靈芝多糖對雞新城疫疫苗抗體滴度的影響

孫秋艷 韓偉濤 王彩霞

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靈芝多糖對雞新城疫疫苗抗體滴度的影響

孫秋艷①韓偉濤②王彩霞①

（①山東畜牧獸醫職業學院 山東 濰坊 261061 ②山東濰坊市海洋環境監測中心）

90只14日齡公雞隨機均分成3組，用新城疫LaSota弱毒疫苗點眼滴鼻免疫的同時，2個試驗組分別肌肉注射高、低劑量的靈芝多糖溶液，注射1次/d，連續注射3次，對照組注射生理鹽水。各組分別于免疫后7、14、21、28、35、42d翼下靜脈采血，分離血清，用微量血凝抑制(HI)測定新城疫抗體效價。結果表明，靈芝多糖高、低劑量組的HI抗體效價明顯高于對照組；靈芝多糖的高劑量組抗體效價明顯高于低劑量組；表明靈芝多糖對新城疫疫苗的抗體滴度有明顯的增強作用，靈芝多糖高劑量組對新城疫疫苗抗體滴度的增強作用更顯著。

靈芝多糖 新城疫疫苗 抗體滴度

目前的養禽生產中長期大量使用抗生素、雌性激素，但長期使用這樣的藥物帶來諸多弊端，如引起雞腸道菌群失調、耐藥株增多、免疫功能下降、畜產品中藥物殘留嚴重超標等。所以天然、低毒、無藥物殘留的中藥成了醫學和獸醫學領域都是倍受關注的課題，近年來中藥活性成分的研究成為中獸藥的研究重點。許多中藥活性成分與疫苗合用，可以增強機體的免疫功能和抗病能力[1、2，3]，使抗體在血液中或粘膜表面維持更長時間，發揮持久的免疫效果。大量研究表明，靈芝多糖(GLP)是一種良好的中藥活性成分，現代藥理學和臨床研究表明，GLP具有多種生理活性和藥理作用。GLP能顯著提高吞噬細胞的吞噬能力，增強體液免疫和細胞免疫功能[4,5,6,7]，還能提高紅細胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性[8,9]，對人體有顯著的抗腫瘤作用、抗癌[10,11]作用。GLP還具有免疫調節作用、抗衰老作用[12]、降血糖作用、降血脂的作用、抗氧化作用[12]、保護肝臟[13]和鎮痛作用等[14,15]。本試驗利用GLP的免疫調節作用，與新城疫LaSota弱毒疫苗配合使用，來探討靈芝多糖對雞新城疫疫苗免疫雞血清抗體滴度的影響，通過測定新城疫抗體效價和免疫器官指數的動態變化，評價GLP糖對ND疫苗的免疫增強效果，旨在為開發中藥活性成分免疫增強劑提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 GLP的提取 靈芝購自山東省濰坊市藥材公司。按照常規水提醇沉法提取：劉英梅等人[11]稱取靈芝200g，研磨至粉末，加水2000ml，80℃水浴3h，重復4次。合并4次濾液3000r/min離心20min。所得上清液濃縮至1/5體積，濃縮液加入3倍量95%乙醇，過夜，棄上清，3000r/min離心20min，所得沉淀真空干燥，得GLP7.12g。使用前用雙蒸水配制成0.07g/ml和0.035g/ml，高壓滅菌，4℃冰箱保存備用。

1.1.2 新城疫LaSota弱毒疫苗 購自齊魯動物保健品有限公司，生產批號：150252007；新城疫標準抗原和陽性血清，由山東畜牧獸醫職業學院防檢系微生物與傳染病試驗室提供。

1.1.3 試驗動物 由山東畜牧獸醫職業學院動物飼養房提供1日齡海蘭褐公雞，隔離飼養至14日齡，試驗期間的飼養管理按常規方法進行。

1.2 方法

1.2.1 試驗設計與分組 海蘭褐公雞養至14日齡(平均母源抗體效價為4 log2，隨機分為3組，每組30只，分別用新城疫LaSota弱毒疫苗點眼滴鼻首免，3羽份/只，2個試驗組為靈芝多糖的高(GLPH)、低(GLPL)劑量組，分別肌肉注射0.07g/ml和0.035g/ml的GLP，0.1ml/羽，1次/d，連續注射3d，對照組(Control)注射等量生理鹽水；28日齡每只頸部皮下注射新城疫LaSota弱毒疫苗二免。

1.2.2 雞新城疫HI抗體滴度的測定 于免疫后7、14、21、28、35、42d翼下靜脈采血0.5ml，2000r/min離心5min分離血清，用微量血凝抑制法測定雞新城疫HI抗體滴度。

1.2.3 數據處理 所有試驗數據采用SPSS10.0統計軟件進行單因素方差分析和Duncan’s多重比較，以P=0.05為顯著水平。試驗結果以平均值±標準差表示。

2 結果

2.1 GLP對新城疫抗體滴度的影響

見表1。與對照組相比，注射GLP的試驗組產生抗體的速度要比對照組快，在免疫后第14d就能達到高水的抗體。所有注射GLP的試驗組的抗體滴度均高于對照組，試驗組在免疫后14、21、28、35、42d的同期抗體水平顯著高于對照組(P<0.05)，高劑量組的抗體水平顯著高于低劑量組(P<0.05)。免疫后第14d試驗組的抗體滴度顯著高于對照組，免疫后第21d高劑量組抗體水平顯著高于低劑量組(P<0.05)，免疫28d所有組抗體滴度都達到最高峰值，免疫后42d所有組的抗體滴度都開始降低，試驗組仍維持高水平的抗體。

注：同列數據肩標字母不同表示差異顯著(P<0.05)，字母相同表示差異不顯著(P>0.05)。

3 結論

體液免疫是機體抗御傳染病的主要因素之一，抗體是介導體液免疫的重要分子，抗體滴度的高低直接反應機體的體液免疫狀態。在免疫后第7天GLP驗組的抗體效價都高于對照組，但差異不顯著，其原因可能是由于GLP作為免疫增強劑作用于機體免疫器官幫助機體產生高水平的抗體需要一個過程。在免疫后14d試驗組抗體水平均顯著高于對照組，說明GLP可以加快抗體的產生速度。在免疫后28d靈芝多糖試驗年組的抗體效價達到最高峰，GLP高劑量組的抗體滴度為12.3Log2，比對照組高3.7 Log2，且從21d開始到第42d都維持高水平的抗體滴度；低劑量組的抗體滴度為11.3 Log2，比對照組高2.7 Log2，同高劑量組一直到第42d都維持高水平的抗體滴度，說明GLP能夠延長較高抗體滴度的維持時間，對雞新城疫疫苗的免疫效果有顯著的增強作用。在免疫后第21d開始高劑量組的抗體滴度顯著高于低劑量組，說明在一定限度內，新城疫抗體滴度會隨著GLP的注射量的增加而增加。本試驗結果表明，GLP不僅可以加快抗體的產生速度，還可以顯著提高機體產生抗體的水平，明顯改善機體的體液免疫機能。GLP在試驗所選取的質量濃度范圍內高劑量組比低劑量組的免疫增強效果好，為進一步研究GLP的免疫增強效果提供了理論依據。

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（2012–04–19）

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