不同影響因素對熱原實驗中兔篩選的影響

岳 敏，李海濱，吳麗紅，李梓茜，顧為望

（南方醫科大學實驗動物中心，廣州 510515）

細菌內毒素等致熱物質進入人體后可引起發熱反應，嚴重者可導致休克或死亡。熱原檢測法則是將一定量的供試品，靜脈注入到家兔體內，在規定時間內觀察家兔體溫升高的情況，以判定試品中所含熱原的限度是否符合規定［1］。該實驗是檢測制品中熱原的一種經典有效的方法，至今仍被許多國家認為是熱原檢測的“金標準”。但影響家兔熱原質檢查實驗結果的因素很多，如家兔的健康狀況、遺傳質量、飼養和實驗環境、檢測儀器、實驗操作技術等。本文就我中心2009年1月～2010年12月的熱原實驗中的篩選合格率進行了統計學分析，來考察不同影響因素對熱原實驗中兔篩選的影響。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

普通級新西蘭兔，南方醫科大學實驗動物中心提供（SCXK〔粵〕2006-0015）。性別不限，體重（1.7～3.0）kg。

1.2 環境條件

清潔級飼養環境，實驗室溫度每次均控制在17.0～25.0℃，濕度控制在40～70％。且飼養室與熱原實驗室為相同屏障環境。使用許可證號：〔SYXK（粵）2006-0074〕。

1.3 檢測儀器

ZRY-2D智能熱原儀，天津大學無線電廠產品。

1.4 檢測方法

將測溫探頭插入實驗用兔肛內，深度約6 cm，測量時間不得少于1.5 min。初次篩選時，不注射藥物，每隔30min測量一次體溫，共測8次，測量結果均在38.0～39.6℃，且最高體溫和最低體溫差不超過0.4℃者判為初篩合格，可用于熱原實驗。二次篩選是指進行熱原實驗時，注射藥物前每隔30 min測量體溫一次，一般測量兩次，兩次體溫之差不超過0.2℃且兩次體溫均在38.0～39.6℃，判為二次篩選合格，可用于當日熱原實驗，以此兩次體溫的平均值作為該兔的基礎體溫。

1.5 統計分析

采用SPSS 13.0統計軟件，對不同影響因素條件下新西蘭兔的初篩情況和二次篩選情況進行χ2檢驗。

2 結果

2.1 不同季節的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統計結果：不同季節的新西蘭兔初篩結果之間有顯著性差異P＜0.05，以7～9月合格率最高；不同季節的新西蘭兔二次篩選結果之間有顯著性差異P＜0.05，以 1～3月合格率最高（見表1）。

2.2 不同體重值的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統計結果：

不同體重值的新西蘭兔初篩結果之間有顯著性差異P＜0.05，以1.7～2.0 kg重的新西蘭兔合格率最高；不同體重值的新西蘭兔二次篩選結果之間無顯著性差異P＞0.05（見表2）。

表1 不同季節對新西蘭兔初次篩選和二次篩選結果的影響Tab.1 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different seasons

表2 不同體重值對新西蘭兔初次篩選和二次篩選結果的影響Tab.2 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different body weight

2.3 不同性別的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統計結果：

不同性別的新西蘭兔初篩結果之間有顯著性差異P＜0.05，以雄性的新西蘭兔合格率較高；不同性別的新西蘭兔二次篩選結果之間無顯著性差異P＞0.05（見表3）。

2.4 不同室溫條件下的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統計結果：

在不同室溫的條件下，新西蘭兔初篩結果之間無顯著性差異P＞0.05，新西蘭兔二次篩選結果之間有顯著性差異 P＜0.05，以室溫條件為22.1～23.0時新西蘭兔的二次篩選率最高（見表4）。

2.5 不同濕度條件下的新西蘭兔初次篩選合格率和二次篩選合格率的比較

統計結果：

在不同濕度的條件下，新西蘭兔的初篩結果和二次篩選結果均有顯著性差異 P＜0.05和 P＜0.05，以濕度在61～70％時新西蘭兔的初篩合格率和二次篩選合格率最高（見表5）。

表3 不同性別對新西蘭兔初次篩選和二次篩選結果的影響Tab.3 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different sex

表4 不同室溫對新西蘭兔初次篩選和二次篩選結果的影響Tab.4 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different room temperature

表5 不同濕度對新西蘭兔初次篩選和二次篩選結果的影響Tab.5 Effect on the 1st screening and the 2nd screening of New Zealand Rabbits by different humidity

3 結論

初次篩選結果中，不同季節、體重值、性別、濕度條件下都有顯著性差異，篩選時間在7～9月、體重值為1.7～2.0 kg、雄性的新西蘭兔、在濕度為61～70％的條件下初次篩選率較高；在二次篩選結果中，不同季節、室溫、濕度條件下都有顯著性差異，篩選時間在1～3月、在室溫為22.1～23.0℃、濕度為61～70％的條件下新西蘭兔的二次篩選率較高。

4 討論

4.1由表1可以看出不同季節的新西蘭兔的初次篩選合格率和二次篩選合格率有顯著性差異。本次實驗統計結果顯示初篩時7～9月合格率最高，而二次篩選時1～3月合格率最高。杜穎等［2］也發現，家兔體溫是隨季節的改變而改變的，夏季的正常體溫高于冬季。本實驗中初次篩選合格率較高的也是在夏季，但二次篩選合格率較高是在冬、春季。可能是由于家兔經過初次篩選后，在第二次篩選時同樣還受到了其他如實驗室溫度、濕度等因素的制約。

4.2《中華人民共和國藥典》2005年版第三部中規定供試家兔的體重為1.7～3.0 kg［1］，由表2實驗統計發現在初次篩選時，1.7～2.0 kg重的新西蘭兔合格率最高。藥典要求未曾用于熱原檢查的家兔，應在檢查供試品前3～7日內預測體溫，進行初次篩選，通過初次篩選的家兔還需要進行二次篩選后才能做為注射藥物的實驗動物供使用，所以在初次篩選時，需要挑選體重較輕的家兔。

4.3徐文瑜等［3］通過實驗發現雌性家兔在基礎體溫和體溫波動幅度上都高于雄性家兔，且穩定性較雄性差。與本實驗結果相一致，由表3可以看出雄性家兔的初次篩合格率較高。可能是由于雌性動物較雄性動物對外界刺激的反應更為敏感，注射藥物和人員操作過程的產生一些刺激導致新西蘭兔緊張，引起了交感神經興奮，從而導致腎上腺素和去甲腎上腺素分泌增加、代謝水平升高而使體溫升高［4］。所以在實驗過程中，選擇雄性新西蘭兔用于實驗，效果更為理想。

4.4實驗室溫度是熱原實驗中最重要的環境條件之一。室溫過低或過高都會對家兔體溫有不同程度的影響。任珺等［5］和岳敏等［6］都發現不同室溫對家兔體溫的變化有影響，在不同的室溫條件下，新西蘭兔的篩選合格率和基礎體溫均受到影響。本實驗統計同樣也發現二次篩選過程中，由表4可見室溫條件為22.1～23.0℃時新西蘭兔的二次篩選率最高。所以，在實驗過程中要嚴格控制實驗室的環境溫度范圍，達到動物高篩選、高利用率的目的。

4.5新西蘭兔除了對實驗室環境的溫度非常敏感外，還對其生長環境中的濕度變化非常敏感，如果實驗室濕度過高時，實驗兔易患腳皮炎［7］，從而影響熱原的實驗結果。本實驗也發現濕度在61～70％時新西蘭兔的初篩合格率和二次篩選合格率最高（見表5）。

4.6除了上述提到的相關的影響因素外，熱原實驗還受到許多其他因素的影響，如家兔本身的健康狀況、遺傳質量等。由于結果是受到多個影響因素的綜合制約，只有找到各種影響因素結合最佳點，才能達到理想的實驗效果。尋找這一最佳點，還需要未來的實驗中大量的實驗數據統計證明和深入研究。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2005版三部）.北京：化學工業出版社，2005：附錄77-78.

［2］杜穎，徐文瑜，任珺，等.熱原檢查用家兔正常體溫的統計分析［J］.實驗動物科學與管理，2003，20（1）：17-19.

［3］徐文瑜，任珺，杜穎，等.家兔性別與體溫變化對熱原檢測結果的影響［J］.實驗動物科學與管理，2006，23（3）：22-25.

［4］呂式瑗.護理學基礎.上海：光明日報出版社，1996，1：86.

［5］任珺，徐文瑜，杜穎，等.室溫對家兔體溫的影響［J］.實驗動物科學，2007，24（2）：21-23.

［6］岳敏，范沛，巫瑋，等.室溫對熱原實驗中兔篩選的影響［J］.科技信息，2010，24：25-27.

［7］杜穎，李秀記，譚德講.實驗兔腳皮炎與相對濕度的相關性及對熱原篩選實驗的影響分析［J］.中國比較醫學雜志，2008，18（8）：21-24.