HIV感染者和AIDS患者結核分枝桿菌液體培養效果研究

李濤 王冬梅 劉二勇 劉飛鷹 姚嵩 許琳 徐吉英 吳衛東 周林

艾滋病病毒抗體陽性的肺結核患者，痰涂片陽性率低，癥狀、體征和影像學檢查不典型，常規的痰涂片檢查和X線胸片檢查不能滿足HIV感染者與AIDS患者中結核病早期診斷的需要［1］。分枝桿菌液體培養可提高HIV感染者與AIDS患者結核病診斷的敏感度和特異度［2－5］。WHO推薦采用液體培養的方法用于HIV感染者與AIDS患者合并肺結核的診斷［6］。為探討液體培養在我國HIV感染者與AIDS患者合并結核病早期診斷中應用的可行性，2011年6月至2012年5月中國全球基金結核病項目在安徽、河南、新疆、廣西、云南5個省、自治區中HIV疫情較高的地市開展了分枝桿菌液體培養診斷試點工作。

資料和方法

一、實驗組

1.研究地區：選取安徽等5個省、自治區中開展中國全球基金結核病項目Mtb與HIV雙重感染防治工作的10個地市，其中云南省2個地市數據因需要進一步確認未納入分析，實際納入8個地市。

2.樣本納入：2011年6月至2012年5月中國全球基金結核病項目在安徽省胸科醫院，廣西南寧第四人民醫院，廣西柳州龍潭醫院，云南省大理州、保山市、臨滄市疾病預防控制中心，河南南陽市疾病預防控制中心，新疆維吾爾自治區疾病預防控制中心，從同期可隨訪的15 199例HIV感染者與AIDS患者中，選取符合納入標準的2162例標本納入。

3.納入標準：當年新發現和既往隨訪的HIV感染者與AIDS患者中符合以下條件之一者：（1）有結核病可疑癥狀者：咳嗽、咯痰2周或伴咯血、胸痛等；（2）X線胸片檢查異常者，需要除外活動性肺結核的患者；（3）涂陽肺結核的密切接觸者；（4）結核菌素試驗陽性者；（5）肺外結核患者；（6）其他臨床上需要除外活動性肺結核診斷的患者。

4.儀器設備：美國Becton Dickinson（BD）公司BACTECTMMGITTM960操作系統，美國BD公司MGIT手動判讀儀，法國生物梅里埃公司Bac T/ALERT 3D微生物檢測系統。

5.實驗方法：液體培養是基于檢測微生物代謝而判斷是否有細菌生長的，液體培養基由分枝桿菌生長更快、更易檢出的液體肉湯培養基組成。本次實驗各單位根據情況自行選擇上述儀器設備中要求的3種儀器的一種，依照《分枝桿菌液體培養操作手冊》［7］中規定的操作步驟進行檢測。

二、對比資料

1.資料來源：中國全球基金結核病項目信息管理系統季度報表。

2.對比方法：使用常規方法（癥狀篩查、痰涂片、X線胸片檢查等）對HIV感染者與AIDS患者進行結核病診斷。

3.內容：（1）收集2011年實驗組所在5個省、自治區的8個地市中，全部15 199例可隨訪的HIV感染者與AIDS患者，通過結核病癥狀篩查、痰涂片和X線胸片檢查診斷出的結核病情況。（2）收集2011年全國開展了全球基金Mtb與HIV雙重感染防治項目工作的16個省（自治區、直轄市）中，全部67 186例可隨訪的HIV感染者與AIDS患者，通過結核病癥狀篩查、痰涂片和X線胸片檢查診斷出的結核病情況。

收集同期實驗組所在8個地市及全國全球基金結核病項目Mtb與HIV雙重感染防治16個項目地區HIV感染者與AIDS患者中結核病患者發現資料進行分析。

三、統計學方法

應用SPSS 17.0進行數據處理，統計學分析采用χ2檢驗，P＜0.0125（矯正后）為差異有統計學意義。

結 果

一、液體培養的陽性率

本研究期間，5個省、自治區的8個地市可隨訪的15 199例HIV感染者與AIDS患者中，選取符合納入標準（疑似患有結核病的患者）的2162例開展液體培養，其中結果為陽性的306例，總體陽性率14.2%（表1）。

表1 8個地市實驗組液體培養情況

二、8個地市HIV感染者與AIDS患者中結核病診斷情況

2011年，實驗組所在5個省、自治區的8個地市可隨訪的15 199例HIV感染者與AIDS患者中，通過結核病癥狀篩查、痰涂片和X線胸片檢查共診斷結核病793例，總體HIV感染者和AIDS患者中結核病診斷率為5.2%（表2）。

表2 8個地市HIV感染者和AIDS患者中結核病診斷情況

三、全國2011年HIV感染者和AIDS患者中結核病診斷情況

全球基金結核病項目的季度報表中，在2011年全國開展的全球基金Mtb與HIV雙重感染防治項目工作的16個省（自治區、直轄市）中，共有可隨訪HIV感染者和AIDS患者67 186例，通過結核病癥狀篩查、痰涂片和X線胸片檢查共診斷結核病患者1525例，HIV感染者和AIDS患者中結核病診斷率為2.3%。

四、液體培養與常規診斷方法的檢出情況比較

實驗組樣本陽性率14.2%（306/2162），明顯高于同地區同期全部HIV感染者與AIDS患者中的總體結核病診斷率5.2%（793/15 199），差異有統計學意義（χ2＝254.9，P＜0.0001）；實驗組陽性率與同地區總體結核病診斷率也都分別高于全國同期HIV感染者與AIDS患者的結核病診斷率（2.3%），差異均有統計學意義（χ2值分別為1150.7、393.8，P值均＜0.0001）（表3）。

表3 不同組別雙重感染液體培養與常規診斷方法的檢出情況比較

討 論

一、液體培養檢出率較高

液體培養較常規結核病診斷方法在檢出率方面有較大優勢。本研究發現，開展液體培養的實驗組樣本陽性率為14.2%（306/2162），明顯高于全國同期HIV感染者與AIDS患者中的結核病診斷率（2.3%，1525/67 186），也高于同地區同期總體結核病診斷率（5.2%，793/15 199），差異均有統計學意義。表明液體培養與結核病癥狀篩查、痰涂片和X線胸片檢查等常規結核病檢查方法相比可以顯著提高在HIV感染者與AIDS患者中的結核病檢出率。

二、液體培養檢測速度較快

液體培養陽性檢出率高，而且能快速檢測結核分枝桿菌，儀器的需求相對靈活，如果采用手工判讀的方法，還可以繼續對陽性培養物做進一步液體藥敏實驗，縮短傳統藥敏周期，適合基層在開展HIV與Mtb雙重感染篩查工作中選用［8］。

三、液體培養有利于HIV感染者與AIDS患者中不典型結核病的早期診斷

HIV感染者與AIDS患者進行結核病早期診斷比較困難。隨著國家AIDS治療關懷力度加大，抗病毒治療提前和機會性感染預防的擴展，臨床表現不典型肺結核病例逐年增多，僅有胸部X線診斷結核患者占據了很高的比例［2］。推廣液體培養陽性檢測結核分枝桿菌，對于提高患者的發現率有積極意義。

四、液體培養相對于傳統固體培養方法的優勢

本次研究雖然沒有同時開展傳統固體培養方法的比較，但根據國內外相關文獻的報道，與傳統的固體培養相比，液體培養也具有較高的敏感度和特異度，液體培養的陽性率高于固體培養的陽性率在10%以上，同時較固體培養可縮短2～3周的診斷時間［1，9］。在成本方面，Mueller等［10］研究表明，液體培養與固體培養的總體費用大體相當。

五、液體培養的質量控制

本次研究期間，筆者也發現由于標本采集和操作處理不當等原因，部分地區出現了很高的樣本污染率，提示在實際工作中，需要系統培訓、嚴格的實驗室質量控制以保證結果的有效性。各個環節應嚴格按照操作規程進行，做到實驗前消毒，使用合格有效的試劑和前處理液，使用無菌實驗器具等。每天應對儀器進行系統檢測及維護，定時打印質量控制報告。同時，盡可能對污染的培養管做去污染處理，從而提高陽性率，降低污染率［7－8］。

［1］中國疾病預防控制中心結核病預防控制中心.結核分枝桿菌/艾滋病病毒雙重感染防治工作技術指導手冊.北京：人民衛生出版社，2010.

［2］于蘭，王黎明，唐志榮，等.HIV/AIDS患者合并活動性結核病的診斷及方法探討.中華檢驗醫學雜志，2009，32（4）：377－382.

［3］Dowdy DW，Louren?o MC，Cavalcante SC，et al.Impact and cost－effectiveness of culture for diagnosis of tuberculosis in HIV－infected Brazilian adults.PLoS One，2008，3（12）：e4057.

［4］Getahun H，Kittikraisak W，Heilig CM，et al.Development of a standardized screening rule for tuberculosis in people living with HIV in resource－constrained settings：individual participant data meta－analysis of observational studies.PLoS Med，2011，8（1）：e1000391.

［5］Getahun H，Harrington M，O’Brien R，et al.Diagnosis of smear－negative pulmonary tuberculosis in people with HIV infection or AIDS in resource－constrained settings：informing urgent policy changes.Lancet，2007，369（9578）：2042－2049.

［6］中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心.結核病/艾滋病臨床治療手冊.北京：人民衛生出版社，2005.

［7］中國疾病預防控制中心結核病預防控制中心.分枝桿菌液體培養操作手冊.北京：中國疾病預防控制中心結核病預防控制中心，2011.

［8］潘愛珍，柳正衛，張艷，等.手工判讀MGIT法檢測分枝桿菌的效果評價.疾病監測，2011，26（11）：911－913.

［9］蔡杏珊，謝敏娜，羅春明，等.MGIT及Bac T/Alert MP液體培養基檢測分枝桿菌效果的評價.國際檢驗醫學雜志，2011，32（21）：2469－2471.

［10］Mueller DH，Mwenge L，Muyoyeta M，et al.Costs and costeffectiveness of tuberculosis cultures using solid and liquid media in a developing country.Int J Tuberc Lung Dis，2008，12（10）：1196－1202.