小腸惡性腫瘤患者癌組織Bcl-2和Bax基因表達(dá)及其作用機(jī)制

辛向紅 (遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院普外一科，遼寧 錦州 121000)

小腸惡性腫瘤患者癌組織Bcl-2和Bax基因表達(dá)及其作用機(jī)制

辛向紅 (遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院普外一科，遼寧 錦州 121000)

目的檢測(cè)Bcl-2及Bax基因在小腸癌中的表達(dá)，探討其在小腸癌發(fā)生、發(fā)展及治療中的作用。方法取50例小腸腫瘤患者標(biāo)本，并取30例癌組織附近正常組織，Bcl-2及Bax基因表達(dá)檢測(cè)采用Western印跡法，而細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)檢測(cè)采用TUNEL方法。結(jié)果相對(duì)于癌組織附近正常組織，Bcl-2、Bax基因及AI在癌組織中表達(dá)明顯偏高(P＜0.05);小腸癌中Bcl-2積分與AI呈負(fù)相關(guān)，相反，Bax積分則與AI呈正相關(guān)。結(jié)論Bcl-2很有可能參與小腸癌發(fā)生及發(fā)展，并同時(shí)對(duì)細(xì)胞凋亡起抑制作用;而B(niǎo)ax則部分升高癌細(xì)胞凋亡水平。

小腸惡性腫瘤;Bcl-2;Bax

在整個(gè)胃腸道系統(tǒng)中小腸所占的比例最大，約為全長(zhǎng)的75%，又因其內(nèi)部褶皺頗多，故其黏膜總面積大約能夠達(dá)到胃腸道的90%左右，然而，小腸部分極少發(fā)生腫瘤，發(fā)病率只占了全部胃腸道的5%左右，而惡性的則僅為2%，其中腫瘤主要為腺癌、類(lèi)癌、淋巴瘤及肉瘤。惡性瘤當(dāng)中比例較大的是腺癌和類(lèi)癌，約占55% ～80%，一般發(fā)生于十二指腸的是腺癌，回腸則較容易發(fā)生類(lèi)癌〔1，2〕。此種腫瘤發(fā)病原因還不清楚，其發(fā)病機(jī)制可能與直腸腫瘤相類(lèi)似，即多基因致癌。Bcl-2基因在最近幾年當(dāng)中受到廣泛關(guān)注，它是一種調(diào)控細(xì)胞凋亡的非常重要的基因，在惡性腫瘤發(fā)展過(guò)程中扮演相當(dāng)重要的角色。Bax是一種促進(jìn)凋亡的基因，這兩種基因可以阻斷一個(gè)重要通道，即凋亡信號(hào)最后的通路，從而可以抑制細(xì)胞凋亡〔3～5〕。本文擬通過(guò)檢測(cè)小腸惡性腫瘤患者癌組織Bcl-2和Bax基因表達(dá)的水平，以為探討其作用機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料 我院小腸腫瘤的患者50例為小腸惡性腫瘤組，穿刺法取出標(biāo)本，男37例，女13例，平均54歲;留取癌組織附近正常組織30例為對(duì)照組，男23例，女7例，平均55歲。

1.2 Western印跡法檢測(cè)Bcl-2、Bax表達(dá) 以質(zhì)膜當(dāng)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為標(biāo)準(zhǔn)，或胞質(zhì)中出現(xiàn)也可，棕黃色必須要明顯。根據(jù)顯示出陽(yáng)性細(xì)胞比例及其被染色深淺程度，進(jìn)行積分。同時(shí)，提取患者小腸細(xì)胞，并對(duì)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2和Bax蛋白做Western印跡檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)凋亡細(xì)胞 顯示陽(yáng)性細(xì)胞為胞核染為棕黃色，或者胞核和胞質(zhì)同時(shí)染色〔6〕。選取高倍顯微鏡下5個(gè)視野，各個(gè)視野當(dāng)中取200個(gè)細(xì)胞，算出所有切片的細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)。

2 結(jié)果

2.1 兩組Bcl-2及Bax表達(dá)結(jié)果比較 小腸惡性腫瘤組Bcl-2積分(6.84±2.98)及Bax積分(7.05±2.78)明顯高于對(duì)照組(1.78±0.35、1.16±0.43)(P=0.035，P=0.018)。Western印跡法發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，小腸惡性腫瘤患者細(xì)胞內(nèi)Bcl-2促癌蛋白表達(dá)顯著上升，而B(niǎo)ax蛋白表達(dá)明顯下降。說(shuō)明該基因通過(guò)抑制凋亡途徑來(lái)促進(jìn)腫瘤發(fā)展。見(jiàn)圖1。

2.2 兩組AI水平比較 小腸惡性腫瘤組AI(6.53±2.35)明顯高于對(duì)照組(3.18±2.19)(P＜0.05)。

2.3 小腸惡性腫瘤組不同臨床因素與AI的關(guān)系 不同腫瘤直徑、不同分化程度、不同TNM分期及有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移患者的AI有明顯差異(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

圖1 兩組Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)情況

表1 小腸惡性腫瘤組不同臨床因素與AI的關(guān)系(±s)

表1 小腸惡性腫瘤組不同臨床因素與AI的關(guān)系(±s)

臨床因素 n AI P值性別 男13 6.43±2.43 ＞0.05解剖類(lèi)型 中央型 41 6.43±2.36周?chē)?9 6.47±2.23 ＞0.05腫瘤直徑 ≤3 cm 18 6.52±2.25＞3 cm 32 5.10±1.04 ＜0.05分化程度 高分化 16 4.87±0.87 ＜0.05中分化 21 5.34±1.45 ＜0.05低分化 13 7.45±1.45 ＜0.05 TNM分期 Ⅰ期 13 4.67±0.67Ⅱ期 21 5.45±1.56 ＜0.05Ⅲ期 16 7.03±1.76淋巴轉(zhuǎn)移 有 21 7.45±1.45無(wú)37 6.56±2.25女29 5.34±1.09 ＜0.05

3 討論

小腸部分的惡性腫瘤經(jīng)常發(fā)生于十二指腸、空腸及回腸，然而這部分腫瘤發(fā)病率非常低，無(wú)非常明顯的表現(xiàn)，臨床上又缺少獨(dú)特有效的檢測(cè)方法及儀器，因此手術(shù)前診斷非常難。術(shù)前診斷確診率約為17% ～50%，但誤診率相當(dāng)高，究其原因，主要是:①本病發(fā)病率非常低，在日常臨床工作中，醫(yī)師對(duì)其認(rèn)識(shí)不夠;②本病表現(xiàn)比較多，發(fā)病初期無(wú)有效體征，很容易與其他類(lèi)似的消化道疾病混淆;小腸腫瘤在初期根本無(wú)任何癥狀，只有少數(shù)有不明顯癥狀，比如臍周?chē)弁矗颊邔?duì)其重視不足，也不會(huì)就診，而且即使中期甚至晚期，也不會(huì)出現(xiàn)明顯并發(fā)癥;③經(jīng)常會(huì)因發(fā)生腸梗阻等就診，其真實(shí)病情并未被發(fā)覺(jué)，如腹膜炎等;④此病缺少方便、快速且有效的診斷方式;除了十二指腸可以通過(guò)內(nèi)鏡造影，做出相應(yīng)診斷外，其他部分，如空腸，診斷非常困難。若出現(xiàn)以下體征，應(yīng)該有所警惕:①臍周或右下腹部出現(xiàn)不明原因疼痛;②間歇性出現(xiàn)腹瀉、便血，但經(jīng)過(guò)纖維胃鏡檢查又未發(fā)現(xiàn)任何異常。目前對(duì)空腸及回腸部分的術(shù)前診斷最普遍為B超，需要時(shí)可進(jìn)行CT掃描確診。而一般用內(nèi)鏡范圍較有限，最大限度到達(dá)胃部，最遠(yuǎn)十二指腸，結(jié)腸鏡從肛門(mén)進(jìn)入，遠(yuǎn)端只達(dá)回腸末端。小腸鏡則由于存在諸多缺點(diǎn)，患者不愿意配合，并發(fā)癥也非常多，目前臨床應(yīng)用很少〔7～9〕。

目前臨床上的普遍原則是首選手術(shù)切除。具體原則有:①如果患者生理情況良好，腫瘤組織容易剝離，則首選全方面切除，包括腫瘤組織及相關(guān)區(qū)域淋巴結(jié)，做到根治性清除;②對(duì)于某些病例，其病變部位不能確定是何種性質(zhì)，則要在手術(shù)當(dāng)中對(duì)病理組織進(jìn)行冰凍，進(jìn)行切片檢查，如果此種方法依舊不能對(duì)病理組織確診，且腫瘤組織又比較大的病例，就必須按照惡性腫瘤方式處理;③如果腫瘤部分已經(jīng)出現(xiàn)擴(kuò)散等癥狀，也要盡可能全部切除，以避免后期復(fù)發(fā)，同時(shí)可讓癥狀得以緩解;④如果術(shù)中發(fā)現(xiàn)有腸梗阻，同時(shí)腫瘤又沒(méi)有途徑可以順利切除的，應(yīng)該先從旁路著手，進(jìn)行相關(guān)手術(shù)，解除腸梗阻現(xiàn)象;⑤若遇到惡性淋巴瘤，除進(jìn)行正常手術(shù)外，術(shù)后需配合其他必要治療，以達(dá)到良好療效。

臨床醫(yī)師研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于部分病例，可以進(jìn)行剖腹探查，適應(yīng)證主要為:①經(jīng)過(guò)一系列必要檢查后，確定為小腸腫瘤的可能性非常高，但又有部分病例未能排除;②若出現(xiàn)消化道出血，且病因不確定，進(jìn)行一系列檢查后，排除胃、十二指腸等常見(jiàn)部位，可考慮是小腸腫瘤。如果患者病情較穩(wěn)定，身體條件許可，最好爭(zhēng)取在不出血時(shí)置入結(jié)腸鏡進(jìn)行檢查。

目前針對(duì)小腸惡性腫瘤的有效方法首選還是手術(shù)切除，如果確診，應(yīng)盡快施行手術(shù)，爭(zhēng)取清除干凈。常用手術(shù)有:①胰十二指腸切除術(shù)，這種手術(shù)主要針對(duì)十二指腸部位患有惡性腫瘤;②小腸節(jié)段性切除，此種術(shù)式主要針對(duì)空腸和回腸腫瘤;③右半結(jié)腸切除術(shù)，此種術(shù)式針對(duì)病理組織位于回腸末端腫瘤。在手術(shù)當(dāng)中決定哪種手術(shù)方案很重要，其關(guān)鍵就是判斷病理組織是良性還是惡性的，如果在手術(shù)當(dāng)中不能確定性質(zhì)，就應(yīng)按照惡性腫瘤施行手術(shù)。如果病理組織確診是惡性腫瘤，應(yīng)該以根治性切除為目標(biāo)，范圍也要比良性偏大，原則上要切除腫瘤邊緣部分組織，要求至少10 cm，以確定完全清掃干凈，手術(shù)當(dāng)中也要對(duì)發(fā)生病變的小腸周?chē)M(jìn)行清除，重點(diǎn)是淋巴結(jié)。如果是間質(zhì)瘤，就沒(méi)有必要把小腸周?chē)馨徒Y(jié)完全清除，因?yàn)檫@種病例組織的淋巴很少轉(zhuǎn)移，所以術(shù)中沒(méi)有必要切除大量小腸系膜，這樣可以減少對(duì)小腸血管的損傷。病變組織被切除以后，機(jī)體負(fù)荷將大大減少，術(shù)后若積極配合各種治療方案，則可有效提高生存率〔10，11〕。

小腸癌進(jìn)行化療，收效不理想，不過(guò)也有報(bào)道指出，合適的化療對(duì)部分晚期小腸癌患者來(lái)說(shuō)，可一定程度地提升生存質(zhì)量。如果對(duì)中晚期小腸癌患者進(jìn)行合適的化療方案，進(jìn)行治療，那么生存率將會(huì)有一定提升。在小腸惡性腫瘤的預(yù)后跟蹤調(diào)查中顯示，此病預(yù)后非常不理想，生存率較低。所以，本病如果在早期能夠確診，就要盡早治療，在中后期若確診，就應(yīng)立即手術(shù)治療，術(shù)后合理化療對(duì)預(yù)后有一定益處。

Bcl-2基因是一個(gè)原癌基因，它是最早發(fā)現(xiàn)一個(gè)原癌基因，存在于造血系統(tǒng)中，在正常組織中低表達(dá)，其部位染色體發(fā)生易位時(shí)，能抑制細(xì)胞凋亡過(guò)程，并且此過(guò)程部分導(dǎo)致各種腫瘤發(fā)生。Bcl-2基因表達(dá)出來(lái)的蛋白能對(duì)多種細(xì)胞凋亡起抑制作用，使細(xì)胞壽命適度延長(zhǎng)。而B(niǎo)ax本身可促進(jìn)細(xì)胞凋亡〔6，12〕。

表達(dá)蛋白與細(xì)胞凋亡Bcl-2和Bax蛋白在腫瘤中表達(dá)比較高，但是其表達(dá)與性別及年齡無(wú)相關(guān)性。如果腫瘤分化程度較低，TNM分期升高，Bcl-2表達(dá)降低，但Bax蛋白表達(dá)卻呈增高趨勢(shì)。

腫瘤分化程度能很大程度上影響癌細(xì)胞凋亡，分化越多，癌細(xì)胞凋亡水平越高。本研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤體積不斷減小及淋巴結(jié)持續(xù)轉(zhuǎn)移，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞升高自身凋亡水平。Bcl-2表達(dá)與AI呈負(fù)相關(guān)，Bax則正好相反，呈正相關(guān)，這表明在小腸癌初期Bcl-2對(duì)癌細(xì)胞起抑制作用，Bax則在中后期癌細(xì)胞凋亡水平中起升高作用〔13～15〕。通過(guò)研究Bcl-2/Bax基因及這兩種基因表達(dá)蛋白與小腸癌之間關(guān)系，可以極大幫助醫(yī)師制訂治療方案，比如誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)小腸癌細(xì)胞對(duì)術(shù)后其他治療方法的敏感，達(dá)到有效治療小腸癌的目的。

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R735.3

A

1005-9202(2012)12-2488-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.019

辛向紅(1965-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事普通外科疾病研究。

〔2011-11-05收稿 2012-02-19修回〕

(編輯 袁左鳴/張 慧)