菖遠膠囊的質量標準研究

王 萌 肖會敏 何 悅 曹 蔚 王四旺

第四軍醫大學藥學院，陜西西安 710032

菖遠膠囊主要由石菖蒲、遠志、人參、丹參、川芎等中藥組成，具有開竅通經、醒神益智、破瘀行出、滋陰補氣之功效，主要用于智能衰退及意識障礙等。研究發現石菖蒲揮發油是該藥材中鎮靜、催眠、抗驚厥作用的主要有效部位[1]，而揮發油中主要活性成分是細辛醚系列物，主要有α-細辛醚、β-細辛醚等[2]。遠志具有益智安神、祛痰消腫的功效，主含遠志皂苷[3]。本文旨在建立制劑質量標準方法，采用薄層色譜法分別對制劑中遠志、人參、丹參、川芎等藥材進行鑒別，采用HPLC法對制劑中α-細辛醚的含量進行測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀，配2695分離單元，2996二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站，自動進樣器，美國Waters公司；薄層成像儀，瑞士camag公司；RD200電子分析天平，德國sartorius公司。

1.2 試藥

α-細辛醚對照品（純度＞98%，Sigma-Aldrich chemie），購自北京豐特斯化學試劑公司；人參皂苷Rg1對照品（批號：0703-200921）、人參皂苷 Re對照品（批號：0754-201017）、丹參酮ⅡA對照品（批號：0716-200911）、遠志對照藥材（批號：0904-9904）、川芎對照藥材（批號：0918-9603）、丹參對照藥材（批號：923-200906），均購自中國藥品生物制品檢定所；菖遠膠囊，批號：20110605、201106010、20110615，由第四軍醫大學藥物研究所研制；甲醇，色譜純，美國Honeywell公司；純水，由millipore純水儀制備（美國millipore公司）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 遠志藥材薄層鑒別[4]

取本品內容物2.0 g，加鹽酸無水乙醇20 mL，加熱回流30 min，冷卻，濾過，濾液加水30 mL，用氯仿振搖提取2次，每次20 mL，合并氯仿液，蒸干，殘渣加醋酸乙酯1 mL使溶解，離心，取上清液作為供試品溶液。另取遠志對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液與陰性對照溶液（缺遠志）。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以展開劑甲苯-醋酸乙酯-甲酸（14.0∶4.0∶0.5）展開（展距 18.0 cm），取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。見圖1。

2.2 人參藥材薄層鑒別[4]

取本品內容物2.0 g，加氯仿40 mL，加熱回流1 h，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加水0.5 mL拌勻濕潤后，加水飽和的正丁醇10 mL，超聲處理30 min，吸取上清液，加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。同法制成陰性對照溶液（缺人參）。另取人參皂苷Re、Rg1對照品，加甲醇制成每毫升各含0.5 mg的混合溶液，吸取上述4種溶液各5～10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15︰40︰22︰10）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開（展距18 cm），取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖2。

2.3 丹參藥材與丹參酮ⅡA薄層鑒別[4]

取本品內容物2.0 g，加乙醚10 mL，放置1 h（不停振搖），濾過，乙醚液低溫揮干，殘渣加醋酸乙酯溶解，作為供試品溶液。取丹參酮ⅡA對照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。另取丹參對照藥材1.0 g，同法制成對照藥材溶液與陰性對照溶液（缺丹參）。吸取上述四種溶液各5 μL，分別點在同一硅膠G薄層板上，以展開劑苯-醋酸乙酯（19∶1）展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾，結果見圖3。

2.4 川芎藥材薄層鑒別[5]

取本品內容物5.0 g，加乙醚20 mL，超聲15 min，濾過，濾液揮去乙醚，殘渣加醋酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材0.3 g，同法制成對照藥材溶液與陰性對照溶液（缺川芎）。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點在同一硅膠G薄層板上，以展開劑正己烷-醋酸乙酯（9︰1）展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾，結果見圖4。

2.5 α-細辛醚含量測定[6]

2.5.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Kromasil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（58∶42）；檢測波長：257 nm；流速：1.00 mL/min；柱溫：25℃；進樣量：10 μL，在此條件下理論板數以 α-細辛醚峰計應不低于4 000。見圖5。

2.5.2 溶液的制備

2.5.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取α-細辛醚對照品12.00 mg于10 mL量瓶，用50%甲醇溶解并定容至刻度即得濃度為1.20 mg/mL對照品溶液，將其作為母液。

2.5.2.2 供試品溶液的制備 取本品10粒，倒出內容物，稱取0.5 g，置于25 mL量瓶中，加15 mL 50%甲醇，超聲處理30 min后，冷卻，加50%甲醇至刻度。搖勻，濾過。精密量取續濾液10.0 mL，置于25 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，作為供試品溶液。

2.5.2.3 陰性樣品溶液的制備 取不含石菖蒲的菖遠膠囊10粒，按供試品下方法制備得陰性樣品溶液。

2.5.3 方法學考察

2.5.3.1 標準曲線繪制 分別精密量取母液0.10、0.20、0.25、0.40、0.50、1.00 mL于10 mL量瓶中，加50%甲醇到刻度，濾過（濾膜 0.45 μm），進樣，測定峰面積。以橫坐標（X）為濃度（mg/mL）、縱坐標（Y）為峰面積的積分值進行線性回歸，得線性方程：Y=11 291 939X-6 181 679（r=0.999 8）。結果表明，α-細辛醚質量濃度線性范圍為0.12～1.20 mg/mL。

2.5.3.2 精密度試驗 精密量取對照品溶液（α-細辛醚0.48 mg/mL）10 μL分別注入色譜儀，連續進樣5次，測定峰面積。結果峰面積的積分值RSD為0.92%（n=6），表明該方法精密度良好。

2.5.3.3 穩定性試驗 取同一供試品溶液（α-細辛醚0.48 mg/mL）10 μL，分別在 0、1、2、4、8、12 h 依法測定。 結果 α-細辛醚的RSD=1.02%，表明樣品溶液在12 h內穩定。

2.5.3.4 重復性試驗 取同一批樣品6份（批號：20110605），每份0.5 g，精密稱定，按“2.5.2”項下方法制備溶液，測定。結果平均含量為0.36 mg/g（RSD=0.98%），表明該方法重復性良好。

2.5.3.5 加樣回收率試驗 取已知含量樣品粉末約0.5 g（批號：20110605，含量為 0.36 mg/g），共 6份，每份 0.5 g，精密稱定，分別加入對照品（取上述線性樣品0.12 mg/mL對照品溶液），按“2.5.2”項下方法制備溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進行測定，計算回收率。結果α-細辛醚平均回收率為99.69%，RSD為 1.33%（n=6），結果見表 1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.5.4 樣品含量測定

取3批樣品，每批樣各3份，按“2.5.2”項下方法制備溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進行測定。結果見表2。

表2 菖遠膠囊中α-細辛醚含量測定結果（n=3）

3 討論

上述薄層鑒別結果顯示各藥材均具有良好分離度，各個特征斑點在相應的位置均出現，且陰性無干擾，說明有很好的專屬性。含量測定結果顯示精密度與重復性良好，加樣回收率高，所以該方法穩定、可靠。

石菖蒲為君藥，揮發油含量較高[2]，α-細辛醚、β-細辛醚等是石菖蒲揮發油的主要有效成分，因此將含量測定指標定為α-細辛醚，經過方法學考察與3種試樣品驗證，本方法穩定，制劑中α-細辛醚含量穩定均一。遠志也為君藥，將其進行薄層鑒別，檢出特征斑點，同時陰性無干擾；將臣藥人參及佐藥丹參、川芎等也進行了薄層鑒別，具有良好分離度，檢出特征斑點且陰性無干擾。

綜上所述，由于上述TLC方法可檢出特征斑點，專屬性強，定量定方法具有準確、穩定、可靠等優點，因此將其列入質量標準草案以控制該制劑質量。

[1]胡錦官，顧健，王志旺．石菖蒲及其有效成分對中樞神經系統作用的實驗研究[J]．中藥藥理與臨床，1999，15（3）：19-21.

[2]劉春海，劉西京，楊華生．石菖蒲揮發油的GC-MS分析[J]．中醫藥學刊，2006，24（7）：1280-1281.

[3]馬菁菁，劉斌，羅躍娥.遠志化學成分和藥理活性的研究進展[J].遼寧中醫藥大學學報，2009，11（12）：161-163.

[4]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：化學工業出版社，2005：6，57，123.

[5]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：38.

[6]董玉，石任兵，劉斌．石菖蒲有效部位中α-細辛醚、β-細辛醚的含量測定[J]．北京中醫藥大學學報，2007，30（5）：340-342.