氫氯噻嗪分散片中有關(guān)物質(zhì)苯并噻二嗪雜質(zhì)A的研究

王煥 王國(guó)振

氫氯噻嗪是噻嗪類利尿劑中用于治療高血壓的最常用藥物，用于降壓治療己有數(shù)十年的歷史。氫氯噻嗪原料在合成過(guò)程中帶入苯并噻二嗪雜質(zhì)A雜質(zhì)，苯并噻二嗪雜質(zhì)A的多少直接影響原料質(zhì)量，超過(guò)0.1%易吸潮，制得制劑穩(wěn)定性差，不良反應(yīng)發(fā)生率高，因此有必要控制制劑中有關(guān)物質(zhì)苯并噻二嗪雜質(zhì)A含量。而分散片具有崩解速度快，藥效作用迅速、藥物生物利用度好等特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)是對(duì)氫氯噻嗪分散片有關(guān)物質(zhì)苯并噻二嗪雜質(zhì)A進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥品 Agilent 1100高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司);TU-1901型紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);JA1203N型分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);PHS-25型酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠)。氫氯噻嗪分散片規(guī)格:25 mg/片(河北龍海藥業(yè)有限公司實(shí)驗(yàn)室，批號(hào):090803、090804、090805);氫氯噻嗪對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):100309-200702);苯并噻二嗪雜質(zhì)A對(duì)照品(USP，批號(hào):I0F027)。

1.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 色譜柱為ShimadzuVP-ODS(150 mm ×4.6 mm，5 μm)，氰基鍵合硅膠為填充劑，以 pH 值3.0磷酸鹽緩沖液-甲醇-乙腈(60∶20∶20)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為 273 nm［1］，流速 1.0 ml/min，進(jìn)樣量10 μl。理論板數(shù)按氫氯噻嗪峰計(jì)算不低于5 000，氫氯噻嗪與有關(guān)物質(zhì)苯并噻二嗪雜質(zhì)A峰之間的分離度符合規(guī)定。

1.3 專屬性試驗(yàn)

1.3.1 供試品溶液:取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密量取適量(約相當(dāng)于氫氯噻嗪25 mg)，置100 ml量瓶中，加酸性水溶液30 ml，超聲溶解，加甲醇60 ml，混勻，超聲助溶5分鐘，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液15 ml，置100 ml量瓶中，用甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.3.2 輔料供試品溶液的配制:取相當(dāng)于一片制劑重量的全輔料，置50 ml量瓶中，加水適量，超聲并稀釋至刻度。分別取供試品溶液和輔料供試品溶液20 ml3份，分別加入1 mol/L的鹽酸5 ml、1 mol/L的氫氧化鈉溶液 5 ml、過(guò)氧化氫 5 ml，水浴30 min，放冷后過(guò)濾，取續(xù)濾液測(cè)定。第4份水浴2 h，第5份置4 500lx光強(qiáng)下放置2 d，過(guò)濾，取續(xù)濾液測(cè)定。

1.4 線性范圍和定量限 精密稱取苯并噻二嗪雜質(zhì)A對(duì)照品10 mg，置200 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。0.15、0.3、0.6、1.2、2.4 ml，置 100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度 C(μg/ml)為橫坐標(biāo)，主峰峰面積為縱坐標(biāo)，作線性回歸。苯并噻二嗪雜質(zhì) A 回歸方程為 Y=170.66C －8.904，r=0.9997。

1.5 加樣回收率測(cè)定 取苯并噻二嗪雜質(zhì)A對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解，甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為苯并噻二嗪雜質(zhì)A儲(chǔ)備液。按本品制劑處方，配制模擬空白輔料，精密稱取氫氯噻嗪100%一份，再按處方量精密稱取相應(yīng)量的輔料，置100 ml量瓶中，加酸性水溶液30 ml，超聲溶解，加甲醇60 ml，混勻，超聲助溶5 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液15 ml，置100 ml量瓶中，用甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品儲(chǔ)備液。分別精密量取苯并噻二嗪雜質(zhì) A儲(chǔ)備液0.05、0.1 ml和0.15 ml，各3份，分別置10 ml量瓶中，加供試品儲(chǔ)備溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，分別精密量取續(xù)濾液10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算苯并噻二嗪雜質(zhì)A的濃度，并計(jì)算回收率。

1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 照有關(guān)物質(zhì)測(cè)定項(xiàng)下的方法，配制對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定5次。

1.7 樣品溶液的穩(wěn)定性 照有關(guān)物質(zhì)測(cè)定項(xiàng)下的方法，配制對(duì)照品溶液，分別在 0、2、4、8、12 h 測(cè)定。

1.8 有關(guān)物質(zhì)確定 取上述供試品溶液，作為供試品溶液。精密稱取苯并噻二嗪雜質(zhì)A對(duì)照品10 mg，置200 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(1)。精密量取對(duì)照品溶液(1)0.6 ml，置100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(2)。照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法，精密量取含量測(cè)定項(xiàng)下的氫氯噻嗪對(duì)照品溶液(0.1 mg/ml)5 ml，上述雜質(zhì)對(duì)照品溶液(1)0.6 ml，置 100 ml量瓶中，加甲醇-酸性水溶液(70∶30)的混合溶液稀釋至刻度，搖勻，取10 μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使雜質(zhì)峰能準(zhǔn)確積分，并使苯并噻二嗪雜質(zhì)A峰與主成分氫氯噻嗪峰之間的分離度符合規(guī)定。再精密量取對(duì)照品溶液(2)與供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至氫氯噻嗪主峰保留時(shí)間的1.5倍，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，有關(guān)物質(zhì)應(yīng)符合下列要求:相對(duì)于氫氯噻嗪，苯并噻二嗪雜質(zhì)A的量應(yīng)不超過(guò)0.1%。

2 結(jié)果

2.1 專屬性試驗(yàn) 在選定的色譜條件下，輔料對(duì)光、熱較為穩(wěn)定;在酸、堿、氧化條件下有所降解，但保留時(shí)間均在苯并噻二嗪雜質(zhì)A前，不影響氫氯噻嗪雜質(zhì)測(cè)定。氫氯噻嗪對(duì)光較為穩(wěn)定;在熱的作用下，氫氯噻嗪雜質(zhì)增加;氧化條件下，降解增多，但產(chǎn)物均在2 min左右，不影響氫氯噻嗪雜質(zhì)測(cè)定;在堿的作用下略有降解，雜質(zhì)增大，并產(chǎn)生保留時(shí)間3.8 min的的雜質(zhì);在酸的作用下略有降解，雜質(zhì)增大，并產(chǎn)生保留時(shí)間7 min左右的雜質(zhì)，均不影響氫氯噻嗪與厄貝沙坦雜質(zhì)的測(cè)定。在選定的色譜條件下，輔料對(duì)有關(guān)物質(zhì)測(cè)定沒(méi)有干擾，降解產(chǎn)物與主成分可達(dá)基線分離，分離專屬性良好。

2.2 線性范圍和定量限 在0.076 ～1.222 μg/ml，苯并噻二嗪雜質(zhì)A的濃度與峰面積線性關(guān)系良好。上述系列濃度溶液中1號(hào)溶液進(jìn)樣10 μl，色譜峰的信噪比約為10，因此可確定苯并噻二嗪雜質(zhì)A的定量限為0.76 ng。見表1。

表1 苯并噻二嗪雜質(zhì)A濃度與峰面積的線性關(guān)系

2.3 苯并噻二嗪苯質(zhì)A回收率 見表2。

表2 苯并噻二嗪雜質(zhì)A回收率測(cè)定

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 該方法測(cè)定苯并噻二嗪雜質(zhì)A的重復(fù)性良好。見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 穩(wěn)定性 樣品溶液的穩(wěn)定性良好。見表4。

2.6 三批樣品測(cè)定 見表5。

表4 苯并噻二嗪雜質(zhì)A檢測(cè)的樣品溶液的穩(wěn)定性

表5 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)對(duì)不同配比的甲醇-水、乙腈-水系統(tǒng)作流動(dòng)相進(jìn)行了考察，結(jié)果主峰的峰形較寬，結(jié)果以pH值3.0磷酸鹽緩沖液-甲醇-乙腈(60∶20∶20)為流動(dòng)相峰形較好，理論板數(shù)較高，并使主峰與各雜質(zhì)及降解產(chǎn)物得到基線分離，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果滿意。

3.2 有關(guān)物質(zhì)苯并噻二嗪雜質(zhì)A的研究 參照美國(guó)藥典USP32和USP34中氫氯噻嗪原料及片劑中苯并噻二嗪雜質(zhì)A作為主要控制雜質(zhì)指標(biāo)，因此在氫氯噻嗪分散片中對(duì)有關(guān)物質(zhì)苯并噻二嗪雜質(zhì)A進(jìn)行了限度控制。氫氯噻嗪分散片中引入有關(guān)物質(zhì)苯并噻二嗪雜質(zhì)A的限度控制達(dá)到國(guó)內(nèi)先進(jìn)水平.

1 孫國(guó)慶，平其能，繆玉山，等.RP－HPLC法測(cè)定氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪及其有關(guān)物質(zhì)的含量.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1996，27:28-29.