RP-HPLC法測定痹痛寧膠囊中士的寧和馬錢子堿的含量

王蕾

江蘇省鹽城市藥品檢驗所，鹽城 224002

痹痛寧膠囊由馬錢子粉、全蝎、僵蠶（麩炒）、麻黃、蒼術（麩炒）、乳香（制）、沒藥（制）、川牛膝、刺五加浸膏、甘草、續斷等藥材組成,具有袪風除濕、消腫定痛之功效。適用于寒濕陰絡所致的痹病，癥見：筋骨關節疼痛、腫脹、麻木、屈伸不利、遇寒加重者，風濕、類風濕性關節炎、骨質增生、頸椎病、肩周炎、腰椎間盤突出、坐骨神經痛、股骨頭壞死、骨質增生等及上述癥狀引起的關節酸沉、疼痛、腫大、變形、麻木等。痹痛寧膠囊原標準[1]采用薄層掃描法測定士的寧的含量。原方法操作麻煩，筆者參考有關文獻[2]建立了反相高效液相色譜法測定痹痛寧膠囊中士的寧和馬錢子堿的含量，經方法學考察，表明方法可行。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀（Agilent科技有限公司）；BP211D電子天平（德國賽多利斯公司）。

馬錢子堿對照品（110706-200404）、士的寧對照品（110705-200306）為中國藥品生物制品檢定所提供；痹痛寧膠囊 （規格：0.2 g/粒，批號：110106、110123、110301，貴州恒霸藥業有限責任公司）；甲醇、乙腈為色譜純；其余為分析純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品混合溶液 精密稱取士的寧對照品20.97 mg、馬錢子堿對照品9.52 mg，置100 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋制成濃度分別為0.2097和0.0952 mg·mL-1的混合溶液。

2.1.2 供試品溶液 取痹痛寧10粒，精密稱定，混勻，稱取0.5 g，加濃氨水1 mL濕潤，加氯仿30 mL，搖勻，靜置24 h，超聲處理30 min提取，過濾，濾渣用氯仿5 mL×3洗滌，合并濾液和洗液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即為供試品溶液。

2.1.3 陰性對照溶液 按照痹痛寧膠囊的制備工藝制備不含馬錢子粉的樣品，并按“2.1.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：CAPCELL C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：水-乙腈（80∶20）（含三乙胺0.01 mol· L-1，用磷酸調pH至2.6±0.1）；檢測波長為260 nm；柱溫為25℃；進樣量為20 μL。

2.3 系統適用性與專屬性試驗

在上述色譜條件下，分別取對照品混合溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數按士的寧峰計算，不低于2000，而輔料無干擾。見圖1。

2.4 線性關系考察

精密吸取對照品混合溶液1、2、4、8、10、15 μL注入液相色譜儀。以濃度（μg）為橫坐標，峰面積（X）為縱坐標，繪制標準曲線，得士的寧和馬錢子堿的回歸方程，分別為 Y=3.765×104X+9.198×103，r= 0.9996和Y=4.289×104X+1.062×104，r=0.9994。結果表明，士的寧和馬錢子堿濃度分別在0.2097～3.1455 μg·mL-1和0.0952～1.4280 μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

圖1 對照品（A)、樣品（B)、陰性對照（C)色譜圖

精密吸取“2.1.1”項下的對照品混合溶液20μL，在上述色譜條件下連續進樣6次，測定峰面積，峰面積的RSD分別為士的寧0.8%、馬錢子堿1.0%。

2.6 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12 h，在上述色譜條件下進行分析，士的寧和馬錢子堿色譜峰面積的RSD（n=6）分別為1.3%和1.0%。結果表明士的寧和馬錢子堿供試液在12 h內穩定。

2.7 重復性試驗

精密稱取同一批號的痹痛寧膠囊粉末6份各0.5 g，按“2.1.2”項下方法操作，在上述色譜條件下進行測定，結果士的寧和馬錢子堿的含量平均值（n=6）分別為0.81 mg/粒和0.40 mg/粒，RSD分別為1.1%、1.0%。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取己知含量的痹痛寧膠囊3份,每份0.25g，分別加入按“2.1.1”項下方法制備的對照品混合溶液1.0、5.0、10.0 mL，再按上述方法提取，制備供試品溶液，每個濃度測定3份，計算平均回收率。結果樣品中士的寧和馬錢子堿的平均回收率分別為99.2%、99.3%；RSD分別為0.6%、0.9%。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，按“2.1.2”項下方法操作，制備供試品溶液各3份，按上述色譜條件測定，外標法計算士的寧和馬錢子堿的含量。結果見表1。

表1 含量測定結果（n=3）

3 討 論

3.1 馬錢子以粉末入藥，故將樣品用氨水濕潤后，用氯仿靜置過夜，再進行超聲處理，將所含生物堿提取出來，再用硫酸溶液使其以鹽的形式溶于水中，除去大量脂溶性的雜質，將酸性液堿化后，用氯仿提取，所得供試品色譜圖中所含雜質較少。

3.2 測定波長的選擇

對士的寧、馬錢子堿以流動相制備的對照品溶液在λ200～300 nm范圍內做紫外掃描，士的寧和馬錢子堿的最大吸收分別為λ254 nm和λ265 nm，故選擇λ260 nm為合適的檢測波長。

[1] 國家食品藥品監督管理局標準（試行）[S].YBZ11142005.

[2] 張凌云.RP-HPLC法測定伸筋丹膠囊中士的寧和馬錢子堿的含量[J].江蘇藥學與臨床研究，2004，12（3）：32.