復合微生態制劑與飼用抗生素對肉雞生長性能、免疫性能和抗氧化指標的影響

謝全喜 崔詩法 徐海燕 曹銀生 林顯華 辛國芹 谷 巍

隨著我國養殖業的迅速發展，由細菌或病毒引起的動物疾病日漸增多，但抗生素的廣泛應用，不僅降低了畜產品的品質，而且殘留在畜禽食品中，危害人類健康。目前，肉雞養殖場為了防止雞生病，提高養殖效益，剛進雞苗時就飼喂抗生素，導致雞群自身抵抗力下降，有的甚至會引起免疫抑制。微生態制劑是由活體微生物制成的生物活性制劑，它能有效地補充畜禽消化道內的有益微生物，改善消化道菌群平衡［1］，迅速提高肉雞胸腺、脾臟、法氏囊指數，促進胸腺、脾臟、法氏囊的發育［2］。此外，微生態制劑還具有無殘留、無毒副作用等特點，可改善養殖生態環境，達到生態防治的目的，使養殖生產良性發展，取得更好的經濟效益和生態效益［3］。目前，單一微生態制劑在肉雞養殖中的作用報道較多，王俊峰等［4］用合生素飼喂愛拔益加肉雞42 d，合生素極顯著降低了肉雞前期采食量和料重比及全期采食量，顯著降低了后期采食量；陳家祥等［5］用地衣芽孢桿菌飼喂雄性麻羽肉雞28 d后發現，基礎飼糧中添加50 mg／kg地衣芽孢桿菌制劑可使肉雞平均日增重顯著升高，料重比顯著降低，血清中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性均顯著升高。本試驗旨在研究由高活性抑菌型枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、載體組成的復合微生態制劑與飼用抗生素對肉雞生長性能、免疫性能和抗氧化指標方面的影響，為復合微生態制劑替代飼用抗生素在肉雞生產中的推廣應用提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

復合微生態制劑：植物乳桿菌（1.557）2.0×108CFU／g、枯 草 芽 孢 桿 菌 （1.1413）3.0×108CFU／g、維生素E 20 IU／g、維生素C 50 mg／g，載體為葡萄糖。其中，植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌購自中國普通微生物菌種保藏中心；維生素E和維生素C購自河北省石家莊中試盛邦商貿有限公司。

飼用抗生素：市售莫能霉素、抗敵素、鹽霉素、桿菌肽鋅和阿散酸；雞新城疫弱毒苗和傳染性法氏囊疫苗均購自齊魯動物保健品廠；雞分泌型免疫球蛋白A（sIg A）ELISA試劑盒、雞血清免疫球蛋白G（Ig G）ELISA試劑盒均購自上海勁馬實驗設備有限公司；雞血清總抗氧化能力（T－AOC）檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗設計與飼糧組成

將體重均勻、健康狀況基本相同的500只1日齡雌性肉雞隨機分成5個組，每組4個重復，每個重復25只。試驗預試期3 d，飼喂基礎飼糧，飲用煮開后涼透的自來水；正試期35 d。Ⅰ組為空白對照組，飼喂不含抗生素的基礎飼糧；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組為復合微生態制劑組，分別在基礎飼糧中添加1.0‰、2.0‰、4.0‰復合微生態制劑；Ⅴ組為抗生素組，試雞4～17日齡在基礎飼糧中添加莫能霉素（90 g／t）、抗 敵 素 （30 g／t）、阿 散 酸 （100 g／t），18～38日齡在基礎飼糧中添加鹽霉素（70 g／t）、桿菌肽鋅（30 g／t）、阿散酸（100 g／t）。

采用玉米－豆粕型基礎飼糧，其配制參照NRC（1994），基礎飼糧組成及營養水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養水平（干物質基礎）Table 1 Co mposition and nutrient levels of basal diets（DM basis） %

1.3 飼養管理

試驗雞各重復采用分籠飼養，自由采食和飲水。舍內光照、溫度和濕度嚴格按照常規飼養管理要求進行控制，按常規免疫程序對雛雞進行新城疫及法氏囊免疫。每日換食換水前進行食槽和飲水器殺菌消毒。試驗期間詳細記錄各組飼料消耗及試驗雞的健康狀況。

1.4 測定指標和方法

1.4.1 生長性能

分別于試雞10、17、24、31、38日齡以重復為單位對禁食（自由飲水）12 h后的肉雞稱重，記錄各階段供料量、剩余料量和損失料量，計算各階段平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.4.2 免疫器官指數

分別于試雞10、17、24、31、38日齡從每個重復中隨機抽取2只禁食（自由飲水）12 h后的肉雞，分別稱重，頸動脈放血處死，立即無菌解剖并分離脾臟和法氏囊，剔除脂肪后稱鮮重，計算免疫器官指數。免疫器官指數的計算公式如下：

免疫器官指數（mg／g）＝免疫器官重量／活體重。

1.4.3 血清免疫球蛋白

分別于試雞10、17、24、31、38日齡從每個重復中隨機抽取2只肉雞，頸動脈采血，待血液凝固后，3 000 r／min離心10 min分離血清，采用雞血清Ig G ELISA試劑盒測定血清中Ig G含量。

1.4.4 T－AOC

分別于試雞10、24、38日齡從每個重復中隨機抽取2只肉雞，頸動脈采血，3 000 r／min離心10 min分離血清，使用T－AOC檢測試劑盒測定血清T－AOC。

1.4.5 腸液中sIg A

在試雞10、24、38日齡，各組隨機選取2只肉雞，采用頸動脈放血處死，無菌操作取盲腸內容物，在滅菌生理鹽水中搖勻，采用雞sIg A ELISA試劑盒測定腸液中sIg A含量。

1.4.6 新城疫血凝抑制抗體效價

在試雞10、24、38日齡，各組隨機選取2只肉雞，頸動脈采血，分離血清，進行倍比稀釋，用V型血凝板檢測血清中的血凝抑制抗體效價［6］。

1.5 數據統計與處理

試驗數據采用SPSS 13.0進行統計，采用one－way ANOVA進行方差分析，LSD法進行組間多重比較，P＜0.05表示差異顯著，結果均以平均值±標準差表示。

2 結 果

2.1 復合微生態制劑對肉雞生長性能的影響

試驗期間肉雞的健康狀況良好，僅預試期死亡3只肉雞，可能是由于籠養密度大，擁擠踩踏所致。

由表2可知，4～10日齡時，Ⅴ組肉雞平均日采食量最高，顯著高于對照組和復合微生態制劑組（P＜0.05）；Ⅲ組和Ⅳ組肉雞平均日增重顯著高于對照組和抗生素組（P＜0.05），料重比顯著低于對照組和抗生素組（P＜0.05），且Ⅲ組肉雞平均日增重最高，與Ⅳ組差異不顯著（P＞0.05），Ⅳ組肉雞料重比最低，但與Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05）。

11～17日齡時，Ⅳ組肉雞平均日采食量顯著低于其他各組（P＜0.05）；Ⅱ組和Ⅲ組肉雞平均日增重顯著高于其他各組（P＜0.05）；Ⅲ組肉雞料重比最低，且顯著低于對照組和抗生素組（P＜0.05）。

18～24日齡時，Ⅳ組肉雞平均日采食量最低，顯著低于其他各組（P＜0.05），Ⅲ組肉雞平均日采食量次之，顯著低于對照組和抗生素組（P＜0.05）；Ⅲ組肉雞平均日增重顯著高于對照組和抗生素組（P＜0.05），且料重比最低，顯著低于其他各組（P＜0.05）。

25～31日齡時，Ⅱ組和Ⅲ組肉雞平均日采食量顯著低于對照組和抗生素組（P＜0.05），且Ⅱ組和Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05）；Ⅲ組肉雞平均日增重最高，顯著高于其他各組（P＜0.05），且Ⅲ組肉雞料重比最低，顯著低于對照組和抗生素組（P＜0.05）。

32～38日齡時，Ⅲ組肉雞平均日采食量顯著低于其他各試驗組（P＜0.05），且與對照組差異不顯著（P＞0.05）；Ⅲ組肉雞平均日增重最高，但與其他各組差異不顯著（P＞0.05）；Ⅱ組和Ⅲ組肉雞料重比顯著低于對照組和抗生素組（P＜0.05），且Ⅱ組肉雞料重比最低，與Ⅲ組間差異顯著（P＜0.05）。

總體看來，在提高肉雞平均日增重和降低料重比方面，Ⅲ組的效果較好、較穩定，添加水平較合適。

表2 復合微生態制劑和飼用抗生素對肉雞生長性能的影響Table 2 Effects of co mpound pr obiotics and antibiotics on gr owth perf or mance of br oilers

2.2 復合微生態制劑對肉雞免疫器官指數的影響

所有處死的肉雞免疫器官外觀未見異常。由表3可知，10日齡時，Ⅱ組和Ⅲ組脾臟指數差異不顯著（P＞0.05），但均顯著高于對照組和Ⅴ組（P＜0.05）。其中Ⅲ組分別高出Ⅰ組、Ⅴ組11.4%和16.7%；17日齡時，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組脾臟指數均顯著高于對照組和抗生素組（P＜0.05），其中Ⅲ組脾臟指數最高，分別高出Ⅰ組、Ⅴ組24.7%和26.0%；24和31日齡時，各試驗組脾臟指數呈上升趨勢，其中Ⅲ組脾臟指數均最高，與其他各試驗組差異均顯著（P＜0.05），分別比Ⅴ組高40.6%和47.2%；38日齡時，Ⅲ組脾臟指數顯著高于對照組和抗生素組（P＜0.05），分別高出32.4%和39.1%，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組間差異不顯著（P＞0.05）。總體看來，在提高肉雞脾臟指數方面，Ⅲ組的效果較好。

10日齡時，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組法氏囊指數顯著高于對照組和抗生素組（P＜0.05），且Ⅲ組法氏囊指數最高；17日齡時，Ⅲ組、Ⅳ組法氏囊指數顯著高于對照組和抗生素組（P＜0.05），其中Ⅲ組分別高出Ⅰ組、Ⅴ組27.0%和28.5%；24日齡時，Ⅲ組法氏囊指數最高，與其他各試驗組差異均顯著（P＜0.05），分 別 高 出 Ⅰ 組、Ⅴ 組 43.7% 和47.7%；31日齡時，各試驗組法氏囊指數均有一定程度地下降，但Ⅲ組法氏囊指數仍然最高，顯著高于對照組和抗生素組（P＜0.05）；38日齡時，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組法氏囊指數顯著高于對照組和抗生素組（P＜0.05），且Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組間差異不顯著（P＞0.05），其中Ⅱ組法氏囊指數最高。總體看來，在提高肉雞法氏囊指數方面，復合微生態制劑的添加效果以Ⅲ組較好。

表3 復合微生態制劑和抗生素對肉雞脾臟指數和法氏囊指數的影響Table 3 Effects of co mpound pr obiotics and antibiotics on indices of spleen and bursa of Fabricius of br oilers mg／g

2.3 復合微生態制劑對肉雞血清Ig G含量的影響

由表4可知，10日齡時，各組間不存在顯著性差異（P＞0.05）；17和24日齡時，Ⅲ組Ig G含量最高，與其他各組存在顯著性差異（P＜0.05），17日齡時，Ⅲ組分別高出Ⅰ組、Ⅴ組22.1%和24.3%，24日齡時，Ⅲ組分別高出Ⅰ組、Ⅴ組20.2%和16.2%；31和38日齡時，除對照組外，各組間不存在顯著性差異（P＞0.05）。總體來看，Ⅲ組即添加2.0‰復合微生態制劑組對血清中Ig G的影響效果較好。

表4 復合微生態制劑和抗生素對肉雞血清IgG含量的影響Table 4 Eff ects of co mpound pr obiotics and antibiotics on seru m Ig G concentr ation of br oilers ng／mL

2.4 復合微生態制劑對肉雞血清T－AOC的影響

由表5可知，10日齡時，Ⅲ組T－AOC最高，與其他各組存在顯著性差異（P＜0.05），高出Ⅴ組45.2%；24日齡時，Ⅰ組最低，與其他各組存在顯著性差異（P＜0.05），Ⅲ組最高，分別高出Ⅰ組、Ⅴ組28.9%和14.6%；38日齡時，Ⅲ組血清中T－AOC最高，與其他各組差異顯著（P＜0.05），分別高出Ⅰ組、Ⅴ組49.4%和56.7%。

2.5 復合微生態制劑對肉雞盲腸內容物中sIgA含量的影響

由表6可知，10日齡時，Ⅲ組盲腸內容物的sIg A含量最高，但與Ⅱ組和Ⅴ組差異不顯著（P＞0.05）；17日齡時，Ⅲ組sIg A含量較10日齡時稍微有所下降，Ⅱ組含量最高，與Ⅲ組差異不顯著（P＞0.05），與其他各組存在顯著性差異（P＜0.05）；24日齡時，Ⅲ組含量回升到最高，與其他各組差異顯著（P＜0.05），分別高出Ⅰ組、Ⅴ組17.7%和11.4%；31日齡時，各組sIg A含量較24日齡時均下降，Ⅲ組比Ⅴ組高39.3%，差異顯著（P＜0.05）；38日齡時，Ⅱ組、Ⅲ組間差異不顯著（P＞0.05），但與其他各組存在顯著性差異（P＜0.05）。總體看來，除17日齡外，其他日齡Ⅲ組盲腸內容物中sIg A的含量都是最高的，也就是說2.0‰復合微生態制劑添加量效果最好。

表5 復合微生態制劑和抗生素對肉雞血清T－AOC的影響Table 5 Eff ects of co mpound pr obiotics and antibiotics on seru m total antioxidant capacity of br oilers U／mL

表6 復合微生態制劑和抗生素對肉雞盲腸內容物中sIg A含量的影響Table 6 Effects of co mpound probiotics and antibiotics on sIg A content of cecal contents of broilers ng／g

2.6 復合微生態制劑對肉雞血清新城疫抗體效價的影響

由表7可知，10日齡時，微生態制劑組新城疫抗體效價均高于Ⅰ組和Ⅴ組，且Ⅲ組最高，與其他各組存在顯著性差異（P＜0.05）；24日齡時，Ⅲ組分別高出Ⅰ組、Ⅴ組19.7%和18.4%，差異顯著（P＜0.05），且各試驗組抗體效價水平較10日齡時均有較大程度地提高，這可能是因為第2次強免后使得疫苗效力得到有力加強；隨著肉雞日齡的增加，38日齡時，Ⅲ組效價最高，與其他各組均差異顯著（P＜0.05），但各組抗體效價水平均呈現不同程度地下降，較24日齡時，Ⅲ組降低32.7%、Ⅴ組降低48.4%，這說明飼用抗生素組下降較快。試驗結果表明，復合微生態制劑的添加可以在一定程度上增強抗體表達水平，其中以2.0‰添加量效果最好。

表7 微生態制劑和抗生素對肉雞血清新城疫抗體效價的影響Table 7 Effects of co mpound pr obiotics and antibiotics on antibody titer of Newcastle disease in ser u m of br oilers

3 討 論

3.1 復合微生態制劑和飼用抗生素對肉雞生長性能的影響

微生態制劑具有促進生長、提高飼料轉化率等多種功能。許多研究表明，飼糧中添加微生態制劑可有效改善玉米－豆粕型飼糧的能量利用率，提高動物的生產性能［7－8］。吳亨進等［9］的研究顯示，在飼料中添加EM復合微生態制劑的試驗組肉雞增重速度較對照組明顯，差異顯著（P＜0.05）。李亞貴等［10］研究表明，用復合微生態制劑飼喂35日齡斷奶仔豬，20 d后，與對照組相比較，增重提高19.6%，節約飼料15.22%。本試驗結果表明，微生態制劑組的料重比低于對照組和抗生素組，以2.0‰添加量的效果最好。所以微生態制劑以一定比例添加到肉雞飼糧中，可以改善肉雞的生長性能。

3.2 復合微生態制劑和飼用抗生素對肉雞免疫性能的影響

3.2.1 復合微生態制劑和飼用抗生素對肉雞免疫器官指數的影響

法氏囊是禽類特有的體液免疫器官，脾臟則是禽類最大的外周免疫器官，是體內產生抗體的主要器官，參與全身的細胞免疫和體液免疫［11］。免疫器官的發育狀態及機能強弱直接決定著禽類的免疫水平［12］。免疫器官相對重量增加，說明機體細胞的免疫機能增加。本試驗中，17、24、31、38日齡時，復合微生態制劑2.0‰添加組脾臟指數和法氏囊指數都高于飼用抗生素組，24和31日齡時，Ⅲ組脾臟指數和Ⅴ組差異顯著，24日齡時，Ⅲ組法氏囊指數顯著高出Ⅴ組47.7%。試驗結果表明，微生態制劑對肉雞免疫器官的發育有促進作用，尤其是添加2.0‰的復合微生態制劑效果最為明顯。

3.2.2 復合微生態制劑和飼用抗生素對肉雞血清中Ig G的影響

Ig G是生物體液內主要的一類抗體，占血液中免疫球蛋白總量的70%～75%。在結合補體、增強免疫細胞吞噬病原微生物和中和細菌毒素的能力方面，具有重要作用，能有效地抗感染。本試驗中，17、24日齡時，Ⅲ組血清中Ig G最高，與Ⅴ組差異顯著；10、31、38日齡時，各試驗組不存在顯著性差異（P＜0.05），但Ⅲ組血清中Ig G含量較高。結果表明飼糧中添加2‰的復合微生態制劑能夠提高肉雞血清中Ig G的量，提高肉雞免疫性能。

3.2.3 復合微生態制劑和飼用抗生素對肉雞盲腸內容物中sIg A含量的影響

免疫球蛋白A（Ig A）在動物血清中含量較少，占血清免疫球蛋白總量的10%～20%，但它是外分泌液中的主要免疫球蛋白，分泌液中的Ig A稱為sIg A。動物腸道與外界環境相通，長期與大量的病原微生物接觸。因此，為了抵抗病原體的感染，黏膜免疫系統構成了機體抵抗病原體入侵的第一道屏障，黏膜相關淋巴組織主要部位是腸道相關淋巴組織（GALT），且GALT是構成這道屏障的主要物質基礎，而黏膜免疫的主要效應因子是sIg A。消化道黏膜表面定植、生長的大量有益菌，則是黏膜免疫系統中的重要組成部分。微生態制劑是一類能在腸道定植，維護腸道菌群平衡，并刺激腸道黏膜免疫組織，對腸道黏膜免疫有重要影響的有益微生物群落。大量試驗證明，添加微生態制劑后能明顯提高抗體水平，產生干擾素，提高免疫球蛋白濃度和巨噬細胞活性，增強機體免疫功能和抗病力［13］。目前認為，動物口服益生菌后，能夠調整腸道菌群，使腸道微生物系統處于最佳的平衡狀態，活化腸黏膜內的相關淋巴組織，使sIg A抗體分泌增強［14］。本試驗中，24、31、38日齡時，Ⅲ組和Ⅴ組存在顯著性差異，Ⅲ組sIg A抗體水平最高。結果表明，Ⅲ組即復合微生態制劑2‰添加量時能顯著增強黏膜免疫的作用，提高機體免疫功能和抗病力。

3.2.4 復合微生態制劑和飼用抗生素對肉雞新城疫血凝抑制抗體效價的影響

多年來，新城疫一直為嚴重危害養雞業的主要傳染病之一。動物體血清中的抗體水平高低為評估其免疫狀況的重要指標之一，目前通常選用新城疫血凝抑制抗體水平來評價肉雞的體液免疫情況。李樹鵬等［15］的研究表明，在基礎飼糧基礎上添加黃芪多糖、益生菌劑及合生元后，試驗組雛雞血清新城疫抗體效價均較對照組升高。本試驗中，24日齡時測得的抗體水平最高，主要原因可能是21日齡的二免起到了很好的強化作用。38日齡時Ⅲ組抗體效價與24日齡時相比降低32.7%，而Ⅴ組飼用抗生素組則下降48.4%，說明復合微生態制劑Ⅲ組新城疫抗體與飼用抗生素組相比下降速度較慢。微生態制劑中的益生菌作為抗原不斷刺激機體免疫系統，機體的B細胞分泌特異性抗體的功能也得到不斷刺激，從而使B細胞抗體分泌能力得到延長，抗體滴度下降較慢。

3.3 復合微生態制劑和飼用抗生素對肉雞血清T－AOC的影響

T－AOC是衡量機體抗氧化能力的指標，它的高低代表機體的總抗氧化能力。肉雞由于其營養及生理特點，體內脂質含量相對較高，故容易發生脂質過氧化反應，產生的過氧化產物對機體有一定的傷害。王巧莉等［16］的研究表明，在基礎飼糧中添加0.3 mg／kg酵母硒時，血清中各周齡T－AOC以及肝臟中6周齡T－AOC顯著增強。本試驗結果顯示，2.0‰復合微生態制劑組顯著提高了10、24、38日齡時T－AOC。

4 結 論

① 添加2.0‰復合微生態制劑組效果最好，能夠提高肉雞生長性能，提高其血清T－AOC。

② 適量添加復合微生態制劑可以提高肉雞的脾臟指數和法氏囊指數，提高血清中Ig G水平，提高盲腸內容物中sIg A含量，增強肉雞新城疫血凝抑制抗體效價水平，最終增強其機體免疫力。

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