乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc的異常表達及其臨床意義

趙云霞 龔曉萌 崔芳芹 劉德純 承澤農 (蚌埠醫學院病理生理學教研室，安徽 蚌埠 233030)

乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc的異常表達及其臨床意義

趙云霞 龔曉萌1崔芳芹 劉德純1承澤農1(蚌埠醫學院病理生理學教研室，安徽 蚌埠 233030)

目的探討PTEN、Rb、C-myc蛋白異常表達在乳腺癌發生、發展中的作用及其臨床意義。方法應用免疫組織化學S-P法檢測150例乳腺癌和30例乳腺良性增生性病變組織中PTEN、Rb、C-myc蛋白的表達;結合臨床病理指標進行分析。結果乳腺癌組織中PTEN、Rb、C-myc蛋白表達與良性增生性病變組織有顯著差異(P＜0.05)。PTEN蛋白的失表達與淋巴結轉移、雌激素受體(ER)失表達有關(P＜0.05)。Rb蛋白在乳腺癌Ⅲ級中失表達率較高，但無統計學差異(P＞0.05)。C-myc蛋白的過表達與組織學分級、淋巴結轉移及病理類型有關(P＜0.05)。PTEN蛋白失表達與Rb蛋白失表達呈正相關，與C-myc過表達呈負相關(P＜0.05)。結論PTEN、Rb、C-myc共同參與了乳腺癌的發生發展，對乳腺癌的預后判斷有重要的參考價值。

乳腺癌;乳腺良性增生性病變;PTEN;Rb;C-myc

乳腺癌相關基因在乳腺癌發生、發展中的作用尚不明確，本研究旨在探討PTEN、Rb和C-myc在乳腺癌中的表達狀況，并與其他較為確定的預后指標相比較，結合臨床病理資料進行分析評價，為腫瘤的預后判斷和防治提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 標本來源于蚌埠醫學院病理學教研室及蚌埠醫學院第一附屬醫院病理科，2004年至2006年手術切除乳腺組織存檔蠟塊標本，其中乳腺癌組織標本150例，所有患者均接受手術治療，術前未接受過化療、內分泌或放射治療，經病理確診，且外檢已做過雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)檢測。年齡30～80歲，平均年齡47.45歲(中位數49歲)，＜50歲者81例，≥50歲者69例。浸潤性導管癌(非特殊性)121例，浸潤性小葉癌14例，導管原位癌13例，髓樣癌2例。將浸潤性導管癌121例按照WHO提供的方法進行分級，其中Ⅰ級16例;Ⅱ級84例;Ⅲ級21例。按長徑計算，最小者0.8 cm，最大者15 cm。按TNM分類、腫瘤大小分為三組，T1期腫瘤最大直

徑≤2.0 cm者57例;T2期腫瘤直徑為2.0～5.0 cm者82例;T3期腫瘤最大直徑＞5.0 cm者11例。本組病例中含有腋窩淋巴結清掃的病例95例，其中有58例發生轉移，未轉移者37例。ER、PR檢測結果以免疫組織化學(SP法)結果為準。ER陽性61例;PR陽性54例。標本用10%甲醛固定，石蠟包埋，常規制片。選擇乳腺良性增生性病變標本作為對照。

1.2 方法和試劑 采用免疫組織化學S-P法，分別PTEN、Rb和C-myc標記。鼠抗人PTEN單克隆抗體(克隆號:17A)，鼠抗人Rb單克隆抗體(克隆系:1F8)，鼠抗人C-myc單克隆抗體(克隆系:9E/11)(均為即用型)及相關試劑均購自福州邁新生物技術開發有限公司。嚴格按照免疫組織化學SP實驗步驟進行，用已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判斷 PTEN蛋白陽性表達定位于腫瘤細胞的胞質，Rb蛋白陽性表達定位于腫瘤細胞的胞核，C-myc蛋白陽性表達定位于腫瘤細胞的胞核和胞質，以胞質或胞核出現明顯的黃色或棕黃色顆粒視為陽性著色。判定標準:以染色強度和陽性細胞比例評定陽性表達。細胞胞質或胞核出現定位明確、染色明顯的棕黃/棕褐色顆粒為陽性細胞，其比例＞10%為陽性病例。

1.4 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件包進行分析，采用χ2檢驗、Fisher精確檢驗和相關分析。

2 結果

2.1 PTEN、Rb、C-myc蛋白在乳腺癌與乳腺良性增生性病變組織中的表達 PTEN蛋白在乳腺癌中失表達率為65.2%，高于對照組的13.3%，差異有統計學意義(P＜0.05)。Rb蛋白在乳腺癌中陰性表達率為71例(47.3%)，明顯高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。C-myc在乳腺癌中陽性表達率為56.7%，與對照組的陽性表達率(16.7%)有顯著差異(P＜0.05)。見圖1。

圖1 乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc陽性表達比較(SP，×400)

2.2 乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc蛋白表達與臨床病理指標的關系 PTEN蛋白表達缺失與淋巴結轉移、ER表達相關(P＜0.05)。Rb蛋白表達與各臨床病理指標均不具有相關性(P＞0.05)，只是在組織學分級中其表達缺失率隨分級增高而增高。C-myc蛋白表達與乳腺癌組織學分級、組織學類型及淋巴結轉移均有明顯關系(P＜0.05)。見表1。(r=0.18，P＜0.05)。因此，PTEN蛋白失表達與Rb蛋白失表達呈正相關，與C-myc過表達呈負相關(P＜0.05)。

表1 PTEN、Rb、C-m yc蛋白陽性表達與乳腺癌臨床病理的關系(n)

2.3 乳腺癌中PTEN、Rb和C-myc蛋白表達的相關性 在PTEN蛋白表達陽性病例中Rb蛋白表達陽性率為63.4%，高于PTEN蛋白表達陰性病例中Rb蛋白的陽性表達率45.9%(r=0.19，P＜0.05);PTEN蛋白表達陽性病例中，C-myc蛋白陽性表達率為44.2%，低于PTEN蛋白表達陰性病例中的62.2%

3 討論

PTEN通過其磷酸酶活性調節細胞內多種信號轉導途徑，從而調控細胞周期，促進細胞凋亡，抑制細胞生長。當PTEN基因發生突變后，其異常產物不具有上述功能，而失去了對細胞生長的負調控作用。Sano等〔1〕首先運用卡-邁兩氏存活點檢測發現PTEN蛋白表達高低與病人的病理分級及預后有關。病人預后越差，惡性程度越高，PTEN蛋白表達水平越低。本研究提示PTEN基因突變使腫瘤更具有侵襲和轉移能力，更容易發生淋巴結轉移。腫瘤ER陽性表達是乳腺癌對激素治療敏感，預后較好的獨立預后指標。PTEN蛋白失表達時往往伴有ER表達缺失，提示PTEN基因改變是乳腺癌預后較差的指標，與相關報道〔2〕相符合。因此，我們認為PTEN在乳腺癌發生發展過程中具有重要作用，它是乳腺癌預后差的重要指標之一。聯合檢測PTEN與其他預后指標，對預測乳腺癌預后更有指導意義。

Rb基因是最早被克隆的腫瘤抑制基因，也是細胞周期中校驗點的關鍵因子〔3〕。如果Rb基因失活，則Rb蛋白的表達就會出現異常，細胞就可能持續地處于增殖期，并可能由此惡變。國內外關于Rb與乳腺癌關系的研究罕有報道。研究顯示，乳腺癌中Rb蛋白的表達下調或失表達率為17% ～46%〔4〕。本實驗提示Rb基因的改變在高級別乳腺癌發展中具有重要作用，或在低級別乳腺癌向高級別乳腺癌過渡中發揮其作用，與Dublin〔4〕結果一致，但需要更大樣本的研究證實。

C-myc基因是發現較早的原癌基因之一。其編碼蛋白具有轉錄因子活性，有促進細胞增殖、調節細胞周期、抑制細胞分化、參與細胞凋亡的作用。關于C-myc與臨床病理指標關系的報道很少且差異較大，但均提示C-myc基因擴增在乳腺癌的發生、發展過程中具有重要的作用〔5，6〕。本研究顯示，P62 C-myc的表達與乳腺癌分級、淋巴結轉移、病理類型相關。組織學分級高低、淋巴結有無轉移、腫瘤是否浸潤是腫瘤惡性程度及預后的判斷指標。由此我們認為C-myc過表達與乳腺癌預后不良密切相關，且P62C-myc表達不受ER及PR狀況的影響，提示P62C-myc蛋白表達可能是乳腺癌重要的獨立預后標記因子。

本研究還發現PTEN的表達分別與Rb和C-myc具有相關關系，提示三者在乳腺癌的發生發展中存在某種內在關聯，PTEN與Rb對細胞周期同起負調控作用，乳腺癌中二者失活具有協同作用，共同促進腫瘤發展，PTEN的失活同樣使C-myc發生基因擴增的可能性加大，乳腺癌的患病概率增加。具體機制還需進一步深入研究。

1 Sano T，Lin H，Chen X，etal.Differential expression ofMMAC1/PTEN in glioblastoma multiforme:relationship to localization and prognosis〔J〕.Cancer Res，1999;59(8):1820-24.

2 Yuan HZ.The gene expression of the tumor suppressor PTEN in the breast cancer organizes〔J〕.JPrac Cancer，2002;17(1):37-9.

3 Yamasaki L.Role of the Rb tumor suppressor in cancer〔J〕.Cancer Treat Res，2003;115(6):209-39.

4 Dublin EA，Patel NK，Gillet CE，etal.Retinoblastoma and p16 proteins in mammary carcinoma:their relationship to cyclinD1 and histopathological parameters〔J〕.Cancer，1998;79(1):71-5.

5 Deming SL，Nass SJ，Dickson RB，et al.C-myc amplification in breast cancer:a meta-analysis of its occurrence and prognostic relevance〔J〕.Cancer，2000;83(12):1688-95.

6 Rummukainen JK，Salminen T，Lundin J，et al.Amplification of c-myc oncogene by chromogenic and fluorescence in situ hybridization in archival breast cancer tissue array samples〔J〕.Lab Invest，2001;81(11):1545-51.

Aberrant expression of PTEN，Rb and C-myc in breast cancer and its clinical significance

ZHAO Yun-Xia，GONG Xiao-M eng，CUIFang-Qin，et al.
Department of Physiopathology，Bengbu M edical College，Bengbu 233030，Anhui，China

ObjectiveTo investigate the roles of aberrant expressions of PTEN，Rb and C-myc in developmentof breast cancer and its clinical significance.MethodsImmunohistochemical(S-Pmethod)was used for detecting proteins of PTEN，Rb and C-myc in 150 cases of breast cancer and 30 cases of benign proliferative lesions.The outcomewas analyzed togetherwith their relation to clinical pathological parameters.ResultsThere were significant differences in expressions of PTEN，Rb and C-myc proteins between breast cancer and benign proliferative lesions(P＜0.05).Loss of expression of PTEN protein was related with lymph nodesmetastasis and the loss of expression of ER(P＜0.05).The loss of expression rate of Rb protein was higher in breast cancer gradeⅢ，but there was no statistical difference(P＞0.05).Overexpression of C-myc protein was related with histological grade，lymph nodemetastasis and pathological type(P ＜0.05).There was a positive correlation between PTEN and Rb，a negative correlation between PTEN and C-myc(P＜0.05).ConclusionsPTEN，Rb and C-myc co-participate in the development of breast cancer.They have important reference value to judge the prognosis of breast cancer.

Breast cancer;Breast benign proliferative lesion;PTEN;Rb;C-myc

R737.9

A

1005-9202(2012)12-2531-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.041

安徽省教育廳高校青年教師基金項目(2007 jq1133)

1 蚌埠醫學院病理學教研室

趙云霞(1977-)，女，碩士，講師，主要從事腫瘤病理研究。

〔2011-07-25收稿 2011-09-16修回〕

(編輯 曹夢園)