黃藥子凝膠的制備與質(zhì)量控制研究

鐘銳生，陳桂紅，李玉蘭（深圳市寶安區(qū)西鄉(xiāng)人民醫(yī)院，廣東深圳 518000）

尖銳濕疣為婦科臨床常見的性傳播疾病，目前國內(nèi)、外尚缺乏安全有效的治療方法，臨床上觀察黃藥子水煎外用治療陰道尖銳濕疣效果顯著[1]。現(xiàn)代藥理研究[2]表明，黃藥子塊莖含有多種甾體皂苷，水解后生成薯蕷皂苷元，具有抗炎、抗病毒和抗真菌的作用。凝膠具有較好的生物相容性，并有利于藥效釋放，可克服口服、注射等給藥途徑的不足，且攜帶方便。因此，筆者嘗試將黃藥子提取物制成凝膠，由此可克服其他劑型給藥所帶來的味苦等缺點，并建立了該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明，該制劑制備工藝簡單，含量測定方法簡單、準(zhǔn)確、可靠。

1 儀器與試藥

515高效液相色譜（HPLC）儀，包括2478紫外檢測器、717自動進樣器和色譜數(shù)據(jù)處理機（美國Waters公司）。

薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，批號:20100879，純度:采用HPLC面積歸一化法測定純度達到99.9%以上）；黃藥子提取物（陜西瑞康生物有限公司，批號:070161，活性物質(zhì)為薯蕷皂苷元，含量:1.050 mg·g－1（生藥），70%乙醇提取）；黃藥子凝膠（自制，規(guī)格:10 g∶1 000 g）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 處方及制備

2.1 處方

黃藥子提取物10 g，卡波姆（型號:940）10 g，丙二醇100 g，三乙醇胺18 g，70%乙醇240 g，蒸餾水適量。

2.2 制備

取卡波姆10 g加入1 000 g蒸餾水中，使之溶解完全，然后加入三乙醇胺攪拌，溶解至均勻，即得卡波姆凝膠基質(zhì)。然后將黃藥子提取物溶于丙二醇和乙醇混合液中，加入至卡波姆基質(zhì)中攪拌，并加入三乙醇胺調(diào)至pH6.5左右，并加入適量促透劑，加水至足量，攪勻得透明凝膠，分裝即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 一般檢查

本凝膠系棕色半透明凝膠體，質(zhì)地均勻、細膩，容易涂展，黏稠度適宜。加蒸餾水純化攪拌溶解后pH值為6.0～7.0。微生物限度檢查符合凝膠劑項下的規(guī)定（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅠQ）[3]。

3.2 薯蕷皂苷元的含量測定

3.2.1 色譜條件。色譜柱為Alltech C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水＝75∶25（體積比），流速為1 mL·min－1；柱溫為30℃；檢測波長為303 nm；靈敏度為0.04 AUFS；進樣量為10μL。

3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備。精密稱取薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品20.0 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制備成每mL含0.8 mg的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3.2.3 供試品溶液的制備。取本品1 g，精密稱定，置于100 mL錐形瓶中，用50 mL甲醇超聲提取30 min，過濾，蒸干；殘渣加20 mL鹽酸溶液（2 mol·L－1）置于沸水浴中水解2 h，冷卻后用石油醚（60～90℃）萃取3次，每次20 mL，合并萃取液，水洗至中性，回收石油醚，蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至10 mL，作為供試品溶液。

3.2.4 陰性樣品溶液的制備。按黃藥子凝膠的制備工藝制備缺黃藥子提取物的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備成陰性樣品溶液。

3.2.5 系統(tǒng)適用性試驗。分別取標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，按“3.2.1”項色譜條件分別進樣10μL，記錄色譜圖，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

在圖1中，供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜中在相應(yīng)位置處均出現(xiàn)主峰，陰性樣品對主峰未見干擾；而且，薯蕷皂苷元峰與其他組分色譜峰可以達基線分離，分離度大于1.5，以薯蕷皂苷元計理論板數(shù)不低于3 500。

3.2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。精密量取標(biāo)準(zhǔn)品溶液不同量，置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.08、0.24、0.4、0.56、0.8 mg·mL－1的溶液，精密量取10 μL注入色譜儀，以峰面積（Y）對濃度（X）作圖，得回歸方程:Y＝1.321X+13.456（r＝0.999 6），得薯蕷皂苷元的檢測濃度線性范圍為0.08～0.8 mg·mL－1。

3.2.7 精密度試驗。將上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進樣5次，每次10μL，結(jié)果峰面積RSD＝0.75%（n＝5），表明精密度良好。

3.2.8 穩(wěn)定性試驗。取同一批標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別在制備后2、4、6、8、12、16、18、24 h（室溫20～30 ℃下放置）測定薯蕷皂苷元的峰面積，計算得RSD＝0.54%（n＝8），表明溶液放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

3.2.9 重復(fù)性試驗。取同一批樣品5份，制備成供試品溶液，測定其中薯蕷皂苷元的含量，結(jié)果含量的RSD＝0.83%（n＝5），表明本方法重復(fù)性較好。

3.2.10 加樣回收率試驗。取黃藥子凝膠適量，共5份，精密加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，測定，計算平均回收率。結(jié)果，平均加樣回收率為98.79%，RSD＝0.88%（n＝5），詳見表1。

3.2.11 樣品含量測定。取不同批次的5批樣品，制備成供試品溶液后，測定其中薯蕷皂苷元含量，結(jié)果平均百分含量分別為100.29%、100.00%、100.57%、99.90%、100.09%，平均值為100.17%（RSD＝0.23%）。

4 討論

目前臨床治療陰道尖銳濕疣的方法主要有:（1）物理療法:包括激光、電灼、手術(shù)切除等。（2）局部外用藥物治療。經(jīng)臨床觀察發(fā)現(xiàn)物理療法創(chuàng)傷性大，創(chuàng)面易形成疤痕或并發(fā)細菌感染，影響局部皮膚愈合，且復(fù)發(fā)率高，尤其在黏膜部位更難以清除[4，5]。局部外用藥大多采用腐蝕性的藥物，此類藥物對陰道黏膜部位易引起創(chuàng)面周圍皮膚破潰疼痛，患者難以接受。筆者根據(jù)陰道尖銳濕疣多為觸染淫邪、濕毒下注所至的病因病機，結(jié)合文獻[6，7]，篩選清熱解毒、祛濕散結(jié)、殺蟲蝕贅類中藥，發(fā)現(xiàn)中藥黃藥子在治療陰道尖銳濕疣方面療效顯著。黃藥子為薯蕷科植物黃獨的干燥塊莖，味苦、性平，有涼血解毒、消癭散結(jié)功效[7]。《滇南本草》記載本品:“味苦澀，性寒，攻諸瘡毒，止咽喉痛，利小便，走經(jīng)絡(luò)，治筋骨痛、痰火、手足麻木、五淋濁白、婦人赤白帶下效。”現(xiàn)由于黃藥子塊莖含的甾體皂苷水解后生成薯蕷皂苷元，故本文選擇薯蕷皂苷元作為活性成分檢測。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝5）Tab 1 Results of recovery test（n＝5）

在建立含量測定方法時，筆者發(fā)現(xiàn)，在紫外-可見分光光度計上250～400 nm的波長范圍內(nèi)對薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品溶液進行掃描，發(fā)現(xiàn)其在303 nm波長處有最大吸收，故選擇303 nm為檢測波長；在流動相的選擇方面，筆者考察了文獻[8]并進行了預(yù)試驗，結(jié)果表明用乙腈-水＝75∶25作為流動相分析薯蕷皂苷元較為適宜，出峰時間短，且其他成分對主峰干擾較小。

綜上所述，本文建立的質(zhì)控方法簡單、準(zhǔn)確、重復(fù)性較好、靈敏度較高，可用于黃藥子凝膠的質(zhì)量控制。

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