氫氯噻嗪分散片中有關物質苯并噻二嗪雜質A的研究

2012-01-20 09:02:06王煥王國振

河北醫藥 2012年16期

王煥王國振

氫氯噻嗪是噻嗪類利尿劑中用于治療高血壓的最常用藥物，用于降壓治療己有數十年的歷史。氫氯噻嗪原料在合成過程中帶入苯并噻二嗪雜質A雜質，苯并噻二嗪雜質A的多少直接影響原料質量，超過0.1%易吸潮，制得制劑穩定性差，不良反應發生率高，因此有必要控制制劑中有關物質苯并噻二嗪雜質A含量。而分散片具有崩解速度快，藥效作用迅速、藥物生物利用度好等特點。本實驗是對氫氯噻嗪分散片有關物質苯并噻二嗪雜質A進行研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥品 Agilent 1100高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司);TU-1901型紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);JA1203N型分析天平(上海精密科學儀器有限公司);PHS-25型酸度計(上海雷磁儀器廠)。氫氯噻嗪分散片規格:25 mg/片(河北龍海藥業有限公司實驗室，批號:090803、090804、090805);氫氯噻嗪對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100309-200702);苯并噻二嗪雜質A對照品(USP，批號:I0F027)。

1.2 色譜條件與系統適用性實驗色譜柱為ShimadzuVP-ODS(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，氰基鍵合硅膠為填充劑，以 pH 值3.0磷酸鹽緩沖液-甲醇-乙腈(60∶20∶20)為流動相，檢測波長為 273 nm［1］，流速 1.0 ml/min，進樣量10 μl。理論板數按氫氯噻嗪峰計算不低于5 000，氫氯噻嗪與有關物質苯并噻二嗪雜質A峰之間的分離度符合規定。

1.3 專屬性試驗

1.3.1 供試品溶液:取本品10片，精密稱定，研細，精密量取適量(約相當于氫氯噻嗪25 mg)，置100 ml量瓶中，加酸性水溶液30 ml，超聲溶解，加甲醇60 ml，混勻，超聲助溶5分鐘，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液15 ml，置100 ml量瓶中，用甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.3.2 輔料供試品溶液的配制:取相當于一片制劑重量的全輔料，置50 ml量瓶中，加水適量，超聲并稀釋至刻度。分別取供試品溶液和輔料供試品溶液20 ml3份，分別加入1 mol/L的鹽酸5 ml、1 mol/L的氫氧化鈉溶液 5 ml、過氧化氫 5 ml，水浴30 min，放冷后過濾，取續濾液測定。第4份水浴2 h，第5份置4 500lx光強下放置2 d，過濾，取續濾液測定。

1.4 線性范圍和定量限精密稱取苯并噻二嗪雜質A對照品10 mg，置200 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。0.15、0.3、0.6、1.2、2.4 ml，置 100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度 C(μg/ml)為橫坐標，主峰峰面積為縱坐標，作線性回歸。苯并噻二嗪雜質 A 回歸方程為 Y=170.66C －8.904，r=0.9997。

1.5 加樣回收率測定取苯并噻二嗪雜質A對照品約10 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解，甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為苯并噻二嗪雜質A儲備液。按本品制劑處方，配制模擬空白輔料，精密稱取氫氯噻嗪100%一份，再按處方量精密稱取相應量的輔料，置100 ml量瓶中，加酸性水溶液30 ml，超聲溶解，加甲醇60 ml，混勻，超聲助溶5 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液15 ml，置100 ml量瓶中，用甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品儲備液。分別精密量取苯并噻二嗪雜質 A儲備液0.05、0.1 ml和0.15 ml，各3份，分別置10 ml量瓶中，加供試品儲備溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別精密量取續濾液10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算苯并噻二嗪雜質A的濃度，并計算回收率。

1.6 重復性試驗照有關物質測定項下的方法，配制對照品溶液，重復測定5次。

1.7 樣品溶液的穩定性照有關物質測定項下的方法，配制對照品溶液，分別在 0、2、4、8、12 h 測定。

1.8 有關物質確定取上述供試品溶液，作為供試品溶液。精密稱取苯并噻二嗪雜質A對照品10 mg，置200 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液(1)。精密量取對照品溶液(1)0.6 ml，置100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液(2)。照含量測定項下的方法，精密量取含量測定項下的氫氯噻嗪對照品溶液(0.1 mg/ml)5 ml，上述雜質對照品溶液(1)0.6 ml，置 100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，取10 μl注入液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使雜質峰能準確積分，并使苯并噻二嗪雜質A峰與主成分氫氯噻嗪峰之間的分離度符合規定。再精密量取對照品溶液(2)與供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至氫氯噻嗪主峰保留時間的1.5倍，按外標法以峰面積計算，有關物質應符合下列要求:相對于氫氯噻嗪，苯并噻二嗪雜質A的量應不超過0.1%。

2 結果

2.1 專屬性試驗在選定的色譜條件下，輔料對光、熱較為穩定;在酸、堿、氧化條件下有所降解，但保留時間均在苯并噻二嗪雜質A前，不影響氫氯噻嗪雜質測定。氫氯噻嗪對光較為穩定;在熱的作用下，氫氯噻嗪雜質增加;氧化條件下，降解增多，但產物均在2 min左右，不影響氫氯噻嗪雜質測定;在堿的作用下略有降解，雜質增大，并產生保留時間3.8 min的的雜質;在酸的作用下略有降解，雜質增大，并產生保留時間7 min左右的雜質，均不影響氫氯噻嗪與厄貝沙坦雜質的測定。在選定的色譜條件下，輔料對有關物質測定沒有干擾，降解產物與主成分可達基線分離，分離專屬性良好。

2.2 線性范圍和定量限在0.076 ～1.222 μg/ml，苯并噻二嗪雜質A的濃度與峰面積線性關系良好。上述系列濃度溶液中1號溶液進樣10 μl，色譜峰的信噪比約為10，因此可確定苯并噻二嗪雜質A的定量限為0.76 ng。見表1。