新生兒金黃色葡萄球菌敗血癥早期診斷和治療的進(jìn)展

許國慶

（廣東省惠州市第二婦幼保健院，廣東 惠州 516001）

新生兒敗血癥是一種常見的新生兒感染性疾病，雖然近年來研究發(fā)現(xiàn)表皮葡萄球菌的感染率逐年上升，但是金黃色葡萄球感染仍是導(dǎo)致敗血癥發(fā)生的最常見原因[1]。該病發(fā)病兇險，具有較高病死率，為12%～20.5%[1]。早期診斷及治療是決定疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵因素。現(xiàn)在診斷該疾病的金標(biāo)準(zhǔn)為血液培養(yǎng)，但是該方法檢出率低，檢查時間長，極大影響患兒的治療效果。本組通過進(jìn)行大量的文獻(xiàn)檢索，對該病診斷及治療方法的新進(jìn)展進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)來源

本組研究主要采用文獻(xiàn)檢索的方法對相關(guān)新進(jìn)展進(jìn)行研究。其中所得資料主要來源于CNKI數(shù)據(jù)庫及PubMed數(shù)據(jù)庫。所用到的檢索詞主要有金黃色葡萄球菌敗血癥、新生兒、診斷及治療、早期等。所得文獻(xiàn)類型主要有總數(shù)、論著及臨床研究等。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

本組研究中資料的納入標(biāo)準(zhǔn)主要為：①觀點(diǎn)明確、論據(jù)可靠。②內(nèi)容與新生兒金黃色葡萄球菌敗血癥的診斷及治療新進(jìn)展密切相關(guān)。③以近5年內(nèi)發(fā)表的文獻(xiàn)為主，排除其中相關(guān)動物實(shí)驗(yàn)、研究內(nèi)容不清、論據(jù)不明確的文獻(xiàn)。

1.3 質(zhì)量評估

本組研究中所得資料的篩選由2名專業(yè)人士進(jìn)行，篩選過程中專業(yè)人員均仔細(xì)閱讀所檢測論文的摘要及全文，嚴(yán)格按照納入標(biāo)準(zhǔn)選擇所需文獻(xiàn)，對于其中意見出現(xiàn)分歧者進(jìn)行討論，得出統(tǒng)一結(jié)論。

2 結(jié) 果

本組初次檢索所得文獻(xiàn)134篇，經(jīng)篩選后得到24篇。其中記載的主要診斷方法為通過原位雜交法檢測靜脈血中性粒細(xì)胞中金黃色葡萄球菌中的DNA。研究發(fā)現(xiàn)該方法在較短時間內(nèi)即可檢出金黃色葡萄球菌。治療方面仍然沿用藥敏試驗(yàn)所得結(jié)果進(jìn)行。

3 討 論

新生兒敗血癥是一種常見的新生兒感染性疾病，雖然近年來研究發(fā)現(xiàn)表皮葡萄球菌的感染率逐年上升，但是金黃色葡萄球感染仍是導(dǎo)致敗血癥發(fā)生的最常見原因。該病發(fā)病兇險，具有較高病死率，為12%～20.5%。早期診斷及治療是決定疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵因素。文獻(xiàn)中記載的診斷新方法為過原位雜交法檢測靜脈血中性粒細(xì)胞中金黃色葡萄球菌中的DNA，該方法進(jìn)行檢查時需要的試劑及儀器主要有：Hybrisep試劑盒、Hybfism雜交儀、，BacT/AIERT PF瓶、全自動血培養(yǎng)儀及顯微鏡及上、下游引物和探針。其中所使用的上游引物為[2]：5’-TGTGTAGCGGTGAAATGCG-3’(690～708 bp)，所研究中使用的下游引物的基因序列為為[2]5’-CATCGTTACGGCGTGGAC-3 ’(810～829 bp)，研究中所用探針的基因序列為[2]5’-TCTAATCCTGTT TGATCCCCACG 3’(778～800 bp)。檢查時[3]需要采集2ml患兒的靜脈血，分理出其中的中性粒細(xì)胞并進(jìn)行固定，并通過熱處理方法對DNA進(jìn)行變性處理。將特異性DNA探針用地高辛進(jìn)行標(biāo)記，與固定好的細(xì)菌DNA雜交后，與被ALP標(biāo)記好的抗體相結(jié)合結(jié)合，通過硝基四氮唑藍(lán)/5，溴-4，氯-3，吲哚基磷酸染色，結(jié)果為陽性時在細(xì)胞中可見及青紫色顆粒，檢測過程中尚需用及熒光定量-PCR法對細(xì)菌的DNA進(jìn)行測定，通過設(shè)立對照組進(jìn)行結(jié)果的判定。進(jìn)行血液感染判定時所需判定標(biāo)準(zhǔn)為：若3次血培養(yǎng)中2次或2次以上結(jié)果為陽性或血液熒光定量-PCR檢查結(jié)果為陽性時均可判定為金黃色葡萄球菌感染所致敗血癥判若3次血培養(yǎng)中僅有1次檢查結(jié)果為陽性或熒光定量-PCR檢查結(jié)果為陰性，判斷為其他污染性細(xì)菌。

研究表明[4]，近年來分子生物學(xué)檢查是目前臨床實(shí)踐中微生物檢查診斷中最有價值的一種。文獻(xiàn)記載中所應(yīng)用的原位雜交法具有許多優(yōu)點(diǎn)：不需要進(jìn)行分離培養(yǎng)，可直接由患者的靜脈血中分離出中性粒細(xì)胞，可克服血液細(xì)菌培養(yǎng)時耗時長的缺點(diǎn)，并且不會因抗生素的應(yīng)用而受影響。初次之外，部分資料就熒光定量-PCR的優(yōu)點(diǎn)進(jìn)行總結(jié)主要有[4]：特異性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但是該方法對環(huán)境及設(shè)備條件要求較高，只有在具有一定經(jīng)濟(jì)實(shí)力的醫(yī)院中才能應(yīng)用。因此其推廣應(yīng)用受到一定限制。

[1]Forrest GN,Mehta S,Weekes E,et a1.Impact of rapid in situ hybridization testing on coagulase-negative staphylococci positive blood cultures[J].J Antimicrob Chemother,2006,58(1):154-158.

[2]Flayhart D,Borek AP,Wakefield T,et a1.Comparison of BACTEC PLUS blood culture media to BacT/Alert FA blood culture media for detection of bacterial pathogens in samples containing therapeutic levels of antibiotics[J].J Clin Microbiol,2007,45(3):816-82l.

[3]德全,季海生.BacT/Alert3D血培養(yǎng)分級報(bào)告的臨床應(yīng)用研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2006,16(8):955-957.

[4]王沛,何永貴.金黃色葡萄球菌敗血癥早期診斷方法的建立[J].中華傳染病雜志(臨床論著),2009,27(11):682-684.