、血壓等指標(biāo),取患者CIK治療前及CIK細(xì)胞回輸治療后2周外周血,檢測腫瘤標(biāo)志物,同時用流式細(xì)胞儀測定患者外周血CD3、CD4、CD8及NK細(xì)胞中CD16、CD56等免疫學(xué)指標(biāo)。

1.2.3生活質(zhì)量評估 用Karnofsky評分及體重、疼痛程度、睡眠、食欲等的改變來評估生活質(zhì)量的改善。

1.2.4療效評價 患者治療結(jié)束后4周進(jìn)行療效評定, 參照實體瘤療效標(biāo)準(zhǔn),以患者治療前及治療后1個月CT及B超進(jìn)行對照比較，分為完全緩解(CR)，部分緩解(PR)，輕度緩解(MR)，穩(wěn)定(SD)，病情進(jìn)展(PD)。有效率=CR+PR+MR。并觀察治療前、后對心、肝、腎及消化道的影響。

1.2.5毒副反應(yīng)觀察 靜脈回輸過程中及回輸后2 h內(nèi)密切觀察患者是否出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹、乏力、肌肉酸痛、嘔吐等毒副反應(yīng)。

1.2.6統(tǒng)計分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,2組獨(dú)立樣本均數(shù)比較采用t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1腫瘤標(biāo)志物的測定 29例CEA升高的患者經(jīng)CIK細(xì)胞治療后23例下降,6例穩(wěn)定;4例CA125升高患者經(jīng)CIK治療后3例下降,1例增加;6例AFP升高患者經(jīng)CIK治療后均下降。

2.2CIK細(xì)胞治療前后T細(xì)胞亞群變化 接受CIK細(xì)胞免疫治療的患者,T細(xì)胞亞群變化與治療前相比,其外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK細(xì)胞(CD16+、CD56+)均顯著上升(P<0.05),CD8+下降。見表1。

表1 CIK治療前后T細(xì)胞亞群的變化

2.3生活質(zhì)量改善 治療后Karnofsky評分平均提高10～20分,其中提高29例,穩(wěn)定4例,下降5例,提高率為76%。治療后患者平均體重增加2.5 kg,其中提高26例,穩(wěn)定7例,下降5例,提高率為68%。疼痛評分(按數(shù)字評分法)平均下降3分，其中下降27例，穩(wěn)定8例，加重3例，下降率為71%；病人疲倦乏力及失眠、食欲不振等臨床癥狀有明顯改善。見表2。

2.4療效評價 38例患者部分緩解15例，輕度緩解10例，穩(wěn)定8例，進(jìn)展5例，總緩解率為66%。

2.5毒副反應(yīng)觀察 5例患者出現(xiàn)一過性發(fā)熱,體溫在 37.5℃以下，未行特殊處理自行消退；3例患者出現(xiàn)輕度皮疹、 乏力等癥狀，均能耐受, 未作特殊處理自行緩解。 絕大多數(shù)患者耐受較好， 無其他嚴(yán)重不良反應(yīng)。治療前后肝、腎功能檢測均無明顯改變。

表2 CIK治療前后臨床癥狀改善分析

3 討 論

CIK 細(xì)胞是 1991 年由美國斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院 Schmidt Wolf 等發(fā)現(xiàn)在外周血淋巴細(xì)胞中加入多種細(xì)胞因子，經(jīng)培養(yǎng)收獲大量腫瘤殺傷細(xì)胞，將其命名CIK細(xì)胞。CIK細(xì)胞是一種新型、高效、廣譜的免疫細(xì)胞，為目前腫瘤過繼免疫治療的研究熱點(diǎn)之一。其對多種腫瘤具有殺傷活性，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和NK細(xì)胞的非主要組織相容性復(fù)合物(MHC)限制性殺瘤的特點(diǎn),CD3+CD56+T細(xì)胞是主要的效應(yīng)細(xì)胞。CIK細(xì)胞的一個重要特性是對腫瘤細(xì)胞的殺傷為非特異性和非MHC限制性，不參與抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用[2-3]。另一重要特性是，CIK細(xì)胞被活化后可以產(chǎn)生多種細(xì)胞因子和趨化因子，如TNF-α、IL-2、GM-CSF、IFN-γ等,不僅對腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用,還可通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)性間接殺傷腫瘤細(xì)胞。CIK細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞在正常人外周血中極其罕見,僅1%～5%,在體外經(jīng)多種因子培養(yǎng)28～30天后,其數(shù)目迅速增多，便于培養(yǎng)應(yīng)用;實驗證明,擴(kuò)增出的CD3+CD56+細(xì)胞來源于CD3+CD56-T細(xì)胞,而非CD3-CD56+NK細(xì)胞，但具有NK細(xì)胞的表面標(biāo)志CD56+抗原[4]。Wolf等[7]研究發(fā)現(xiàn),CIK細(xì)胞對多重耐藥腫瘤細(xì)胞仍具有敏感性,對化療敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞殺傷活性無明顯差別[5-6]。由于CIK細(xì)胞既具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大殺傷活性,也具有NK細(xì)胞殺傷時的非MHC限制性,所以其對于多種腫瘤細(xì)胞系(包括K562、人B淋巴瘤細(xì)胞系、胃癌細(xì)胞系MGC-803、肝癌細(xì)胞系BEL-7402、乳腺癌細(xì)胞系MCF-7等)均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷活性;同時CIK細(xì)胞對正常骨髓的細(xì)胞毒性小,在不損傷機(jī)體免疫系統(tǒng)和功能的前提下，直接殺傷腫瘤[8]，病人耐受性好。

本研究中患者經(jīng)過CIK細(xì)胞免疫治療后，T細(xì)胞亞群變化與治療前相比,其外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK細(xì)胞(CD16+、CD56+)均顯著上升,CD8+下降，NK細(xì)胞百分率和殺傷活性明顯升高，CIK細(xì)胞治療后CD3+、CD4+細(xì)胞的增高說明CIK細(xì)胞生物治療能增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能。相關(guān)腫瘤標(biāo)志物呈下降趨勢，29例CEA升高的患者經(jīng)CIK細(xì)胞治療后23例下降,6例穩(wěn)定;4例CA125升高患者經(jīng)CIK治療后3例下降,1例增加;6例AFP升高患者經(jīng)CIK治療后均下降。臨床療效方面有效率為66%。在生活質(zhì)量上，治療后Karnofsky評分平均提高10～20分,患者平均體重增加2.5 kg,疼痛評分(按數(shù)字評分法)平均下降3分，其中下降27例，穩(wěn)定8例，下降率為71%；另外病人疲倦乏力及失眠、食欲不振、惡性嘔吐、腹脹等臨床癥狀有明顯改善。相關(guān)生活質(zhì)量的改善明顯，與輸入CIK細(xì)胞后產(chǎn)生的一些細(xì)胞因子的作用可能有關(guān)。CIK細(xì)胞輸注過程中不良反應(yīng)輕微，5例出現(xiàn)低熱，3例有輕微皮疹、乏力，未作特殊處理，自行緩解。

臨床研究表明，CIK細(xì)胞過繼免疫治療晚期惡性腫瘤患者，能明顯提高患者免疫功能，有利于控制腫瘤生長，改善臨床癥狀，提高晚期腫瘤病人的生活質(zhì)量，并且毒副反應(yīng)輕微，臨床應(yīng)用安全，病人耐受性好，易于被晚期腫瘤病人接受，是一種安全、有效的方法，對于晚期腫瘤病人的支持治療及改善生活質(zhì)量有積極意義。

[1] Linn YC,Lau SK,Liu BH,et al.Characterization of the recognition and functional heterogeneity exhibited by cytokine-induced killer cell subsets against acute myeloid leukaemia target cell[J].Immuology, 2009,126(3):423-435.

[2] Shi M,Fu J,Shi F,et al.Viral suppression correlates with dendritic cellrestoration in chronic hepatitis B patients with autologous cytokine induced killer cell transfusion[J].Liver Int,2009,29(3):466-474.

[3] Wongkajornsilp A,Somchitprasert T,Butraporn R,et al.Human cytokine-induced killer cells specifically infiltrated and retarded the growth of the inoculated human cholangiocarcinoma cells in SCID mice[J].Cancer Invest,2009,27(2):140-148.

[4] Franceschetti M, Pievani A, Borleri G, et al. Cytokine-induced killer cells are terminally differentiated activated CD8 cytotoxic T-EMRA lymphocytes[J]. Exp Hematol, 2009, 37 (5): 616-628.

[5] Wei XC, Zhai XH, Han XR, et al. Biological activity of DC-CIK cells and its effect against leukemia cells in vitro[J]. Zhongguo Shi YanXue Ye Xue Za Zhi, 2008,16(5):1150-1153.

[6] Liu QC,Wu WH,Li GR.Effect of lingdankang composite combined dendritic cell-cytokine induced killer cells in treating leukemia[J]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi,2009,29(4):347-350.

[7] Weng DS，Zhou J，Zhou QM，et al.Minimally invasive treatment combined with cytokine-induced killer cells therapy lower the short-term recurrence rates of hepatocellular carcinomas[J].Immunother，2008，31：63-71.

[8] Hu S,Li XM,un XD,et al. Studies Oil inducing apeptosis effects and mechanism of CIK cells for MGC 803 gastric cancer cell lines[J]. Cancer Biother Radiopharm, 2005, 20(2):173-179.