云芝糖肽聚氰基丙烯酸正丁酯納米囊的制備工藝優(yōu)選＊

吳 柱，李建明，肖海英，馬 寧

(長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410219)

云芝糖肽(polysaccharpetide，PSP)是從擔(dān)子菌綱多孔菌科云芝屬真菌云芝或培養(yǎng)的菌絲中提取的水溶性大分子多糖類，具有抗腫瘤[1－5]、抗乙型肝炎病毒[6－7]、鎮(zhèn)痛[8]等作用。云芝糖肽對(duì)肝臟有很好的生物活性，臨床上被廣泛應(yīng)用于治療乙型病毒性肝炎，并作為肝癌的輔助治療藥物。但云芝糖肽干膏的引濕性強(qiáng)，現(xiàn)有制劑多為片劑、膠囊等口服制劑，存在吸收不佳、生物利用低、穩(wěn)定性不強(qiáng)等問(wèn)題。筆者擬將云芝糖肽制成載藥納米囊，并對(duì)界面聚合法制備云芝糖肽聚氰基丙烯酸正丁酯納米囊(PSP－PBCA－NC)的工藝進(jìn)行了初步優(yōu)選，報(bào)道如下。

1 儀器和試藥

AG285型電子天平(梅特勒－托利多上海有限公司)；Seastar星海旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(寧波科生儀器廠無(wú)錫市星海王生化設(shè)備有限公司)；KS－6000型超聲清洗儀(寧波科生儀器廠)；納米粒度分析儀Zetasizer 1000HSA(Malvern)；752型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海光譜)；L8－80M型低溫超速離心機(jī)(美國(guó)Beckman公司)。相對(duì)分子質(zhì)量在7萬(wàn)～15萬(wàn)的云芝糖肽精品，由云芝糖肽粗粉提純；氰基丙烯酸正丁酯(廣州白云醫(yī)用膠總公司)；泊洛沙姆188(由沈陽(yáng)藥科大學(xué)提供)；苯酚、硫酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、磷鎢酸均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 納米囊制備

將氰基丙烯酸正丁酯、乙酸乙酯溶解于丙酮，混合均勻，作為有機(jī)相；將云芝糖肽、泊洛沙姆188溶于水，混合均勻，作為水相。將有機(jī)相在磁力攪拌下以低速均勻滴加到水相中，約2 h滴加完畢，再繼續(xù)磁力攪拌2 h，得含云芝糖肽的聚氰基丙烯酸正丁酯納米囊混懸液，于35℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機(jī)溶劑并將整個(gè)體系濃縮，得均勻的不含有機(jī)溶劑的PSP－PBCA－NC混懸液。

2.2 包封率測(cè)定

本試驗(yàn)中，采用離心法提取后，通過(guò)紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定包封率[9－10]。精密量取PSP－PBCA－NC混懸液1mL，低溫超速(4℃，18 000 r/min)離心1 h，取下層沉淀，用1mL甲醇溶解，超聲30min，低溫超速離心20min，取上層清液，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，得納米囊內(nèi)總糖量(W1)。另精密量取PSP－PBCA－NC混懸液0.2mL，以甲醇0.8mL溶解，超聲30min，低溫超速離心20min，取上層清液，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，得混懸液中總糖量(W2)。采用苯酚硫酸法反應(yīng)，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定云芝糖肽總糖量[2005年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄ⅣA]。包封率(%)=(W1/ 5W2)×100%。

2.3 正交試驗(yàn)

按單因素試驗(yàn)初選的制備條件和工藝，以包封率為考察指標(biāo)，選取藥物與氨基丙烯酸正丁酯用量比(因素A)、乙酸乙酯與氨基丙烯酸正丁酯用量比(因素B)、油水兩相比(因素C)、轉(zhuǎn)速(因素D)為主要影響因素，各因素分別取3個(gè)水平，按正交試驗(yàn)表L9(34)設(shè)計(jì)各因素水平，對(duì)PSP－PBCA－NC的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。因素水平表見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)方差分析見(jiàn)表2。可見(jiàn)，4個(gè)因素對(duì)結(jié)果的影響均顯著，最佳處方工藝組合為A1B3C1D3。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

表2 正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果

2.4 處方工藝參數(shù)與驗(yàn)證試驗(yàn)

正交試驗(yàn)確定的最佳處方工藝為A1B3C1D3，即氰基丙烯酸正丁酯用量為0.1 mL，藥物用量為20 mg，乙酸乙酯用量為2 mL，油水兩相比為1∶1，轉(zhuǎn)速為18 000 r/min。根據(jù)最佳處方工藝制備3批PSP－PBCA－NC樣品，測(cè)定平均包封率，結(jié)果為83.7%。

2.5 粒徑測(cè)定

取適量PSP－PBCA－NC樣品，稀釋后用激光粒度分析儀進(jìn)行掃描，粒徑度分布見(jiàn)圖1。結(jié)果平均粒徑為268.5 nm，粒徑分布范圍為203.7～312.6 nm。

圖1 PSP－PBCA－NA粒徑分布圖

2.6 掃描電鏡觀察

將PSP－PBCA－NC用1.5%磷鎢酸染色，以掃描電鏡觀察其形態(tài)，結(jié)果見(jiàn)圖2。可見(jiàn)PSP－PBCA－NC為球形實(shí)體，表面有一層薄薄的聚氰基丙烯酸正丁酯膜。

3 討論

3.1 溶劑對(duì)納米囊粒徑分布的影響

試驗(yàn)中篩選出非質(zhì)子性溶劑丙酮作為有機(jī)溶劑。若選用質(zhì)子性溶劑如乙醇，制得的云芝糖肽納米囊出現(xiàn)兩種粒徑分布，這是由于質(zhì)子性溶劑的陰離子X(jué)O－與水的OH－分別作為聚合反應(yīng)的引發(fā)劑，從而造成粒徑分布不均。

圖2 PSP－PBCA－NA掃描電鏡圖

3.2 表面活性劑對(duì)納米囊粒徑分布的影響

單因素篩選試驗(yàn)中，曾選擇吐溫80作為表面活性劑，結(jié)果納米囊容易聚集，導(dǎo)致粒徑變大。吐溫80能降低納米囊表面張力，使納米囊聚集，粒徑變大。

3.3 有機(jī)溶劑含量對(duì)納米囊粒徑分布的影響

采用界面聚合法制備的PBCA－NC體系中含有有機(jī)溶劑，需通過(guò)濃縮將其除去，同時(shí)以提高納米囊在懸浮液中的含量。經(jīng)試驗(yàn)，室溫條件下納米囊穩(wěn)定，且濃縮后粒徑分布更趨均勻。這是由于有機(jī)溶劑丙酮具極好的水溶性，能向水相均勻擴(kuò)散，可使制成的包囊結(jié)構(gòu)不緊密，粒徑較大。

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