3種化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)測定血清糖鏈抗原125的比較

顏 威，張巧娣，謝而付（.江蘇省徐州睢寧縣官山鎮(zhèn)黃圩衛(wèi)生院 00；.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 009）

很多的學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)糖鏈抗原125（CA125）不僅在卵巢癌患者外周血會(huì)升高，在消化系統(tǒng)腫瘤、呼吸系統(tǒng)腫瘤以及白血病均會(huì)升高，且與腫瘤的化療耐受相關(guān)，對(duì)腫瘤患者具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值［1-5］。目前，常用于CA125檢測的方法有酶標(biāo)記法、放射免疫法以及化學(xué)發(fā)光法，因化學(xué)發(fā)光法檢測CA125具有高度敏感性和特異性在臨床廣泛應(yīng)用。許多大的試劑廠商都會(huì)開發(fā)CA125化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒。由于缺乏可溯源的一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品，同時(shí)不同廠商的檢測系統(tǒng)采用不同的檢測方法，所使用的發(fā)光底物也不同，這就可能造成相同的樣品在不同系統(tǒng)檢測時(shí)結(jié)果不一致，對(duì)臨床疾病的診斷及預(yù)后判斷帶來不便。因此，本研究的目的是對(duì)本科室3種常用的CA125檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果進(jìn)行比較，并確定其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年3月南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院門診及住院患者100例，其中男4例，女96例，年齡21～98歲，中位年齡36歲。

1.2 標(biāo)本收集 所有患者早晨空腹抽取靜脈血3 mL，放入帶有分離膠的干燥管，檢測前進(jìn)行3 000 r／min離心5min。

1.3 試劑與儀器 CA125化學(xué)發(fā)光法檢測試劑盒分別為Beckman公司、Roche公司和Siemens Immulite公司商品化產(chǎn)品，分別采用各自廠家的配套檢測系統(tǒng)進(jìn)行檢測，其方法分別為化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法（CLEIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫檢測法（ECLIA）和直接發(fā)光免疫分析法（CLIA），所使用儀器的型號(hào)分別為Beckman UniCel DXI 800、Roche MODULAR E 170和Siemens Immulite 1000，儀器的校準(zhǔn)分別采用各自廠家的校準(zhǔn)物進(jìn)行校準(zhǔn)。

1.4 血清CA125檢測 不同廠家的化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)均按照每個(gè)儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作，每個(gè)檢測系統(tǒng)會(huì)按照校準(zhǔn)曲線自動(dòng)算出血清CA125的含量，所有的患者血清標(biāo)本在采血當(dāng)天進(jìn)行檢測，每日標(biāo)本檢測前，均進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控品檢測，室內(nèi)質(zhì)控品在控后再進(jìn)行臨床樣本檢測，3種CA125檢測系統(tǒng)的生物參考區(qū)間均為小于35 U／mL。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用STATA 9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，因?yàn)楦鹘M檢測結(jié)果均為非正態(tài)分布，因此等級(jí)相關(guān)采用Spearman秩相關(guān)分析，兩組樣本中位數(shù)比較采用Mann－Whitney U檢驗(yàn)，多組樣本間中位數(shù)比較采用Kruskal－Wallis H檢驗(yàn)，各組樣本間陽性率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 3種檢測系統(tǒng)的相關(guān)性 分別對(duì)3種檢測系統(tǒng)的數(shù)據(jù)進(jìn)行Spearman秩相關(guān)性分析，結(jié)果顯示3組結(jié)果中任意兩組之間均存在相關(guān)性，其中CLEIA組與ECLIA組的相關(guān)系數(shù)為0.948（P＜0.05），CLEIA 組與 CLIA 組的相關(guān)系數(shù)為0.932（P＜0.05），ECLIA組與 CLIA組的相關(guān)系數(shù)為0.947（P＜0.05）。

2.2 3種檢測系統(tǒng)的結(jié)果比較 CA125在患者中呈偏態(tài)分布，因此采用Kruskal－Wallis檢驗(yàn)對(duì)3組樣本間中位數(shù)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示3組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)一步采用Mann－Whitney檢驗(yàn)對(duì)3組樣本中位數(shù)進(jìn)行兩兩比較，結(jié)果顯示CLEIA組顯著高于ECLIA組與CLIA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而ECLIA組與CLIA組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 3種檢測系統(tǒng)陽性率比較 以CA125＜35 U／mL為正常參考區(qū)間，≥35 U／mL即判斷為陽性，對(duì)100例檢測結(jié)果進(jìn)行分析，CLEIA組有76例陽性，陽性率為76%（76／100），ECLIA組有58例陽性，陽性率為58%（58／100），CLIA組有53例陽性，陽性率為53%（53／100），CLEIA組陽性率顯著高于ECLIA組與CLIA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而ECLIA組CLIA組陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

CA125自1981年被發(fā)現(xiàn)后，其檢測方法從經(jīng)典的放射免疫分析和酶免疫分析技術(shù)，發(fā)展到今天已被廣泛應(yīng)用的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，也有學(xué)者使用生物素－親和素檢測系統(tǒng)，其實(shí)質(zhì)都屬于免疫標(biāo)記檢測技術(shù)范疇，只是所標(biāo)記的檢測基團(tuán)不同［6］。但是，迄今為止，各臨床實(shí)驗(yàn)室尚未能建立起標(biāo)準(zhǔn)化的免疫檢測系統(tǒng)，這也就限制了各實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的檢測結(jié)果的統(tǒng)一。此外，腫瘤患者體內(nèi)其他的高濃度糖鏈蛋白可能會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)，不同試劑抗體中其抗原結(jié)合位點(diǎn)特異性識(shí)別能力的高低，以及患者體內(nèi)存在嗜異性抗體可競爭性結(jié)合CA125，而不同檢測系統(tǒng)排除上述干擾的能力差異也較大，從而導(dǎo)致測定值的差異。這種差異不僅限制了臨床資料的對(duì)比分析，同時(shí)也困擾著臨床實(shí)踐指導(dǎo)方針的統(tǒng)一制定。

本研究中，作者應(yīng)用3種常用的化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)，平行測定100份臨床患者的空腹血清CA125水平，從統(tǒng)計(jì)描述來看，測定結(jié)果在不同的系統(tǒng)之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CLEIA系統(tǒng)組顯著高于ECLIA組與CLIA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而ECLIA組與CLIA組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是該3種檢測系統(tǒng)測定結(jié)果之間又具有密切的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r的范圍為0.932～0.948，與國外報(bào)道相近［7］，這說明 CLEIA 檢測系統(tǒng)在檢測CA125的水平明顯高于其他檢測系統(tǒng)，在臨床應(yīng)用上與另外兩種檢測系統(tǒng)缺乏可比性，不能互相通用。

隨后，作者使用3種檢測系統(tǒng)，以CA125＜35 U／mL為正常參考區(qū)間，對(duì)100例患者的CA125檢測結(jié)果進(jìn)行分析，CLEIA組陽性率為76%（76／100），ECLIA組陽性率為58%（58／100），CLIA組陽性率為53%（53／100），CLEIA 組陽性率顯著高于ECLIA組與CLIA組，這說明CLEIA法檢測CA125的檢測敏感性高于其他組，但這并不意味著對(duì)于疾病的診斷敏感性高于其他方法，因?yàn)檫@需要結(jié)合患者的臨床資料進(jìn)行判斷，因?yàn)榭赡軙?huì)存在假陽性結(jié)果。

國外的研究表明，造成不同的檢測系統(tǒng)之間的檢測數(shù)據(jù)不同的原因是多方面的，主要有檢測系統(tǒng)的分析靈敏度、特異性、線性范圍以及基質(zhì)效應(yīng)等因素。解決措施需要建立和完善高度標(biāo)準(zhǔn)化、特異性的檢測參考系統(tǒng)，以及使用各檢測系統(tǒng)與參考方法進(jìn)行比對(duì)，這也成為相關(guān)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。

綜上所述，由于現(xiàn)有的CA125檢測系統(tǒng)之間數(shù)據(jù)一致性不是很好，作者建議對(duì)CA125建立標(biāo)準(zhǔn)化的參考方法，現(xiàn)有的檢測系統(tǒng)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)化的參考系統(tǒng)進(jìn)行比對(duì)，使得各檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果趨于統(tǒng)一，從而更好地在臨床上使用。

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