姜黃素對大鼠急性胃黏膜損傷的保護作用及機制研究

鄭啟會 張相斌

（重慶市江津區中心醫院，重慶 402260）

胃黏膜損傷是指胃黏膜在受到一定程度的損傷刺激后，胃黏膜的保護機制受損，從而產生以炎性或萎縮性病變為主的病理生理過程，胃黏膜損傷是急慢性胃炎、消化性潰瘍重要的發病機制。近年研究報道姜黃素具有抗感染、抗炎、抗氧化等藥理作用，對胃腸道、肝臟、心血管系統［1］及呼吸系統［2］等均有顯著的保護作用，本研究中通過建立急性胃黏膜損傷大鼠模型，觀察姜黃素對胃黏膜的保護作用及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級SD大鼠，共40只，雌雄各半，體質量160～200 g，購自湖南省實驗動物中心。飼養室溫度（24±1）℃，相對濕度55%～65%，12 h明暗交替。自由攝食及飲水，普通飼料喂養。

1.2 藥物及試劑 姜黃素粉劑，1 g/包（南京澤朗生物制藥有限公司）。鹽酸雷尼替丁膠囊，規格0.15 g（廣州星群（藥業）股份有限公司）。乙酸、生理鹽水均由本院檢驗科提供。大鼠白細胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子 α（TNF-α）、白細胞介素 4（IL-4）試劑盒購自武漢博士德生物有限公司。

1.3 分組及造模 40只大鼠按照隨機數字表法完全隨機分為正常組、模型組、姜黃素組、雷尼替丁組，每組10只。適應喂養1周后，采用改良Okabe乙酸涂抹法［3］制作胃黏膜損傷模型：以3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉（40 mg/kg）后，打開腹腔，游離出胃，以直徑5 mm的濾紙浸過95%乙酸黏貼在胃前壁胃小彎角切跡下方約5 mm處的漿膜面上，持續30 s，2次后縫合腹壁，關閉腹腔。術后當日給予飲水，次日起自由飲食。姜黃素組大鼠給予姜黃素20 mg/（kg·d）灌胃，雷尼替丁組給予雷尼替丁藥液30 mg/（kg·d）灌胃，正常組和模型組均給予等量生理鹽水灌胃，連續給藥7 d。

1.4 標本采集與檢測 連續給藥7 d后，禁食禁水12 h后處死。剪開腹腔采用一次性負壓采血針采集腹主動脈血后，迅速取出胃，沿胃大彎剖開，用冰生理鹽水沖洗，平展于濾紙上按GUTH法計算胃黏膜損傷指數。動脈血靜置30 min后，-4℃低溫離心，3000 r/min，離心15 min，收集血清-20℃冰箱保存待測。 （1）胃黏膜損傷指數：按照 GUTH 法［4］進行。 （2）血清 IL-6、TNF-α、IL-4水平：酶聯免疫吸附法測定血清IL-6、TN-α、IL-4水平。

1.5 一般情況觀察 實驗過程中每日密切觀察大鼠的一般狀態，如飲食量、生長體態、糞便性狀、精神狀態、被毛色澤、活動狀態等。

1.6 統計學處理 應用SPSS13.0統計軟件。數據以（±s）表示，多組間均數比較采用單因素方差分析，方差齊用LSD法，方差不齊用 Dunnett T3，檢驗水平 α＝0.05。

2 結 果

2.1 一般情況 造模大鼠均出現食欲不振，嗜臥，便溏，精神萎靡，生長遲緩，較正常組明顯滯后。開始給藥后，雷尼替丁組、姜黃素組與模型組比較，精神均逐漸有所好轉，食量增加，毛色光澤，大便性狀逐漸正常。但模型組大鼠食欲雖逐漸有所增加，但明顯不及雷尼替丁組和姜黃素組，毛色晦暗，皮膚松弛。

2.2 各組胃黏膜損傷指數比較 見表1。與正常組比較，模型組胃黏膜損傷指數顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，雷尼替丁組與姜黃素組的損傷指數均顯著低于模型組（P＜0.05或0.01）。姜黃素組損傷指數與正常組比較無顯著差異（P＞0.05）。

表1 各組胃黏膜損傷指數比較（±s）

表1 各組胃黏膜損傷指數比較（±s）

與正常組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01；與雷尼替丁組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

組 別 n 胃黏膜損傷指數正常組 10 10.26±5.21模型組 10 28.79±6.38△△雷尼替丁組 10 21.56±6.41△△▲姜黃素組 10 12.87±5.73▲▲**

2.3 各組血清IL-6、TNF-α、IL-4水平的比較 見表2。模型組大鼠與正常組相比，IL-6、TNF-α 水平顯著升高（P＜0.01），IL-4水平顯著降低（P＜0.05）。與模型組比較，姜黃素組IL-6、TNF-α水平顯著降低（P＜0.01），IL-4 水平顯著升高（P＜0.01），雷尼替丁組 IL-6水平顯著降低，IL-4水平顯著升高 （P＜0.01），而TNF-α無顯著變化（P＞0.05）。姜黃素組IL-6、TNF-α水平較雷尼替丁組更低（P＜0.05或 0.01），而 IL-4水平更高（P＜0.05）。

表 2 各組血清 IL-6、TNF-α、IL-4 水平比較（pg/mL，±s）

表 2 各組血清 IL-6、TNF-α、IL-4 水平比較（pg/mL，±s）

組 別 n IL-6 TNF-α IL-4正常組 10模型組 10雷尼替丁組 10 15.39±2.51 16.28±2.49 4.41±0.4725.82±3.16△△ 20.21±2.36△△ 4.05±0.23△17.91±3.25△▲▲ 18.82±2.33△ 4.48±0.46▲▲姜黃素組 1014.87±3.84▲▲* 16.13±2.15▲▲**4.91±0.35△▲▲*

3 討 論

機體在正常狀態下，胃黏膜的保護/損傷機制處于動態平衡，然而，當受到一定程度的損傷刺激后，胃黏膜的保護機制受損，從而使保護/損傷機制失衡［5］，產生以炎性或萎縮性病變為主的一系列病理生理過程，最終導致胃黏膜的損傷。胃黏膜的保護機制包括黏液-碳酸氫鹽的屏障作用、NO及前列腺素 （PGs）的抗氧化作用及三葉因子（TFFs）的黏膜修復作用等。損傷機制包括胃酸及胃蛋白酶的侵蝕、細胞的氧化應激及炎癥反應。其中炎癥反應在胃黏膜損傷機制中有重要作用［6］。TNF-α、IL-6、IL-10、IL-4是重要的炎癥細胞因子。其中，TNF-α可以上調血管內皮細胞和白細胞黏附分子的表達，增加白細胞的炎性滲出。激活單核-吞噬細胞、中性粒細胞等，增強吞噬殺傷功能，促進炎癥介質的釋放。而IL-6可參與淋巴細胞的增殖分化、炎癥反應等多種生物學功能，IL-4是機體重要的抗炎因子，由Th2細胞分泌，可單獨維持Th2細胞及B細胞的生長和分化，并可通過負調節機制抑制Th1細胞介導的免疫反應而發揮抗炎作用。因此，當胃黏膜受到外界刺激或應激時，TNF-α、IL-6等促炎因子大量釋放，而IL-4的抗炎作用受到抑制，從而表現為組織的炎癥反應，因此，通過調節機體炎癥反應狀態對胃黏膜損傷可能起到治療作用。

姜黃素是從姜科植物姜黃中提取的一種黃色酸性酚類物質，是姜黃的主要藥理活性成分。現代藥理研究表明，姜黃素具有抗腫瘤、護肝、調節免疫、降脂及心血管保護作用。宋衛兵［7］報道姜黃素可以改善大鼠小腸炎模型腸黏膜的通透性，下調轉錄因子NF-κB，抑制 iNOS、COX-2活性，從而減輕腸黏膜的脂質氧化。而對大鼠食管癌模型的促發階段及發展階段，姜黃素亦有顯著的抑制作用［8］。蔣麗軍等［4］研究姜黃素可有效抑制胃潰瘍模型大鼠胃壁細胞H+-K+-ATP酶活性和mRNA基因表達，減少胃酸分泌，減輕胃黏膜損傷。

本研究中，重點研究了姜黃素對急性胃黏膜損傷中炎癥反應的影響。結果顯示，經干預后，模型組大鼠的胃黏膜損傷指數顯著升高，IL-6、TNF-α 水平顯著升高（P＜0.01），而 IL-4 水平顯著降低，說明，模型組大鼠胃黏膜損傷部位存在較嚴重的炎癥反應，導致機體促炎因子水平的升高，抗炎因子水平的下降，保護/損傷（抗炎/促炎）機制失衡，導致造模大鼠一系列的體征表現。而正常組的胃黏膜損傷指數的存在可能與灌胃操作有關。干預結束后，姜黃素組與陽性對照藥雷尼替丁組相比，IL-6、TNF-α水平更低，IL-4水平更高，說明，姜黃素對機體炎癥介質的調節作用更加顯著，而姜黃素組大鼠的胃黏膜損傷指數較雷尼替丁組更低，可能與姜黃素更加顯著的抗炎作用相關。

綜上，姜黃素對大鼠的急性胃黏膜損傷有良好的保護作用，其機制可能與抑制IL-6、TNF-α的釋放，增加IL-4水平有關。

［1］李琦，金劍，許穎.姜黃素的藥理作用及其臨床應用進展［J］.現代中西醫結合雜志，2012，21（12）：1366-1368.

［2］李慧婷，林文前，譚紅鷹，等.姜黃素減輕兔單肺通氣導致的肺損傷［J］.中山大學學報：醫學科學版，2011，32（6）：735-740.

［3］楊曉軍，呂東勇，朱煥金，等.健脾益氣方藥對大鼠急性胃黏膜損傷的保護與修復作用［J］.河南中醫，2010，30（4）：351-353.

［4］蔣麗軍，劉志峰，李玫，等.姜黃素對大鼠實驗性胃潰瘍作用的研究［J］.臨床兒科雜志，2010，28（10）：967-970.

［5］沈貴芳，趙偉春，張文詩，等.胃黏膜損傷防御機制的研究進展［J］.世界中西醫結合雜志，2011，6（3）：257-260.

［6］譚琥，蔡光先.胃潰瘍炎癥機制及中醫藥防治進展［J］.湖南中醫藥大學學報，2009，29（1）：72-74.

［7］宋衛兵，張振書，肖冰.姜黃素對大鼠小腸炎組織MPO，SOD作用的影響［J］.現代消化及介入診療，2008，13（1）：14-17.

［8］鄭珺，陳紅.姜黃素的藥理作用及臨床應用［J］.海峽藥學，2011，23（3）：84-87.