高效液相色譜法測定婦科消炎顆粒中芍藥苷的含量

馬涵濤 謝秀娟

婦科消炎顆粒是我院開發(fā)的中藥新制劑，由赤芍、三棱等組成，具有活血化瘀，消炎止痛的功效，主要適用于婦科各類炎癥等。赤芍為方中主藥，赤芍有效成分為芍藥苷。本文采用高效液相色譜法測定婦科消炎顆粒中芍藥苷的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供了快捷準確的方法，獲得滿意的效果。

1 儀器與材料

日本島津LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測器，C-R6A處理機。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110736-200732，供含量測定用)，婦科消炎顆粒(本院制劑室提供，批號 20110305，20110316，20110323);甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，實驗室用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Shim-pack CLC-ODS(150 mm×6 mm)，流動相:乙腈-水(16∶65)，檢測波長 230 nm［1］，柱溫:室溫;流速:1 ml/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 芍藥苷對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成0.5 g/L溶液作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取婦科消炎顆粒5 g，研成細粉，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，放置過夜，超聲處理40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 仿照供試品溶液的制備方法制得缺赤芍的陰性對照溶液。

2.3 專屬性實驗 分別吸取對照品溶液、供試品溶液、缺赤芍的陰性對照溶液各5 μl，按以上色譜條件分別進樣測定。結(jié)果，赤芍苷對照品保留時間約為9 min，陰性對照溶液在該時間無吸取峰，供試品溶液在該時間有吸取峰。

2.4 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對照品溶液2，4，6，8，10，12 ml分別置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各進樣5 μl測定。以對照品進樣量C為橫坐標，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標，繪制標準曲線，結(jié)果芍藥苷在進樣量0.2～1.2 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為A=819.05C+43.51，r=0.9999。

2.5 精密度試驗 芍藥苷峰面積的RSD為1.3%(n=5)

2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一份供試品溶液5 μl，分別在0，1，2，4，6 h進樣后測定，結(jié)果芍藥苷峰面積基本不變，RSD為0.97%。

2.7 重復性試驗 取同一批樣品(批號20110305)5份，分別按樣品測定法測定，結(jié)果平均含量為2.245 mg/g，RSD為1.2%。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知芍藥苷含量的婦科消炎顆粒6份，每份1 g，分別精密加入芍藥苷對照品適量，按2.2.2項供試品溶液的制備方法處理，從“置100 ml錐形瓶中……”起操作，依法測定，計算回收率。結(jié)果平均回收率為100.4%，RSD為1.6%。

2.9 樣品含量測定 取3個批號樣品，分別精密吸取對照品溶液與樣品溶液各5 μl，注入液相色譜儀，測定，外標法計算含量，即得。每批樣品平均測定3次，結(jié)果含量為2.19 mg/g，RSD 為0.76%。

3 討論

經(jīng)比較甲醇-水、乙腈-磷酸二氫鉀［2］、乙腈-水［3］、甲醇-0.5 mol/L磷酸二氫鉀溶液［4］等流動相的分離效果，結(jié)果表明本文采用的乙腈-水的分離效果較好，保留時間適當。

分別對樣品進行了甲醇索氏回流提取、甲醇超聲處理等探索，結(jié)果以甲醇超聲處理方法為最佳。

經(jīng)多批樣品中芍藥苷的含量測定表明，該方法快速簡便，結(jié)果準確，重現(xiàn)性好，靈敏度高，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

［1］ 中國藥典委員會.中國藥典.2005年版.一部

［2］ 于開紅.高效液相色譜法測定偏癱康復丸中芍藥苷含量.中國藥師，2010，13(2):297.

［3］ 王曉飛，等.高效液相色譜法測定開元顆粒中芍藥苷含量.中國藥師，2008，11(4):431.

［4］ 李水清.HPLC法測定十二太保丸中芍藥苷的量.中國藥師，2008，11(9):1078.