正交設(shè)計(jì)優(yōu)選活血貼的最佳提取工藝

張曉旭，張英華，王 沛*

(1.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006;2.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117)

活血貼是以當(dāng)歸、透骨草、伸筋草、劉寄奴、川芎、草烏、花椒、防風(fēng)、姜黃、紅花、威靈仙、艾葉等為主要原料制成的復(fù)方純中藥組成的醫(yī)院制劑,具有活血化瘀的功效[1]。本研究采用正交設(shè)計(jì)方法，以方中主藥當(dāng)歸中的阿魏酸含量為參考指標(biāo)對該臨床組方的提取工藝進(jìn)行了研究。

1 儀器與試劑

電光分析天平，HC-TP11-2型，上海精科天平廠；數(shù)顯恒溫水浴鍋，HH-2型，國華電器有限公司；循環(huán)水多用真空泵，型號:SHB-3，鄭州杜甫儀器廠；紫外-可見分光光度計(jì)TU-1810，北京普析通用儀器有限公司；紅外干燥箱WS70-2，國華電器有限公司。處方中飲片均購自吉林北藥藥材采購站，所用中藥飲片特請長春中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室老師鑒定，所用藥品均符合《中國藥典》2010年版所載之藥用科屬種。阿魏酸對照品(批號：001100-99060)，購于中國藥品生物制品檢定所。乙醇(無水乙醇)，500 mL，分析純，20100820，北京化工廠。乙醇(95%)，500 mL，分析純，20110816，北京化工廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 對照品溶液制備：取阿魏酸對照品在105 ℃下干燥至恒重，取適量，精密稱量，放于25 mL容量瓶中，加少許無水乙醇溶解，添加無水乙醇至所需劑量,搖勻。得0.100 mg/mL的對照品溶液。分別精密吸取阿魏酸對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別加無水乙醇定容至10 mL，搖勻。分別以無水乙醇為空白溶液，在305同nm波長下，分別測定相應(yīng)的吸光度值，并以吸光度值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸處理。得線性關(guān)系曲線為Y=1.529 0X+0.031 5，r=0.998 8，式中Y為吸光度值,X為濃度。結(jié)果表明,待測物質(zhì)即在0.01～0.05 mg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.2 精密度實(shí)驗(yàn) 按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，分別精密量取阿魏酸對照品溶液0.3 mL共6分，按上述操作進(jìn)行,測定吸收度值，結(jié)果RSD為0.165%(n=6)，表明實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性較好,所得數(shù)據(jù)精確。

2.3 組方中阿魏酸的含量測定 稱取組方量藥材適量，經(jīng)提取，取趁熱過濾，合并之濾液，回收乙醇至無醇味，敞口揮發(fā)乙醇，待乙醇揮干后，取殘?jiān)?向其中加入無水乙醇20 mL，充分溶殘?jiān)^濾，濾液定容至25 mL。按2.2項(xiàng)下，以無水乙醇為空白溶液，在λ=305 nm波長下，測定相應(yīng)的吸光度值。

2.4 提取工藝條件篩選 按處方量稱取當(dāng)歸、透骨草、伸筋草、劉寄奴、川芎、紅花等150 g，共9分，設(shè)定乙醇濃度(A)、乙醇加入量(B)、提取時間(C)和提取次數(shù)(D)為考察指標(biāo)因素，按L9(34)正交表(見表1)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,按2.3項(xiàng)下測定組方中阿魏酸的含量。

篩選結(jié)果：A2B3C3D370%乙醇8倍量，每次2 h，提取3次。

2.5 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品,按2.3項(xiàng)下阿魏酸的含量測定方法平行測定5分。平均吸收度值為0.412，RSD=0.103%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

3 結(jié)論

直觀分析表明，本實(shí)驗(yàn)研究設(shè)計(jì)合理[4-5]，數(shù)據(jù)真實(shí)，結(jié)果可信。綜合考慮生產(chǎn)實(shí)際情況，因試驗(yàn)指標(biāo)(阿魏酸和出膏率)產(chǎn)量越大越好,因素A水平2的值最大，所以A因素取水平2好；類似分析，因素B取水平3好,但兼顧低碳、節(jié)能、時間等因素，取水平1；同理，因素C、因素D均為次要因素，出于同樣考慮,因素C取水平1,因素D取水平2。從而得到最佳試驗(yàn)方案為A2B1C1D2，即加70%乙醇4倍量，每次提取1 h提取2次。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010.426.

[2]顧曉路,梁茂新.安眠顆粒結(jié)構(gòu)優(yōu)化的步驟與方法[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2008,14(6):22-24.

[3]劉齊林,李雪婷,王沛,等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選痛風(fēng)寧的最佳提取工藝[J].遼寧中醫(yī)雜志,2011.38(5):959-960.

[4]王沛.制藥工藝學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2009:72.

[5]陸守曾.高等數(shù)學(xué)(下冊)[M].上海:上海科技出版社,2006:223-236.