食管黏膜上皮癌變過程中FHIT與增殖細胞核抗原的表達及臨床意義

錢如林 李向陽 蔡祖勛 賈向波

食管黏膜上皮癌變過程中FHIT與增殖細胞核抗原的表達及臨床意義

錢如林 李向陽 蔡祖勛 賈向波

目的探討食管黏膜上皮癌變過程中脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)基因與PCNA的表達及其臨床意義。方法 應用免疫組織化學SP法分別檢測FHIT在37例正常食管黏膜、非典型增生、食管鱗癌組織中的表達。結(jié)果食管鱗癌組織中FHIT蛋白陽性表達率43.2%(16/37)顯著低于非典型增生組70.3%(26/37)和正常食管黏膜組89.2%(33/37)(均P＜0.05)。食管鱗癌組織中PCNA的表達明顯高于非典型增生組織(P＜0.05);FHIT與PCNA的平均標記指數(shù)呈顯著負相關(rs=-0.583，P＜0.05)。食管鱗癌高、中分化組FHIT蛋白陽性表達率46.2%(12/26)顯著高于低分化組36.4%(4/11)(P＜0.05);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者FHIT蛋白陽性表達率39.3%(11/28)顯著低于無淋巴轉(zhuǎn)移組55.6%(5/9)，(P＜0.05)。結(jié)論PTEN在食管黏膜上皮癌變過程中有明顯缺失現(xiàn)象，在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，對其蛋白的檢測可作為判定食管鱗癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移能力的一項客觀指標。

食管腫瘤;脆性組氨酸三聯(lián)體基因;增殖細胞核抗原;免疫組織化學

脆性組氨酸三聯(lián)體(fragi1ehistidinetriad，F(xiàn)HIT)基因是抑癌基因，與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關，研究表明，F(xiàn)HIT在人類許多腫瘤組織或細胞系中呈現(xiàn)高頻率的異常缺失［1，2］。我們采用免疫組織化學法，檢測 FHIT在正常食管黏膜、非典型增生、食管癌切除標本組織中的表達，以及與增殖細胞核抗原(proliferating cellular nuclear antigen，PCNA)的相互關系，了解其在食管癌形成過程中的可能作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標本取自河南省胸科醫(yī)院2008年9月至2009年10月手術切除并經(jīng)病理證實的37例食管癌組織標本，均為鱗狀細胞癌。術前未行化療、放療。其中男25例，女12例，年齡37～78歲，平均年齡52.8歲。其中低分化11例，中分化12例，高分化14例;淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移9例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例。另取胃鏡室經(jīng)病理證實的正常食管粘膜組織和非典型增生組織作為對照。

1.2 免疫組織化學 每例標本經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，分別進行HE染色和免疫組化SP法染色。SP試劑盒及兔抗人FHIT多克隆抗體購自北京中山生物技術有限公司，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。免疫組化染色步驟嚴格按照試劑盒說明進行。

1.3 結(jié)果判斷標準 參考近期國外文獻［3］，觀察FHIT蛋白的分布，陽性強度和陽性率。先按染色強度評分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色，染色強度需與背景著色相對比;再按陽性細胞所占百分比評分：0分為陰性，1分為陽性細胞≤10%，2分為11% ～50%，3分為51% ～75%，4分為＞75%，染色強度與陽性細胞百分比的乘積≥2分為免疫反應陽性(+);余下為陰性(-)。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計處理，計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 FHIT蛋白的表達 FHIT特異性著色位于細胞胞漿內(nèi)，呈棕褐色。食管鱗癌組織中FHIT呈點片狀，多為弱陽性表達，陽性表達率為43.2%(16/37)，顯著低于非典型增生組70.3%(26/37)和正常食管黏膜組89.2%(33/37)(均P＜0.05)。食管鱗癌高、中分化組FHIT蛋白陽性表達率46.2%(12/26)顯著高于低分化組36.4%(4/11)(P＜0.05);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者FHIT蛋白陽性表達率39.3%(11/28)顯著低于無淋巴轉(zhuǎn)移組55.6%(5/9)，(P＜0.05)。

2.2 PCNA蛋白的表達 PCNA為胞核著色，間質(zhì)內(nèi)無表達，呈棕褐色。食管鱗癌組織中均有不同程度PCNA的陽性表達，PCNA標記指數(shù)為11.2% ～68.7%，非典型增生組織PCNA微弱陽性染色，PCNA標記指數(shù)＜5%，食管鱗癌組織中PCNA的表達明顯高于非典型增生組織(P＜0.05);FHIT與PCNA的平均標記指數(shù)呈顯著負相關(rs=-0.583，P＜0.05)。

3 討論

研究表明，在許多腫瘤組織中或腫瘤細胞株中，F(xiàn)HIT基因呈現(xiàn)多發(fā)性，廣泛性的純合性或雜合性缺失［4］，提示此基因的異常可能和腫瘤的發(fā)生有關。我們的研究顯示，食管鱗癌組織中FHIT呈點片狀，多為弱陽性表達，陽性表達率為43.2%，顯著低于非典型增生組70.3%和正常食管黏膜組89.2%。FHIT在癌組織中缺失率明顯高于癌旁組織和正常組織;這表明在食管癌發(fā)生發(fā)展過程中，F(xiàn)HIT基因的缺失或表達減弱可能增加了食管癌的易感性。Kitamura等［5］對75例食管鱗癌的研究顯示，隨著病理組織學變化的加重，F(xiàn)HIT蛋白的表達呈進行性減少或缺失。胡殿宇等［6］報道23癌旁不典型增生組織和39食管鱗癌組織中FHIT蛋白的陽性表達率分別為52.17%和28.21% ，均低于正常食管黏膜組織的89.74%。Ramesh等［7］的一項檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)肺支氣管上皮不典型增生及原位癌FHIT蛋白缺失率達93%，而正常支氣管上皮細胞均高表達FHIT蛋白。FHIT蛋白表達下調(diào)或缺失可能是食管鱗癌發(fā)生的早期事件，F(xiàn)HIT蛋白在食管鱗癌組織中表達的降低，使得抑制正常組織細胞惡性轉(zhuǎn)化的能力降低，細胞發(fā)生癌變、增殖能力增強，導致腫瘤的發(fā)生。本實驗證實，F(xiàn)HIT蛋白表達與食管鱗癌組織分化程度密切相關，惡性程度低，組織分化程度高，其蛋白高表達;而惡性程度高，組織分化差的癌組織，其蛋白不表達或表達弱，說明FHIT在食管鱗癌分化過程中起一定作用。本研究還發(fā)現(xiàn)FHIT蛋白表達與食管鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者FHIT蛋白陽性表達率46.4%顯著低于無淋巴轉(zhuǎn)移組55.6%。提示FHIT在食管鱗癌的發(fā)展浸潤轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。

PCNA是DNA聚合酶的輔助因子，是真核細胞DNA合成所必須的一種糖蛋白，參與DNA的合成并在細胞周期中起重要的調(diào)控作用［9，10］。PCNA在DNA合成的G1期開始增加，到S期時能夠達到最高峰，到G2/M期時開始迅速降低。這種變化周期與細胞增殖周期過程剛好相關。由于PCNA的合成與表達和細胞增殖活性密切相關，因此檢測PCNA可以反映癌細胞DNA的合成情況，為癌細胞增殖活性提供客觀指標。研究發(fā)現(xiàn)，PCNA與許多惡性腫瘤病理分級、臨床分期及淋巴結(jié)或臟器轉(zhuǎn)移有關，并可用于臨床診斷、指導治療以及預后評估［11］。本研究發(fā)現(xiàn)食管鱗癌組織中均有不同程度PCNA的陽性表達，PCNA標記指數(shù)為11.2% ～68.7% ，非典型增生組織PCNA微弱陽性染色，PCNA標記指數(shù)＜5%，食管鱗癌組織中PCNA的表達明顯高于非典型增生組織(P＜0.05);FHIT與PCNA的平均標記指數(shù)呈顯著負相關(rs=-0.583，P＜0.05)。提示PCNA蛋白檢測可直接反映細胞合成代謝及增殖狀態(tài)。

總之，我們的研究表明，F(xiàn)HIT表達與食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展有關，與細胞增殖關系密切，其為食管鱗癌的早期診斷、判斷預后提供新的參考。

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FHIT and PCNA expression and its clinical significance in the carcinogenesis of esophagealmucosa

QIAN Ru-lin，LI Xiang-yang，CAI Zu-xun，et al.
Thoracic Surgery，Henan Chest Hospital，Zhengzhou 450003，China

ObjectiveTo investigate the expression of fragile histidine triad(FHIT)gene and proliferating cell nuclear antigen(PCNA)during the process of esophageal squamous cell carcinogenesis.M ethodsThe expression of FHITwere detected by immunohistochemistry SPmethod in 37 cases of lung squamous carcinoma，10 of adjacent tissue.The biopsy of normal，dysplasia and esophageal carcinoma of 37 cases were performed.The expressions of FHIT，PCNA were detected by using immmuno-histochemicalmethod.ResultsFHIT protein expression 43.2%(16/37)of esophageal squamous cell carcinoma was significantly lower than the atypical hyperplasia group 70.3%(26/37)and normal esophagealmucosa and 89.2%(33/37)(P＜0.05).PCNA expression in esophageal squamous cell carcinoma was significantly higher than that atypical hyperplasia(P＜0.05);There was a negative correlation between PCNA and FHIT expressions(rs=-0.583，P＜0.05).The positive rates of FHIT in high andmiddle degrees of differentiation were significantly higher than that in low degree of differentiation(46.2%νs36.4%).Tumorswith lymph nodemetastases(39.3%)(11/28)had loss FHIT protein expression than those withoutmetastasis(55.6%)(5/9)(P＜0.05).ConclusionFHIT gene play an important role in the occurrence and development of esophageal squamous cell carcinoma.It is suggested that FHIT can be a usefulmarker for predicting invasion and metastasis ability of esophageal squamous cell carcinoma.

Esophageal neoplasms;Fragile histidine triad;Proliferating cellular nuclear antigen;Immunohistochemistry

河南省科技攻關項目(項目編號：082300450070)

450003 河南省胸科醫(yī)院胸外科