山西部分種豬場豬偽狂犬病分子流行病學(xué)調(diào)研

樊振華，姚敬明，孟帆，米瑞娟，羅甜甜，吳忻，劉文俊 ，王娟萍

（1.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，山西 太原 030032；2.山西省動物疫病預(yù)防控制中心，山西 太原 030024）

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。其可通過消化道、呼吸道、精液傳播，也可通過胎盤垂直傳播從而使母豬出現(xiàn)繁殖障礙，通常引起妊娠母豬流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎和產(chǎn)弱仔；初生仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀[1-2]，感染率和死亡率可達100%。感染仔豬出現(xiàn)發(fā)熱、腹瀉、呼吸困難、肌肉震顫、麻痹、共濟失調(diào)；成年豬感染后多呈隱性感染，造成長期帶毒排毒，成為最危險的傳染源，嚴(yán)重影響種豬場生產(chǎn)。該病廣泛分布于世界各地[3]，在我國自1984年劉永純首次報道此病后，迄今為止已有20多個省份相繼發(fā)生，并在許多種豬場呈暴發(fā)流行趨勢，給我國的養(yǎng)豬業(yè)特別是集約化養(yǎng)豬造成了巨大的經(jīng)濟損失[4-7]。

為了查清山西豬偽狂犬病流行情況，2009—2011年山西省畜牧獸醫(yī)研究所課題組深入到全省11個地市58個規(guī)模化種豬場進行了調(diào)查，同時采集病死豬的病料和不同日齡豬群血樣，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）進行了病原和感染抗體、免疫抗體檢測，初步查明了豬偽狂犬病在山西種豬場的流行特點、感染率和免疫情況，為有效預(yù)防和控制該病的流行提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 流行病學(xué)調(diào)查方法

重點對太原、晉城、長治、晉中、陽泉、呂梁、朔州、忻州、運城、臨汾、大同11個地市飼養(yǎng)的200頭以上能繁母豬的58個規(guī)模化種豬場進行調(diào)研，調(diào)查內(nèi)容包括豬群飼養(yǎng)管理、疫病防控、母豬的生產(chǎn)性能、繁殖障礙、仔豬與育肥豬是否有呼吸道和運動失調(diào)等癥狀、是否有高熱高死亡情況。對病死豬進行剖檢，觀察皮膚、漿膜、黏膜、淋巴結(jié)、內(nèi)臟器官等病變并采集病料組織，以便進行實驗室診斷，并進行詳細(xì)記錄。

1.2 病料的樣品采集與處理

嚴(yán)格按照動物疫病實驗室病料樣品采集方法的相關(guān)規(guī)定，從調(diào)研豬場采集病死豬的肺、肝、脾、腎、淋巴結(jié)等臟器組織，經(jīng)過處理后-70℃低溫冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

試驗采用PCR的方法進行豬偽狂犬病病毒的檢測。同時，隨機對各豬場存欄的不同日齡豬群前腔靜脈采血后分離血清，-70℃保存，采用ELISA的方法對豬偽狂犬病的感染抗體和免疫抗體進行檢測。

1.3 PCR方法檢測豬偽狂犬病病毒

豬偽狂犬病病毒檢測，采用北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)公司的豬偽狂犬病病毒PCR檢測試劑盒對待檢病料進行擴增，擴增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上電泳，溴化乙錠染色，在紫外光下觀察，可見一個217 bp的特異性片段，則判定為陽性。

1.4 ELISA方法檢測豬偽狂犬病感染抗體

豬偽狂犬病病毒感染抗體檢測，采用美國IDEXX公司生產(chǎn)的豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測試劑盒，對待檢豬血清進行檢測，診斷豬群是否感染豬偽狂犬病野毒株。

用樣品與陰性對照比率（S/N）作為判定標(biāo)準(zhǔn)，即S/N≤0.6為陽性，S/N＞0.7為陰性，0.6＜S/N≤0.7的樣品應(yīng)重測。

1.5 ELISA方法檢測豬偽狂犬病免疫抗體

豬偽狂犬病免疫抗體檢測采用美國IDEXX公司生產(chǎn)的豬偽狂犬病病毒gB抗體檢測試劑盒，對待檢豬血清進行檢測，可診斷豬群免疫豬偽狂犬病疫苗后產(chǎn)生的抗體。判定標(biāo)準(zhǔn)：S/N≤0.6為陽性，S/N＞0.7為陰性，0.6＜S/N≤0.7的樣品應(yīng)重測。

2 流行病學(xué)調(diào)研與檢測結(jié)果

2.1 流行病學(xué)調(diào)研結(jié)果

通過對山西11個地市58個規(guī)模化種豬場調(diào)查，發(fā)現(xiàn)大部分種豬場都給母豬免疫進口或國產(chǎn)豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗，常規(guī)的免疫程序為：公豬、母豬春、秋季各普免1次，每次4 mL/頭；仔豬在40日齡時免疫1次，劑量為2 mL/頭。也有一些豬場不進行免疫，或只免疫母豬。種豬場母豬繁殖障礙病較嚴(yán)重，母豬表現(xiàn)發(fā)熱、厭食、繁殖障礙，妊娠母豬早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎、弱胎、木乃伊胎等，尤其在妊娠后期，產(chǎn)前1個月左右多發(fā)；成年母豬呈慢性經(jīng)過。

1周齡仔豬、斷奶前后仔豬病死率高，表現(xiàn)發(fā)熱、呼吸困難、發(fā)育不良、運動障礙，有的豬耳部和體表腹側(cè)皮膚充血出血。育肥豬呼吸道病綜合征（PRDC）時有發(fā)生，表現(xiàn)喘氣、咳嗽、呼吸困難。表現(xiàn)間歇性抽搐、肌肉痙攣性收縮、癲癇發(fā)作等典型的豬偽狂犬病神經(jīng)癥狀的乳豬較少看到。

豬病以混合感染和繼發(fā)感染為主，特別是豬瘟和豬藍耳病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（PCV2）、豬肺炎支原體、豬傳染性胸膜肺炎、副豬嗜血桿菌等病經(jīng)常發(fā)生混合感染，或者繼發(fā)感染。

2.2 PCR檢測豬偽狂犬病病毒結(jié)果

共對58個規(guī)模化種豬場采集的329份病料，用PCR試劑盒進行了豬偽狂犬病病毒檢測，結(jié)果表明，感染率最高的地區(qū)是朔州，為28.57%，感染率最低的地區(qū)是晉中，為2%，平均感染率為9.12%（圖 1、表 1）。

表1 11個地市部分規(guī)模化種豬場豬偽狂犬病病毒PCR檢出結(jié)果

2.3 ELISA檢測豬偽狂犬病感染抗體結(jié)果

共對58個規(guī)模化種豬場采集的2221 份血清，用豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測試劑盒進行了豬偽狂犬病感染抗體檢測，結(jié)果表明，豬偽狂犬病病毒感染gE抗體陽性率，最高的地區(qū)是朔州，為14.86%；最低的地區(qū)是呂梁，為1%，平均為 3.20%（表 2）。

表2 11個地市部分規(guī)模化種豬場豬偽狂犬病感染抗體ELISA檢出結(jié)果

2.4 ELISA檢測豬偽狂犬病免疫抗體結(jié)果

共對58個規(guī)模化種豬場采集的2221 份血清，用豬偽狂犬病病毒gB抗體檢測試劑盒進行了豬偽狂犬病免疫抗體檢測，結(jié)果表明，豬偽狂犬病疫苗免疫gB抗體陽性率，最高的地區(qū)是晉城，為94.82%，最低的地區(qū)是長治，為41.26%，平均為 79.33%（表 3）。

表3 11個地市部分規(guī)模化豬場豬偽狂犬病免疫抗體ELISA檢出結(jié)果

3 小結(jié)與分析

（1）山西大部分種豬場母豬繁殖障礙病比較嚴(yán)重，以豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（PCV2）、豬肺炎支原體、豬傳染性胸膜肺炎等混合感染，或繼發(fā)感染為主。典型的豬偽狂犬病神經(jīng)癥狀的乳豬較少看到。大型豬場發(fā)生較少，較小規(guī)模豬場感染情況較重。說明大型豬場的管理和對該病的防疫工作較好。用PCR試劑盒檢測豬偽狂犬病病毒感染率，最高的地區(qū)是朔州，為28.57%，最低的地區(qū)是晉中，為2%，平均為9.12%。用豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測試劑盒檢測其感染gE抗體陽性率，最高的地區(qū)是朔州，為14.86%，最低的地區(qū)是呂梁，為1%，平均為3.20%。說明地區(qū)之間豬群感染率差異比較大，這可能與當(dāng)?shù)匾N、免疫防疫等有關(guān)。

（2）大部分種豬場都免疫豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗，應(yīng)用豬偽狂犬病病毒gB抗體檢測試劑盒檢測其疫苗免疫gB抗體陽性率，最高的地區(qū)是晉城，為94.82%，最低的地區(qū)是長治，為41.26%，平均為79.33%。說明地區(qū)之間免疫抗體陽性率差異比較大，可能與有些地區(qū)不重視免疫、或免疫程序不合理，或豬群感染豬瘟、豬繁殖與呼吸障礙綜合征、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型等免疫抑制性疾病有關(guān)。

（3）通過對山西11個地市58個種豬場豬偽狂犬病分子流行病學(xué)調(diào)研證明，豬群普遍感染豬偽狂犬病病毒，大部分豬場免疫情況較好，但也有一部分豬場不重視免疫。豬偽狂犬病對種豬場危害性很大，傳染性很強，今后要進一步加強該病的防疫免疫工作。姚敬明等[8]研究證明，無論免疫國產(chǎn)或進口豬偽狂犬病gE基因缺失弱毒疫苗都可以對豬偽狂犬病產(chǎn)生良好的免疫效果。給公豬和母豬采用跟胎免疫、或一年2次普免、或每隔4個月定時免疫均可取得良好的效果。給仔豬40日齡首免后，75日齡抗體逐漸降低，120日齡后基本消失。為了使豬體免疫力更強，不給野毒入侵的機會，建議適當(dāng)時間給仔豬進行2次加強免疫。國內(nèi)外許多學(xué)者使用基因缺失疫苗，結(jié)合檢疫淘汰凈化豬偽狂犬病[9-10]，如：荷蘭自1989年在全國范圍實施廣泛的免疫接種，2 a后種豬的豬偽狂犬病陽性率由81%降至18%，育肥豬的陽性率由49%降至1%[9]。通常種豬場采取的凈化方法是：種豬在10～12周齡和14～16周齡進行2次免疫，25周齡進行第3次免疫，以后每4個月加強免疫一次。并且所有被檢測出感染偽狂犬病的繁殖母豬一經(jīng)檢出即予淘汰[11]。今后，山西也應(yīng)逐步凈化豬偽狂犬病。

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