膽管癌相關分子及其標記物研究進展

張大輝， 程樹杰

(河北大學附屬醫院， 河北 保定 071000)

膽管癌是膽管上皮細胞的惡性腫瘤，近年來其發病率有上升趨勢［1］。目前對于膽管癌的病因研究顯示，潰瘍性結腸炎、肝膽管結石、膽總管囊腫及慢性肝炎病毒感染等因素為膽管癌的高危因素，但具體病原仍然不明［2］。隨著分子生物學的發展以及對膽管癌的發生、發展及浸潤轉移機制進行深入的研究，人們對膽管癌分子及其標記物的認識也有了很大進步。本文分別以蛋白類標記物、癌基因及抑癌基因、其他對近年來膽管癌分子及其標記物研究進展進行綜述。

1 蛋白類標志物

1.1 Tenascin蛋白:Tenascin蛋白為細胞外基質中一種高分子糖蛋白，在成熟組織中Tenascin蛋白不表達或僅有少量表達［3］。眾多研究顯示，Tenascin蛋白在多種惡性腫瘤組織中呈現出強表達，并且Tenascin蛋白的表達水平與惡性腫瘤的病理分級以及血管生成有密切的關系［4］。王林等［5］采用免疫組化方法檢測膽管癌組織和正常膽管組織的Tenascin蛋白含量，結果顯示，Tenascin蛋白在膽管癌組織中的陽性表達率為81.8%，但是在正常膽管組織中Tenascin蛋白的陽性表達率為0。Tenascin蛋白在病理分級I級、II級和III級的陽性率分別為71.4%、82.4%和88.9%，但是差異無統計學意義(P＞0.05)。因此，Tenascin蛋白可以作為膽管癌的腫瘤標志應用于臨床診斷，但Tenascin蛋白的表達與膽管癌的病理分級無關。

1.2 Fasin蛋白:Fascin蛋白為一種細胞骨架蛋白，其與細胞的運動、粘附以及細胞間的信息交流中發揮重要的作用［6］。Okada等［7］研究了肝外膽管癌組織中Fascin蛋白的表達，發現Fascin蛋白在正常膽管上皮的陽性表達率為0，而在膽管癌組織中表達上調，Fascin蛋白表達上調與性別、臨床分期、靜脈浸潤有關，膽管癌組織邊緣Fascin蛋白的表達高于其它區域，提示Fascin蛋白的高表達可能與肝外膽管癌高侵襲性有關。Iguchi等［8］對肝內膽管癌組織中Fascin蛋白的表達進行研究，發現Fascin蛋白在良性病變的膽管組織不表達或低表達，但是在肝內膽管癌組織中的陽性表達率高達66.7%，差異具有統計學意義(P＜0.01)，Fascin蛋白的高表達與膽管癌的惡性程度及病人的預后存在相關性。Wonll等［9］應用免疫組化對膽管癌患者膽管癌組織中的Fascin蛋白進行測量，結果陽性表達率為56.0%，其中28.4%呈強表達，27.6%呈弱表達，Fascin蛋白的表達與組織學分級、TNM分期、淋巴浸潤、靜脈浸潤、鄰近器官浸潤有關;而與性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、區域淋巴結轉移無關，并發現Fascin蛋白在肝內與肝外膽管癌的表達對患者預后有所不同，Fascin蛋白在肝內膽管癌和肝外膽管過度表達對患者不同。

1.3 Survivin蛋白:Survivin蛋白屬凋亡抑制蛋白家族新成員，是具有抑制細胞凋亡和調節細胞分裂的雙功能蛋白。Survivin蛋白在正常組織中不表達或低表達，而在多數惡性腫瘤組織中廣泛表達。馮超等［10］應用免疫組織化學技術檢測Survivin蛋白在膽管癌、膽管癌旁組織和正常膽管組織中的表達以探討Survivin蛋白在膽管癌中的表達情況及其與膽管癌發生發展的關系。結果顯示，膽管癌組織中Survivin蛋白的陽性表達率為69.4%，而在癌旁膽管組織和正常膽管組織中未檢測到Survivin蛋白的表達，差異具有統計學意義(P＜0.01)。但是相關性分析顯示，Survivin蛋白的表達與患者的性別、年齡、腫瘤的大小、分化及是否轉移無關。劉三光等［11］研究發現，膽管癌中Survivin蛋白的陽性表達率為79.2%，而在癌旁膽管組織Survivin蛋白的陽性表達率6.7%，差異具有統計學意義(P＜0.01)，Survivin蛋白表達與患者的年齡、性別、腫瘤的原發部位、大體形態、組織學類型、分化程度、浸潤深度、以及是否伴淋巴結轉移等均無明顯相關性。以上研究均顯示出Survivin蛋白可以作為膽管癌的腫瘤標志應用于臨床診斷。

2 癌基因及抑癌基因

2.1 Ras癌基因:Ras癌基因為目前廣泛研究的癌基因之一，在多種惡性腫瘤中均顯示出Ras基因的點突變。Ras癌基因家族包括 H－ras、K－ras和 N－ras，分別位于人類的第11、12和1號染色體。Ras癌基因編碼21 000蛋白質，與G蛋白有關，并且具有GTP酶的活性。Ras基因產物可受自發性或化學性致癌的單點突變而激活，導致產生表型的惡性表現。Matsubara等［12］用PCR－SSCP法研究胰膽管異常匯合患者癌性上皮細胞及非癌性膽管上皮細胞中K－ras基因點突變，發現癌性上皮細胞K－ras基因點突變率為80%，而增生上皮和化生上皮突變率分別為58%及48%，差異具有統計學意義(P＜0.01)。Ras癌基因突變部分為第12密碼子，Lee等［13］的研究結果與上述結果一致，提示K－ras基因點突變在膽管癌形成過程中起重要作用。

2.2 C－myc癌基因:C－myc癌基因編碼的產物為P62核內蛋白，可導致細胞無限分裂，使細胞向惡性轉化。在膽管癌組織中P62的陽性表達率較高。Voravud N等［14］報道膽管癌組織中P62的陽性表達率為94%，并且染色強度和陽性表達率與細胞分化程度密切相關。李灼日等［15］研究結果表明，膽管癌組織中C－myc陽性率為87.23%，其中高分化腺癌的陽性表達率為100%，低分化腺癌的陽性表達率為60.00%，差異具有統計學意義(P＜0.05)。此外，正常膽管組織、膽管擴張癥膽管組織、癌旁膽管組織的C－myc陽性表達率與膽管癌組織比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。C－myc的陽性表達率與膽管癌的組織學分級有關，組織學分級I級膽管癌組織中C－myc的陽性表達率為100%，顯著高于II級、III級膽管癌組織，組間差異具有統計學意義(P＜0.05)。無轉移膽管癌組C－myc陽性表達率顯著高于有轉移組的陽性率高，組間差異具有統計學意義(P＜0.05)。提示C－myc的表達與膽管癌細胞分化程度、組織學分級和有無腫瘤轉移等生物學特性相關。

2.3 p53抑癌基因:p53抑癌基因是迄今為止人類腫瘤研究中研究最為廣泛的基因，幾乎涉及到50%的惡性腫瘤［16］。野生型p53基因為抗癌基因，而突變型p53基因在機體內發揮著癌基因的作用。正常人體中野生型p53基因代謝很不穩定并且細胞含量低，而突變型p53基因穩定并且可以在細胞核內積聚，因此可以檢測到突變型p53基因。突變型p53基因的檢測可以很好地反映 p53 基因突變情況［17］。Itoi等［18］別用PCR－SSCP和免疫組化的方法檢測膽道癌癥中p53的變異。結果顯示，突變型p53基因在膽管癌和膽囊癌分別為33.3% 和42.9%，60%的標本可以檢測到p53基因的過度表達，但是在良性膽道疾病均未檢測到突變型p53基因。Kang等［19］用PCR法檢測到肝內膽管癌組織中p53基因的突變率為30%，用免疫生化法檢測到肝內膽管癌組織中p53基因過度表達為25%。因此，p53基因在肝內膽管癌的發生、發展和生長方式等方面起到重要作用。

2.4 p27基因:p27基因為重要的抑癌基因，其表達水平降低導致其對CDK或cyclin/CDK復合物活性的抑制效應，使CDK的活化效應遞增，驅動細胞周期的運行，從而使細胞增殖與分裂過快、過多乃至腫瘤形成［20］。Michelangelo［21］對手術切除的肝內膽管癌、肝門部膽管癌以及周圍肝內膽管癌的p27基因進行檢測，發現肝門部膽管癌的p27基因的陽性表達率為59.1%，而外周性肝內膽管癌p27基因的陽性表達率則為88%，差異具有統計學意義(P＜0.05)。李鑄等［22］采用免疫組化方法測定肝門部膽管癌以及正常膽管組織中p27基因的表達情況以探討p27基因在肝門部膽管癌的表達及臨床意義。p27基因在肝門部膽管癌的陽性表達率為77.2%，以低表達為主。p27基因的表達與腫瘤的分化、淋巴轉移及神經浸潤顯著相關(P＜0.05)。p27基因高、低及陰性表達組的平均生存時間有顯著差異(P＜0.05)。因此，膽管癌中p27的表達是反映肝門部膽管癌生物學行為，在肝內膽管癌的發生、發展和生長方式等方面起到重要作用。

3 其它

3.1 MMP－9:基質金屬蛋白酶(MMP)是一組能夠降解細胞外基質蛋白的內肽酶的總稱，與炎癥、組織纖維化、新血管形成和腫瘤的侵襲轉移等存在相關性。MMP－9與多種惡性腫瘤有著密切的聯系，在惡性腫瘤的浸潤、轉移中發揮著重要作用［23］。汪正廣等［24］對膽管癌組織進行MMP－9檢測，膽管癌組織中MMP－9的表達顯著高于正常膽管組織以及癌旁組織。相關性分析顯示，MMP－9表達與性別、年齡、腫瘤部位及大小無關，但是與腫瘤的病理分級、TNM分期、浸潤程度和遠處轉移及手術方式有關，MMP－9表達陽性的患者一年生存率明顯低于陰性者。Jo等［25］用酶聯免疫吸附法測量膽管癌組織和正常組織中MMP－9，結果顯示膽管癌組織中的MMP－9在總蛋白中的濃度顯著高于正常組織。楊定忠等［26］應用免疫組織化學法檢測膽管癌中MMP－9的表達。結果顯示，膽管癌組織中MMP－9的陽性表達率為76.4%，正常膽管組織為16.7%，差異具有統計學意義(P＜0.01)。在膽管癌組織中，在癌巢邊緣或管腔近旁的陽性表達強度要高于其他區域。并且隨膽管癌的病理學分級和臨床分期增高，MMP－9表達有增高趨勢，此外MMP－9陽性表達的膽管癌易發生淋巴結轉移，影響患者預后。因此，MMP－9在膽管癌的發生、發展和生長方式等方面起到重要作用。

3.2 COX－2:環氧化酶－2(COX－2)是炎癥過程中催化合成前列腺素的關鍵誘導酶之一，通過參與多種腫瘤的細胞增殖、抗凋亡和血管生成、降低細胞間的粘連度，與腫瘤的發生、發展和轉移密切相關［27］。多項研究表明，COX－2在人的多種惡性腫瘤中呈現強表達，提示COX－2在惡性腫瘤的發生和發展中起著重要的作用［28］。郜朝霞等［29］采用免疫組化法檢測膽管癌中COX－2的表達，研究發現，COX－2在膽管癌組織中的表達陽性率為81.40%，而在膽管結石組織中未見表達。在膽管癌高、中分化組的COX－2陽性表達率顯著高于低分化組，轉移陽性組COX－2陽性表達率也顯著高于轉移陰性組，差異具有統計學意義(P＜0.05)。上述研究說明COX－2的高表達在膽管癌的發生、發展中也扮演重要作用。

3.3 VEGF:血管內皮生長因子(VEGF)是迄今發現的最重要的促血管生長因子，在多種腫瘤組織中均有較高水平的表達，與腫瘤的生長、轉移關系密切。郜朝霞等［29］采用免疫組化法檢測膽管癌組織的VEGF。研究結果顯示，膽管癌組織中VEGF的陽性表達率為76.74%，膽管結石組為0，差異具有統計學意義(P＜0.05)。VEGF蛋白在膽管癌中高表達提示膽管癌形成過程中伴隨VEGF的高分泌，VEGF與膽管癌的發生及生長有關。張萌等采用免疫組化法檢測膽管癌組織中VEGF與VEGF－C蛋白的表達，以探討VEGF與VEGF－C蛋白在膽管癌的表達及其與臨床病理特征的關系。膽管癌VEGF和VEGF－C蛋白的表達率分別為65.3%和69.4%，并且VEGF和VEGF－C蛋白的高表達與膽管癌淋巴結轉移及分化程度有關。因此，VEGF和VEGF－C蛋白的表達與膽管癌侵襲轉移有關。

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