伏立康唑滴眼液的處方優化及質量控制

劉美欣，高翔，劉彤，閆瑾，張毅（.天津市眼科醫院天津市眼科學與視覺科學重點實驗室，天津30000；.天津醫科大學藥學院，天津 300070）

伏立康唑滴眼液的處方優化及質量控制

劉美欣1＊，高翔2，劉彤1，閆瑾1，張毅1（1.天津市眼科醫院天津市眼科學與視覺科學重點實驗室，天津300020；2.天津醫科大學藥學院，天津 300070）

目的：設計伏立康唑滴眼液的處方并建立其質量控制方法。方法：以滴眼液滲透壓的綜合評分為指標，選取輔料丙二醇、聚乙二醇400和吐溫-80的加入量為影響因素，通過3次正交試驗進行處方優化設計及驗證試驗；考察優化處方所制制劑的初步穩定性（4周）和家兔刺激性，并對制劑進行質量評價。結果：優化處方中丙二醇、聚乙二醇400和吐溫-80的加入量分別為0、25、125mL，其滲透壓為0.230～0.320Osmol。4周穩定性考察中各指標未見明顯變化；刺激性評分結果為0（無刺激性）。質量評價中本品pH值為5.5～6.5，百分含量為96.38%～102.61%。結論：本品制備工藝簡單，質量可控，值得在臨床推廣使用。

伏立康唑滴眼液；處方設計；優化；質量控制

伏立康唑是新一代合成的三唑類廣譜抗真菌藥物，為氟康唑衍生物，化學結構與氟康唑類似。其作用機制是抑制真菌中由細胞色素P450介導的14α-固醇去甲基化，從而抑制麥角固醇的生物合成[1]。其抗菌譜廣，對臨床分離的支頂孢霉屬、鏈格孢屬、雙極霉菌屬、莢膜組織胞漿菌有抗菌作用，在0.05～2μg·mL－1濃度以下可以抑制大多數的菌株[2]。目前國內臨床已有其口服和注射劑型，滴眼劑型還處在實驗室階段尚未見商品上市。由于伏立康唑在水中的固有溶解度很低，為3.49×10－4g·mL－1，因此其要用于眼科的治療，必須提高伏立康唑在水中的溶解度。有報道[3]，伏立康唑0.5%、1.0%或3.0%溶液于健康馬眼滴眼（q 4h，連續滴7次）后，馬眼房水質量濃度（μg·mL－1）分別為：1.43±0.37、2.35±0.78、2.40±0.29，即其在房水中的質量濃度已超過包括念珠菌屬和曲菌屬在內的多數眼部真菌感染株的抑制90%菌生長的最小藥物質量濃度（MIC90）[4]。為此，筆者制備了0.5%的伏立康唑滴眼液，臨床用于預防和治療真菌性角膜炎和眼內炎。該制劑處方簡單，工藝簡便，適用于醫院配制使用，現介紹如下。

1 儀器與材料

LC-10AVP型高效液相色譜（HPLC）儀（日本島津公司）；AG135電子分析天平、FE20型pH計（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；SMC 30B滲透壓摩爾濃度測定儀（天河醫療儀器有限公司）。

伏立康唑原料藥（批號：20091102，純度：99.0%）、伏立康唑對照品（批號：20091222，純度：99.1%）均由珠海麗珠醫藥集團股份有限公司提供；0.5%伏立康唑滴眼液（天津市眼科醫院制劑室，規格：每支2mL）；丙二醇、聚乙二醇400（PEG）、吐溫-80、5%苯扎溴銨均為藥用級，甲醇、乙腈均為色譜純，其他試劑均為分析純。

家兔6只，♀♂各半，體重2.5～3.0kg，由北京維通利華實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2005-0002，為動物提供符合衛生標準的顆粒飼料（北京科澳協力飼料有限公司，產品許可證號：京動許（字）2000第015號）。

2 方法與結果

2.1 滴眼液處方設計及制備

2.1.1 基礎處方。伏立康唑、丙二醇、吐溫-80、PEG、5%苯扎溴銨、注射用水。

2.1.2 正交試驗a。選用L9（34）正交試驗表，以空白滴眼液（不含主藥）滲透壓的綜合評分為指標（標準值為0.2867Osmol），選取丙二醇、PEG和吐溫-80的加入量為影響因素，考察各因素對滲透壓的影響。空白滴眼液總量為20mL。若將滲透壓的標準值設為1，則各因素水平的綜合評分＝（1－|實際值－標準值|）×100%。預試驗因素水平見表1，試驗結果見表2，方差分析見表3（表中“＊”表示影響具有顯著性，下各表同）。

表1 試驗a因素水平表Tab 1 Factors and levels of experiment a

表2 試驗a結果Tab 2 Results of experiment a

表3 試驗a方差分析Tab 3 Analysis of variance of experiment a

經直觀分析和方差分析可知，A3B2C1為最佳處方組合；其中B因素對滴眼液滲透壓有顯著影響，影響因素從大到小為：B＞A＞C。由于B因素是主要影響因素，則在下一試驗中取其中間點，即加入量控制在1.0mL以內，同時加大丙二醇及吐溫-80的用量，即丙二醇、吐溫-80的加入量要超過表2中的水平3的量。由此設計了正交試驗b。

2.1.3 正交試驗b。因素水平見表4，正交試驗結果見表5，方差分析見表6。

表4 試驗b因素水平表Tab 4 Factors and levels of experiment b

經直觀分析和方差分析可知，A1B1C2為最佳處方組合；3個因素中因素A對滴眼液滲透壓有顯著影響，影響因素從大到小為：A＞B＞C。

綜合2次試驗的結果，經分析，在丙二醇量較小時其對滲透壓的影響效果居中；當其量加至0.4mL以上時其對滲透壓的影響成為最主要因素。由此確定丙二醇水平為0～0.4mL、PEG水平為0～1.0mL，吐溫-80水平為1～3.0mL，由此設計正交試驗c。

2.1.4 正交試驗c。因素水平見表7，試驗結果見表8，方差分析見表9。

表5 試驗b結果Tab 5 Results of experiment b

表6 試驗b方差分析Tab 6 Analysis of variance of experiment b

表7 試驗c因素水平表Tab 7 Factors and levels of experiment c

表8 試驗c結果Tab 8 Results of experiment c

經直觀分析和方差分析可知，A1B1C2為最佳處方組合，即丙二醇0mL、PEG 0.5mL、吐溫-802.5mL。3個因素中A因素對滴眼液滲透壓有較顯著性影響（0.05＜P＜0.10），影響因素從大到小為：A＞C＞B。

2.1.5 滴眼液最佳處方。根據正交試驗a、b、c結果，確定滴眼液最佳處方為：伏立康唑5g，吐溫-80125mL，PEG 25mL，5%苯扎溴銨2mL，純化水適量，合計1000mL。

處方中伏立康唑為主藥，吐溫-80為增溶劑，PEG為潛溶劑，苯扎溴銨為抑菌劑[5]。

2.1.6 制備。精密稱取伏立康唑5.0g，置于200mL燒杯中，加入PEG 25mL，超聲并攪拌使其分散均勻，取吐溫-80125mL加入燒杯中，超聲并攪拌使成為澄明溶液，將溶液移至適宜容器中，加入適量純化水，超聲并快速攪拌使其成為澄明溶液，加入純化水至1000mL，用0.45μm微孔濾膜過濾，100℃流通蒸汽滅菌30min，無菌條件下灌裝于5mL眼藥瓶中，即得。

2.1.7 驗證試驗。以最佳處方制備3批樣品，對其滲透壓、pH值、百分含量等指標進行考察，結果符合要求，見表10。

表9 試驗c方差分析Tab 9 Analysis of variance of experiment c

表10 3批樣品質量評價Tab 10 Quality evaluation of 3batches of samples

2.2 伏立康唑滴眼液質量標準

2.2.1 性狀。本品為淡黃色的澄明液體。

2.2.2 鑒別。取滴眼液2.0mL置于50mL量瓶中，加甲醇至刻度，于紫外分光光度計上掃描，結果在（256±1）nm波長處有最大吸收。

2.2.3 檢查。本品pH值5.5～6.5；滲透壓為0.230～0.320Osmol；其他均符合《中國藥典》2010年版附錄眼用制劑項下的規定[6]。

2.2.4 含量測定。（1）含量測定分析方法的建立。①色譜條件。色譜柱：Shim-packvp-ODS C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水＝40∶60，流速：1.0mL·min－1；檢測波長：256nm；柱溫：30℃；進樣量：20μL。②方法學考察。按相關方法進行線性試驗、回收率試驗和精密度試驗。以濃度（c）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標進行回歸，得回歸方程為A＝157946.909736+13576.427012c（r＝0.9998），伏立康唑檢測濃度線性范圍為0.0200～1.0000mg·mL－1。高、中、低3種濃度溶液平均回收率97.65%（RSD＝0.69%）；精密度試驗結果RSD分別為0.12%、0.40%、0.58%，平均值為0.37%。（2）測定。對照品溶液：精密稱取伏立康唑對照品20mg，加乙腈溶解，轉移至100mL量瓶中定容。供試品溶液：精密量取2mL伏立康唑滴眼液至50mL量瓶中，加乙腈定容。各取2種溶液20μL進樣，以外標法計算，3批樣品百分含量結果見表10。

2.3 伏立康唑滴眼液初步穩定性考察

取3批樣品，置于室溫、相對濕度為60%的環境中放置4周，根據前述考察項目和方法，分別于第0、1、2、4周取樣檢測，各項考察指標與0周比較，結果無明顯變化，詳見表11。

表11 樣品初步穩定性考察Tab 11 Investigation of preliminary stability of samples

2.4 刺激性試驗

預實驗前家兔肉眼觀察：角膜無混濁，結膜無充血、水腫及分泌物，瞳孔圓形，兩側等大，對光反射良好；裂隙燈檢查：角膜透明，無云翳、斑翳；虹膜紋理清晰，無充血水腫。熒光素染色：2%熒光素鈉溶液，每兔眼滴1滴后，用生理鹽水沖洗干凈，觀察角膜未著色者為角膜正常。經上述預選出無眼疾而健康的家兔4只用于以下實驗。

將家兔放入固定箱中，待其安定后，將眼睫毛剪去，輕輕把眼瞼拉成環形，每只家兔左眼結膜囊內滴受試藥物即：0.5%伏立康唑滴眼液（每眼50μL），滴入藥液50μL，滴樣量為0.25μg；右側眼結膜囊內滴0.9%氯化鈉注射液作為對照[7]。每次給藥時壓迫鼻淚管，并使眼被動閉合5～10s。每日3次，每次1滴，連續7d，記錄家兔0、1、3、5、7d的眼局部反應情況，依據眼刺激反應評分（從正常到反應嚴重評分依次為0、1、2、3、4分）標準[8]對實驗結果進行分析和評價，結果表明本品無刺激性，詳見表12。

從教育教學內容來看，當前創新創業教育主要形式包括理論政策宣講、創業人士經驗分享等，內容較為單一。創業是一個體系化的工程，從前期的計劃、項目的路演到后期公司的注冊成立等，有非常多的細節需要了解。但這在課堂教學過程中基本無法完全涉獵。此外，各高校開展的創業大賽等千篇一律，形式簡單，學生多為功利性的參加比賽積累綜合測評加分等，競賽水平大打折扣(王玉霞, 2015)。

表12 家兔眼刺激反應評分結果Tab 12 Results of eyes stimulation response score of rabbits

3 討論

3.1 立題依據

真菌性角膜炎（Fungal keratitis，FK）是一種嚴重的致盲性眼病。20世紀90年代后，FK發病率明顯升高，已由原來單純皰疹病毒性角膜炎占首位演變為真菌性角膜炎占首位，并且還有上升的趨勢[9]。目前，眼科常用的局部抗真菌藥物有兩性霉素B、那他霉素和氟康唑，酮康唑和伊曲康唑等用于口服。那他霉素價格昂貴未能普及；兩性霉素B毒性大，眼部刺激癥狀明顯；氟康唑眼內通透性較好、刺激性小、抗真菌譜廣，但其抗真菌作用不如兩性霉素B；且由于臨床上唑類藥物廣泛應用導致耐藥菌株日漸增多[1]。而隨著2002年新三唑類抗真菌藥伏立康唑的上市，由于其對臨床常見真菌的抗菌活性顯著，因此，為眼科真菌感染性疾病的治療提供了有力的武器[10]。伏立康唑通常耐受良好，最常見的不良反應為可逆性視力障礙，表現為視覺改變、視力模糊、色覺改變或畏光，通常為輕度，口服用藥者發生率約15%，靜脈給藥者接近30%；13.4%患者可發生血清氨基轉移酶升高，因此，應用伏立康唑的患者應定期監測肝功能[11]。局部用藥不良反應的報道還沒發現。體外試驗證實伏立康唑質量濃度≤250mg·L－1時，對視網膜色素上皮細胞及視神經膠質細胞無毒性，未見明顯視網膜毒性[12]。伏立康唑25μg玻璃體注射0.1mL可應用于真菌性眼內炎的治療[13]，其局部應用在房水和玻璃體中均能達到較高的藥物質量濃度[14]。筆者據此設計了伏立康唑滴眼液。

3.2 正交試驗參考指標的確定

滴眼液的滲透壓應盡量與淚液等滲。高滲溶液容易吸收水分，從而使眼部組織脫水、干燥而產生不適的感覺；低滲溶液則會造成角膜組織膨脹而引起疼痛。2010年版《中國藥典》附錄眼用制劑項[6]下新增滲透壓檢查項，因此，本試驗以滲透壓為正交試驗的參考指標。人眼可耐受的滲透壓范圍是0.8%～1.2%NaCl溶液的滲透壓[5]，在滲透壓摩爾濃度比（OT/OS）值為0.8～1.2的范圍內大多數人可以耐受，即滲透壓為0.228～0.372Osmol。

3.3 增溶劑的選擇

伏立康唑在水中溶解度小，易溶于有機溶劑，所以選擇適當增溶劑是提高伏立康唑溶解度的有效方法。查閱文獻[15]獲知在伏立康唑注射用滅菌粉末的溶解過程中使用了專用溶媒：丙二醇-乙醇（1∶1.6）。筆者先嘗試使用丙二醇作為增溶劑，但效果不是很好，加入量要在0.8mL以上才能使伏立康唑溶解，而預試驗顯示當其量加至0.4mL以上時其對滲透壓的影響成為最主要因素，另外用量較大還可引起刺激性增加。吐溫-80作為非離子表面活性劑，較陰離子及陽離子表面活性劑毒性低，安全性能好，因此，筆者嘗試選擇吐溫-80作為增溶劑。PEG作為潛溶劑，在適當比例條件下可以較好地增加主藥的溶解度，控制其對滲透壓的影響。本文的處方及制備方法可使伏立康唑的滴眼液濃度達到0.5%，從而發揮良好的抗真菌活性，試驗結果較為理想。

3.4 流動相的選擇

根據伏立康唑的溶解性，其在水中幾乎不溶，而在乙腈溶液中易溶，因此選擇乙腈-水體系作為流動相。分別以不同比例的流動相進行試驗：以乙腈-水（60∶40）作為流動相，保留時間太短（2.140min），不易于測定，且理論板數較低（3200）；以乙腈-水（50∶50）作為流動相，保留時間較好，但主峰與有關物質峰分離度較差（0.65）。最后確定以乙腈-水（40∶60）作為流動相，結果主峰保留時間為5.658min，與有關物質分離度較好（1.67），而且理論板數較高（4400.23）。經過方法學考察，表明此方法操作簡單快捷，結果準確可靠。

綜上所述，該制劑處方簡單、工藝簡便、質量可控，適用于醫院配制使用，值得在臨床推廣使用。

[1] 陳祖基.新型抗真菌藥在眼科的研究進展[J].眼科研究，2007，25（8）：629.

[2] Shapiro BL，Lalitha P，Fothergill AW，et al.Sensitivity of filamentous fungi isolated from fungal keratitis to amphotericin B，natamycin，caspofungin，itraconazole，voriconazole，and posaconazole[J].Invest Ophthalmol Vis Sci，2005，46（ARVO abst）：2622.

[3] Clode AB，Davis JL，Salmon J，et al.Evaluation of concentration of voriconazole in aqueous humor after topical and oral administration in horses[J].Am J Vet Res，2006，67（2）：296.

[4] Hariprasad SM，Mieler WF，Holz ER，et al.Determination of vitreous，aqueous，and plasma concentration of orally administered voriconazole in humans[J].Arch Ophthalmol，2004，122（1）：42.

[5] 陳祖基.眼科臨床藥理學[M].北京：化學工業出版社，2002：35-36.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅠG.

[7] 王文彤，陶遵威，張 娜，等.鹽酸左氧氟沙星滴眼液在兔眼房水內的藥動學[J].中國醫藥工業雜志，2011，4（2）：117.

[8] 國家食品藥品監督管理局.化學藥物急性毒性試驗技術指導原則[S].2006.

[9] 劉昭升，謝素貞，閆 蕾，等.福建地區真菌性角膜炎的調查[J].中國眼耳鼻喉科雜志，2009，9（4）：239.

[10] Bunya VY，Hammersmith KM，Rapuano CJ，et al.Topical and oral voriconazole in the treatment of fungal keratitis[J].Am J Ophthalmol，2007，143（1）：151.

[11] 申蘭慧，石 濤，張 巖，等.新一代廣譜抗真菌藥伏立康唑[J].東南大學學報，2004，23（1）：62.

[12] Kernt M，Neubauer AS，de Kaspar HM，et al.Intervitreal voriconazole：in vitro safety-profile for fungal endophthalmitis[J].Retina，2009，29（3）：362.

[13] Lin RC，Sanduja N，Hariprasad SM.Successful treatment of postoperative fungal endophthalmitis using intravitreal and intracameral voriconazole[J].J Ocul Pharmacol Ther，2008，24（2）：245.

[14] Wu PC，Lai CH，Tan HY，et al.The successful medical treatment of a case of Paecilomyces lilacinus keratitis[J].Cornea，2010，29（3）：357.

[15] 肖 靜，康學軍，黃 曉.注射用伏立康唑專用溶劑的氣相色譜含量測定[J].化學試劑，2005，27（10）：616.

Formula Optimization and Quality Control of Voriconazole Eye Drops

LIU Mei-xin，LIU Tong，YAN Jin，ZHANG Yi（Tianjin Key Lab of Ophthalmology and Visual Science，Tianjin Eye Hospital，Tianjin 300020，China）
GAO Xiang（School of Pharmacy，Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China）

OBJECTIVE：To design the formula of Voriconazole eye drops and to establish its method of quality control.METHODS：The formula was optimized by L9（34）orthogonal test for 3times with comprehensive score of osmotic pressure of eye drops as index using the amount of propylene glycol，PEG400and Tween-80as factors.The preliminary stability of preparations（4weeks） and its stimulation to rabbits were investigated，and the quality of preparation was evaluated.RESULTS：The added amounts of propylene glycol，PEG400and Tween-80were 0，25，125mL，and the osmotic pressure of the preparation was 0.230～0.320Osmol.The index of stability test had no significant change in 4weeks.Irriation score was 0（not irritant）.In quality evaluation，pH value of sample was 5.5～6.5and labblled amounts were 96.38%～102.61%.CONCLUSION：The preparation of Voriconazole eye drops is simple in technology process and controllable in quality，and it is worthy of promoting in clinic.

Voriconazole eye drops；Formula design；Optimization；Quality control

R943；R988.1；R978.5

A

1001-0408（2012）05-0430-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.05.17

＊副主任藥師。研究方向：醫院藥學、醫院制劑。電話：022-27313336-80162。E-mail：lmxing1964@sina.com

2011-03-09

2011-06-07）