四關(guān)穴埋線對AD大鼠學習記憶能力和腦海馬AchE、Ach的影響*

楊進廉茍春雁田豐瑋楊智

（1.重慶市中醫(yī)院，重慶400021；2.重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院，重慶402360）

阿爾茨海默病（AD）發(fā)病率高，是當今神經(jīng)疾病中研究的難點與熱點。目前臨床研究證明針刺治療老年性癡呆有確效，但對于中晚期老年癡呆的治療療效卻均不理想。穴位埋線治療和預(yù)防老年性癡呆療效較好，但報道不多，對其治療機理更是鮮有研究。本實驗對AD的治療作用和機制進行了研究。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物SD大鼠，18月齡，清潔級，體質(zhì)量450～550 g，雌雄各半，許可證號：SCXK（川）2008-11，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供。動物在實驗前適應(yīng)性馴養(yǎng)1周，雌雄分籠飼養(yǎng)，自由攝食、飲水。

1.2 主要實驗試劑D-半乳糖（上海伯奧生物科技有限公司，批號20100217），氯化鋁（成都科龍化工試劑廠，批號20090712），AchE檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號20110626），Ach檢測試劑盒（ELISA法）產(chǎn)自RD公司，批號20110705。

1.3 主要實驗儀器通道式水迷宮：由無色有機玻璃制成，水深0.4 m，水溫控制在22～25℃之間。本裝置共設(shè)4個盲端，終點有臺階，動物可通過臺階上岸躲避溺水威脅，由中國醫(yī)學科學院藥物所研制。酶標儀（法國西蒙公司），低溫離心機（美國貝克曼公司），Varioskan Flash全波長掃描式多功能讀數(shù)儀（美國Thermo公司）。

1.4 實驗方法 參照文獻［1］以D-半乳糖和AlCl3制備老年癡呆動物模型。取18月齡SD大鼠48只，隨機分為空白對照組、模型對照組、針刺組、穴位埋線組，每組12只。除空白對照組外其余各組動物均腹腔注射D-半乳糖48 mg/kg，同時灌胃2%AlCl3水溶液2 mL/只，每日1次，連續(xù)30 d，空白對照組采用等體積生理鹽水腹腔注射和灌胃。在造模的同時開始治療。穴位埋線組選用“四關(guān)穴”（即雙合谷、雙太沖），取穴標準參照文獻［2］中大鼠穴位定位標準。使用三角針埋線法的改良方法 ，采用30號紫色醫(yī)用羊腸線，讓帶線的針前后貫通該穴，埋入大鼠體內(nèi)約2～3 mm，剪斷兩頭斷端方法 埋線，每10日埋線1次，連續(xù)3次。針刺治療組選用“四關(guān)穴”，以30號1寸不銹鋼毫針斜刺，刺入0.2寸，然后連接電針儀（型號G-6805，上海產(chǎn)），采用疏密波，頻率80～100 Hz，大小以大鼠能承受為度，20 min后出針。電針治療均于每日上午9時～11時進行，20 min/次，每日1次，連續(xù)治療30 d。造模25 d后進行水迷宮訓(xùn)練，訓(xùn)練前將大鼠置于終點附近，讓其自行爬臺2次。訓(xùn)練時將大鼠放在起點后，記錄其進入盲端的次數(shù)（錯誤次數(shù)）及到達終點所需的時間（游出時間）。每次完成后休息1 min，每只大鼠每天訓(xùn)練10次。訓(xùn)練第1日路徑包括2個盲端，第2日包括3個盲端，第3日、4日、5日均為4個盲端，實驗數(shù)據(jù)以第5日為準。設(shè)定總時間為3 min，超過3 min不能游出者按3 min計。以進入盲端次數(shù)、到達終點所需時間來衡量大鼠學習、記憶的能力。完成水迷宮實驗后，斷頭處死大鼠，取出大腦，在冰浴下分離出海馬組織，稱重，冰浴下超聲勻漿，制成10%勻漿液，3000 rpm低溫離心10 min，取上清液，按試劑盒說明書方法 檢測乙酰膽堿酯酶（AchE）和乙酰膽堿（Ach）。

2 結(jié)果

相較空白對照組，模型組大鼠精神狀態(tài)差，動作遲緩，進食減少。針刺組和穴位埋線組大鼠較模型組有一定的改善。實驗期間模型組死亡1只，針刺組死亡2只。

2.1 各組水迷宮測試結(jié)果 比較動物在水迷宮游出時間越短、錯誤次數(shù)越少，反映動物學習記憶能力越強。由表1可知，空白對照組的游出時間和錯誤次數(shù)顯著低于模型對照組（P＜0.01），表明模型對照組動物學習和記憶能力下降。與模型組相比，針刺組和穴位埋線組游出時間和錯誤次數(shù)顯著降低（P＜0.05或0.01），表明針刺和穴位埋線治療能提高AD大鼠的學習和記憶能力。

表1 針刺和穴位埋線治療對AD大鼠學習記憶能力的影響（±s）

表1 針刺和穴位埋線治療對AD大鼠學習記憶能力的影響（±s）

與模型組相比，*P＜0.05；**P＜0.01；與對照組比較，△P＜0.05；△△P＜0.01。下同。

組別n游出時間（秒）錯誤次數(shù)（次）空白組1217.34±8.26**2.04±1.33**模型組1157.29±18.13△△5.84±1.81△△針刺組1040.31±16.42*△△4.27±1.26*△穴位埋線組1238.76±19.13*△△4.09±1.76*△

2.2 各組大鼠腦海馬組織Ach和AchE水平比較見表2。由表2可知，模型組大鼠腦海馬組織AchE活性顯著高于空白對照組（P＜0.01），Ach含量顯著低于空白對照組（P＜0.01），表明AD大鼠腦海馬組織AchE活性升高而Ach含量下降。與模型組相比，針刺組和穴位埋線組腦海馬組織AchE活性雖有降低作用趨勢，但無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），Ach含量均顯著高于模型對照組（P＜0.05），表明針刺和穴位埋線治療對AD大鼠腦海馬組織AchE活性無明顯影響，但能明顯提高Ach含量。

表2 針刺和穴位埋線治療對AD大鼠腦內(nèi)Ach和AchE的影響（±s）

表2 針刺和穴位埋線治療對AD大鼠腦內(nèi)Ach和AchE的影響（±s）

組別nAchE（U/g）Ach（pmol/g）空白組1245.62±14.95**1.95±0.23**模型組1186.84±32.81△△0.88±0.22△△針刺組1069.47±22.26△1.23±0.37△△*穴位埋線組1271.34±31.96△1.14±0.30△△*

3 討論

目前治療AD方法 多樣，手段頻出，但對于中晚期癡呆的治療療效均不太理想，這就為臨床早期治療及預(yù)防AD提出了要求。埋穴療法利用其特殊的針具與所埋之羊腸線，產(chǎn)生了較一般針刺方法 更為強烈的針刺效應(yīng)，有“制其神，令其易行”和“通其經(jīng)脈，調(diào)其氣血”的作用，且治療一次持續(xù)時間長，約2～4周。能方便臨床開展早期防治［3-4］。

本實驗采用衰老和鋁中毒的多因素損害制備AD模型，更貼近AD繁雜的病因和病理變化過程，在這種模型上研究針刺和穴位埋線的治療作用及機理更加可靠。現(xiàn)代研究表明，AD腦內(nèi)Ach含量減少，AchE活性升高，學習和記憶能力明顯下降。本實驗結(jié)果 表明，與空白對照組相比，模型組大鼠的學習和記憶能力明顯下降，腦海馬組織的Ach明顯降低，AchE活性明顯升高。同時提示，Ach減少程度與學習記憶障礙的嚴重性呈一定的正相關(guān)，這與文獻報道相符［5-6］。而針刺、穴位埋線治療可明顯提高AD大鼠的學習和記憶能力，提高腦海馬組織Ach含量，但對AchE影響不明顯。這證實了針刺和穴位埋線治療能改善中樞膽堿能功能。依據(jù)本實驗的研究結(jié)果 ，兩者治療效果相仿且治療機理可能與激活中樞膽堿能功能有關(guān)。

［1］ 董洪濤，房恭.多因素AD動物模型的建立及針刺對其學習記憶功能的影響［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2002，36（5）：43.

［2］ 余曙光，郭義.實驗針灸學［M］.5版.上海：上海科學技術(shù)出版社，2009：22-24.

［3］ 任曉艷.穴位埋線的源流及其機理探討［J］.中國醫(yī)藥學報，2004，19（12）：759.

［4］ 曾憲鋒.針刺“四關(guān)穴”對老年癡呆模型大鼠學習能力影響的研究［J］.武警醫(yī)學，2008，19（9）：781.

［5］ 程海英，程東旗.針灸治療老年癡呆癥的研究進展［J］.北京中醫(yī)，2006，25（5）：298.

［6］ 李前，朱振霞，孫曼霽.乙酰膽堿酯酶與老年性癡呆關(guān)系的研究進展［J］.中國老年學雜志，2002，22（4）：325.