HPLC法測定腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑中維生素C的含量

朱 虬，朱衛(wèi)紅

華瑞制藥有限公司，江蘇無錫 214092

維生素C（VC）及其制劑為臨床常用藥物，《中國藥典》（2010年版）收載有維生素C原料藥及其片劑、泡騰片、顆粒劑和注射劑[1]。原料及相應(yīng)制劑中VC的含量測定方法有碘量法[2]、2，6—二氯靛酚滴定法、電位滴定法、熒光法、磷鉬藍分光光度法、紫外分光光度法、高效液相色譜法[3]等。腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑為含有VC及多種維生素、脂肪及蛋白質(zhì)的復(fù)方制劑，營養(yǎng)乳劑中VC的含量測定方法未見報道，本研究用HPLC法測定腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑中VC的含量。

1 材料與試劑

儀器：Agilent1100 HPLC（四元泵，在線脫氣機，帶溫控自動進樣器，VWD檢測器，化學(xué)工作站）。

VC對照品 （Sigma，批號：61K0001，純度：100.3%）；腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑（瑞高TM，華瑞制藥有限公司，批號：PLN336）；乙腈（Merck，色譜級）；磷酸二氫鉀（分析級）。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Merck LiChrospher 100 NH2（250 mm× 4.0 mm，5 μm）；流動相：0.02 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液－乙腈（27∶73），用鹽酸調(diào)節(jié)pH為5.3；檢測波長：254 mm；流速：1.5 mL·min-1；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備（臨用新配）與測定 精密稱取VC對照品約20 mg，用流動相溶解并定量稀釋至5 μg·mL-1的溶液，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。見圖1-A。

2.2.2 供試品溶液的制備與測定 精密稱取新開啟的腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑1.0 g，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。置2～8℃冰箱中放置半小時，用0.45 μm濾膜過濾，量取20 μL續(xù)濾液立即注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標法計算。見圖1-B。

圖1 維生素C色譜圖

2.3 專屬性試驗

2.3.1 VC空白樣品的制備 除VC外，其余按乳劑處方量配制。

2.3.2 對照溶液的測定 按“2.2.1”配制VC對照品溶液并進樣分析，記錄VC色譜峰保留時間。

2.3.3 空白樣品的測定 取VC空白樣品，按“2.2.2”處理，進樣分析。記錄色譜圖，觀察在VC色譜峰位置有無干擾峰出現(xiàn)。

對照品溶液中VC色譜峰的保留時間為8.136 min，而空白溶液在此保留時間無色譜峰出現(xiàn)，說明方法沒有干擾。

2.4 線性考察

2.4.1 線性測定溶液的制備 精密稱定VC對照品20 mg，置200 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，則VC濃度分別約為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 μg·mL-1，相當于樣品中VC標示量的90%～300%。

2.4.2 線性溶液的測定 取“2.2”各溶液進樣分析，記錄VC峰面積，以峰面積A為縱坐標，以VC濃度C為橫坐標，求出回歸方程：A＝18.38C－5.646，r＝0.9999。試驗結(jié)果表明VC濃度在2.2868～7.5466 μg·mL-1和峰面積之間線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗

按“2.2.1”制備對照品溶液，按“2.2.2”制備供試品溶液（平行制備6份），進樣分析，RSD＝0.52%，試驗結(jié)果表明方法精密度良好。

2.6 回收率試驗

精密稱取VC對照品100 mg，加流動相溶解并定量稀釋成100 μg·mL-1的溶液；精密稱取“2.3.1”VC空白樣品1.0 g，分別加入上述溶液0.44 mL、0.55 mL、1.1 mL（分別相當于樣品中VC標示量的80%、100%、200%），再按“2.2.2”制備供試品溶液，每個濃度平行制備3份。

分別進樣對照品溶液和9份回收率試驗溶液，計算得平均回收率100.3%，RSD=1.11%，見表1。

2.7 樣品含量測定

按“2.2.1”制備對照品溶液，按“2.2.2”制備供試品溶液（平行制備6份），進樣分析，計算供試品中VC的含量。實驗表明測定結(jié)果均符合規(guī)定，見表2。

表1 樣品含量測定結(jié)果（n=6）

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=6）

3 討 論

本方法的專屬性試驗、線性試驗、精密度試驗、回收率試驗均表明方法準確、可靠。

由于VC本身有較強的還原性，容易被氧化，故對照品溶液需要新鮮配制，供試品溶液的制備也要采用未開啟的樣品，操作時要盡量快速，避免長久暴露于空氣中。

本實驗方法操作簡便、快速，可操作性強，適于腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑中VC含量的質(zhì)量控制。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 劉文英.藥物分析[M].第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：265-6.

[3] 陳再潔，鄭建明，王 智.高效液相色譜法測定維生素C片中VC含量[J].分析儀器，2008（6）：37-9.